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| 1 | 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备显示文摘本研究旨在表达施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)的核衣壳蛋白(N),进而制备其多克隆抗体。以SBV(BH80株)的RNA为模板,RT-PCR扩增N基因序列,并将其克隆至原核表达载体pET-28a-c(+)中,获得pET-28a-SBV-N重组质粒。经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达HisSBV-N融合蛋白。在非变性条件下用Ni-NTA柱纯化His-SBV-N,并以此为抗原免疫新西兰大白兔制备多抗。经免疫亲和层析纯化后,利用Western blot和间接免疫荧光对多抗进行鉴定。结果表明:(1)His-SBV-N融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中同时以可溶性和包涵体2种形式表达,相对分子质量约为30ku;(2)制备的多抗效价高达1∶64 000。该多抗不仅能与His-SBV-N融合蛋白发生特异性反应,而且还能识别SBV的不同毒株,但与布尼亚病毒科内亲缘关系最近的沙门达病毒(Shamonda virus)、道格拉斯病毒(Douglas virus)和赤羽病病毒(Akabane virus)的核衣壳蛋白存在交叉反应。His-SBV-N融合蛋白及其多抗的成功制备,为施马伦贝格病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。 | 张永宁 吴绍强 吕继洲 冯春燕 王彩霞 袁向芬 邓俊花 林祥梅 Wernike Kerstin | 2013 | 畜牧兽医学报2013，44，10： | 11 |
| 2 | 施马伦贝格病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析显示文摘目的制备施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(mAb)并分析其特性。方法将SBV N基因分别构建至pET-28a-c(+)和pMAL-c5X载体中,在大肠杆菌中诱导表达带组氨酸标签的融合蛋白His-SBV-N和带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白MBP-SBV-N,分别用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)树脂和直链淀粉树脂纯化两种蛋白;用纯化的His-SBVN免疫BALB/c小鼠制备mAb,以MBP-SBV-N为包被抗原间接ELISA筛选分泌mAb的杂交瘤细胞和测定mAb效价,利用蛋白G琼脂糖凝胶从腹水中纯化mAb;应用Western blot和间接免疫荧光分析mAb的反应性和特异性。结果筛选并纯化出1株抗SBV的mAb(命名为1F2),效价为1∶32 000,重链亚型为IgG2α,轻链为κ;1F2既能与重组SBV N蛋白发生反应,又能识别SBV,但与布尼亚病毒科内亲缘关系较近的沙门达病毒、道格拉斯病毒和赤羽病病毒的N蛋白存在交叉反应,而与裂谷热病毒N蛋白无交叉反应。结论成功制备了抗SBV核衣壳蛋白的mAb,为SBV的血清学检测提供了工具。 | 张永宁 吴绍强 Kerstin WERNIKE 吕继洲 冯春燕 林祥梅 | 2014 | 细胞与分子免疫学杂志2014，30，3： | 7 |
| 3 | Evaluating the protective efficacy of a trivalent vaccine containing Akabane virus,Aino virus and Chuzan virus against Schmallenberg virus infection显示文摘 | Hechinger S Wernike KBeer M | 2013 | Vet Res2013，44，1： | 1 |
| 4 | Development of apan-Simbu real time RT-PCR for the detection of Simbu serogroup viruses and comparison with SBV diagnostic PCR systems显示文摘 | Fischer M Schirrmeier H Wernike K | 2013 | Virol J2013，10，： | 1 |
| 5 | Inactivated Schmallenberg virus prototype vaccines显示文摘 | Wernike K Nikolin V M Hechinger S | 2013 | Vaccine2013，31，35： | 1 |
| 6 | Ef ect of reduced oxygen tension and long-term mechanical stimulation on chondrocyte-polymer constructs显示文摘 | Wernike E Li Z Alini M | | 0，，02： | 1 |
| 7 | VEGF incorporated into calcium phosphate ceramics promotes vascularisation and bone formation in vivo显示文摘 | Wernike E Montjovent MO Liu Y | | 0，，： | 1 |
| 8 | Propagation of Pulse of Trains Through a Random Medium, IEEE Trans 显示文摘 | LIU C H WERNIK A W YEH K C | 1974 | Antennas Propaga1974，20，： | 1 |
| 9 | Real-time motion compensation, image formation and image enhancement of moving targets in ISAR and SAR using S-method-based approach 显示文摘 | Thayaparan T Stankovic L Wernik C | 2008 | lET Signal Processing2008，2，3： | 1 |
| 10 | VEGF incorporated into calcium phosphate ceramics promotes vascularisation and bone formation in vivo显示文摘 | Wernike E Montjovent MO Liu Y | 2010 | Eur Cell Mater2010，19，： | 1 |
| 11 | A support vector machine approach for detection of microclassification显示文摘 | El-Naqa I Yang Y Wernik M | 2002 | IEEE Trans Med Imag2002，21，12： | 1 |
| 12 | Detection and typ- ing of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus by multiplex real-time rt-PCR显示文摘 | Wernike K Hoffmann B Dauber M | 2012 | PLoS One2012，7，38： | 1 |
| 13 | Transmission of Schmallenberg Virus during Winter,Germany显示文摘 | Wernike K Kohn M Conraths F J | 2013 | Emerg Infect Dis2013，19，10： | 1 |
| 14 | Infectious Schmallenberg Virus from Bovine Semen,Germany显示文摘 | Schulz C Wernike K Martin Beer M | 2014 | Emerg Infect Dis2014，20，2： | 1 |
| 15 | Lack of evidence for the presence of SchmaRenbeg virus in mosquitoes in Germany, 2011 显示文摘 | Wernike K Jost H Becker N | 2014 | Parasites Vectors2014，7，1： | 1 |
| 16 | Detection and typing of highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus by multiplex real-time RTPCR显示文摘 | Wernike K Hoffmann B Dauber M | | 0，，06： | 1 |
| 17 | VEGF incorporated into calcium phosphate ceramics promotes vascularisation and bone formation in vivo显示文摘 | Wernike E Montjovent MO Liu Y | 2010 | Eur Cell Mater2010，19，： | 1 |
| 18 | Low-angle normal faults in the Basin and Range province: Nappe tectonics in an extending orogen显示文摘 | | 1981 | Nature1981，291，5817： | 1 |
| 19 | Uniform-sense normal simple shear of the continental lithosphere显示文摘 | | 1985 | Canadian Journal of Earth Sciences1985，22，1： | 1 |
| 20 | Acoustic waves in the ionospheric F region produced by severe thunderstorms显示文摘 | | 1992 | Radio Science1992，27，4： | 1 |
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