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| 1 | 过量表达沙冬青巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI提高大肠杆菌低温与热胁迫抗性显示文摘沙冬青是我国北方内蒙古荒漠地区特有的常绿阔叶灌木,具有很强的抗低温、干旱、盐碱能力,是重要的抗逆基因资源植物.将从低温诱导的沙冬青幼苗中克隆获得的巯基蛋白酶抑制剂基因AmPI亚克隆后构建到原核表达载体pTWIN1上,得到重组表达载体pT-PI,双酶切及测序结果证明pT-PI已经构建成功.将pT-PI转入大肠杆菌ER2566中,经异丙基β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,SDS-PAGE电泳检测发现有Mr35×103的目的融合蛋白表达,与预测结果一致,其中以在37℃诱导3~4h条件下表达量最高,表明目的基因AmPI在大肠杆菌中得到了成功表达.分别测定了低温(0℃)和热胁迫(50℃)条件下AmPI宿主菌的生存能力,结果表明AmPI的表达能提高宿主菌的存活率,可能是AmPI对细胞具有保护功能. | 刘瑞玲 刘美芹 史军娜 陈玉珍 卢存福 | 2010 | 应用与环境生物学报2010，16，3： | 18 |
| 2 | 荞麦生物活性物质的研究进展显示文摘荞麦是一种古老的杂粮作物,在世界一些国家和高寒地区都有种植,在某些地区还是当地的主要粮食作物。由于它的化学和生物学成分独特,目前在食品和医药方面的应用前景十分广阔。本文对其生物活性物质,尤其蛋白酶抑制剂的理化性质及其功能等进行了综述。 | 赵飞 王转花 | 2008 | 食品与药品2008，10，1： | 16 |
| 3 | 野生型和突变型荞麦蛋白酶抑制剂的活性比较及抗肿瘤功能分析显示文摘运用定点突变技术研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)的作用位点,先后构建了R45A-aBTI和R45F-fBTI两个突变体.抑制活性测定显示,aBTI和fBTI均丧失了胰蛋白酶抑制活性,却分别增加了对弹性蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的抑制活性,确定Arg45为野生型rBTI的作用位点.稳定性分析表明,rBTI、aBTI和fBTI均具有很高的热稳定性及酸碱稳定性.采用MTT比色法分别检测野生型和突变型抑制剂对肿瘤细胞生长的抑制作用.结果表明,突变前后的3种抑制剂对HL-60和EC9706细胞的生长均显示出很强的抑制作用,并且具有明显的浓度依赖性和时间依赖性.通过研究不仅确定了rBTI的作用位点,而且获得了两种新型蛋白酶抑制剂,且作用位点的改变并不影响其对肿瘤细胞的生长抑制作用.为进一步研究胰蛋白酶抑制剂的结构与功能的关系以及抗肿瘤药物的研制提供了新的思路. | 田欣 李晨 李玉英 王转花 | 2010 | 生物化学与生物物理进展2010，37，6： | 9 |
| 4 | 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对人肝癌细胞的凋亡及半胱氨酸天冬酶活性的影响显示文摘先前的研究表明,基因重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)具有诱导不同肿瘤细胞凋亡的作用.为了揭示其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机理,从基因水平上探讨与凋亡有关的分子事件,本研究用不同浓度的rBTI体外作用于人肝癌细胞HepG2后,采用MTT比色法检测抑制剂对HepG2细胞的抑制率,用DNA凝胶电泳和细胞核的形态学观察检测HepG2细胞的凋亡.结果表明,rBTI在体外能够明显抑制HepG2细胞的增长,并诱导细胞凋亡.另外,细胞凋亡与Bcl-2/Bax mRNA水平有关.通过RT-PCR检测发现,细胞经过rBTI处理后,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA水平下调,促凋亡基因Bax mRNA有所上调,而对照GAPDH无变化.对HepG2细胞中Fas/Fas配体及半胱氨酸天冬酶(caspase)的研究证明,细胞经过rBTI处理后,对死亡受体Fas mRNA没有影响;rBTI可明显激活caspase-3和caspase-9酶活性,对caspase-8活性几乎无影响.上述结果表明,rBTI对HepG2细胞具有明显的诱导凋亡作用,其诱导细胞凋亡的机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关,未涉及Fas/Fas配体途径. | 李芳 李玉英 白崇智 田欣 张政 王转花 | 2009 | 中国生物化学与分子生物学报2009，25，2： | 8 |
| 5 | Potato Ⅰ型蛋白酶抑制剂rBTI及其突变体的表达、纯化和活性研究显示文摘荞麦胰蛋白酶抑制剂(BTI)属于丝氨酸蛋白酶抑制剂Potato I家族,典型构象中有1段暴露在分子外侧的结合区,该区内P1'、P2、P6'与P8'位的氨基酸残基具有高度保守性.本文依据近期解析的rBTI晶体结构以及rBTI与胰蛋白酶复合物晶体结构信息,对rBTI中的P2和P8'位氨基酸进行突变,构建了pExSecI-Bti-P44T和pExSecI-Bti-W53R重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,通过Resource Q阴离子交换层析和Superdex G 75 HR 10/300凝胶柱进行分离纯化后,测定了rBTI及其突变体对胰蛋白酶的抑制常数,以及它们对HepG2细胞内的蛋白酶体和细胞增殖的抑制作用.实验结果显示,rBTI的44和53位分别突变为Thr和Arg后,Ki分别为2.91×10-9mol/L和2.97×10-7mol/L,前者较rBTI(Ki=3.56×10-8 mol/L)降低1个数量级,而后者较rBTI升高1个数量级.功能分析显示,rBTI及2种突变体对HepG2细胞内的蛋白酶体基本没有抑制作用,但是它们都保留了对HepG2细胞增殖的抑制活性.这些结果揭示,作为一种特异的胰蛋白酶抑制剂,rBTI分子中的保守区域氨基酸残基虽然对胰蛋白酶的抑制作用有显著影响,但并不影响其抑制肿瘤细胞的增殖,仍能发挥其原有的生物学功能. | 崔晓东 李玉英 李晨 王转花 | 2012 | 中国生物化学与分子生物学报2012，28，4： | 8 |
| 6 | 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂诱导肝癌细胞H_(22)凋亡的作用及其机制显示文摘为了研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)诱导癌细胞凋亡的作用及其机制,采用细胞培养技术,以肝癌细胞系H22为靶细胞,以不同浓度的rBTI体外处理细胞不同时间后,采用MTT检测、DNA电泳分析、细胞核形态学观察、细胞色素c检测、caspases活性检测等方法测定rBTI在体外诱导肝癌细胞H22凋亡的作用。结果显示rBTI能够在体外特异性地抑制H22细胞的生长,诱导H22细胞凋亡,随着rBTI浓度及作用时间的增加,呈现剂量和时间依赖性效应。经rBTI处理的细胞可导致细胞色素c从线粒体释放到细胞质中,并能增强caspase-3、caspase-8、caspase-9的活性。结果表明,rBTI能特异性地诱导H22细胞凋亡,其机制与caspase-3依赖性凋亡调节信号通路有关。 | 白崇智 李玉英 李芳 张政 王转花 | 2009 | 细胞生物学杂志2009，31，1： | 7 |
| 7 | rBTI通过上调PTEN的表达抑制Hep G2细胞增殖显示文摘磷酸酶及张力蛋白的同源基因(PTEN)是一种抑癌基因,可以调控细胞的增殖,与癌症的发生和发展息息相关。本研究采用MTT法和流式细胞术分别检测了重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(r BTI)对人肝癌细胞株Hep G2细胞的增殖以及周期的影响。免疫荧光及Western印迹法检测了PTEN和p-PTEN的亚细胞定位及蛋白表达的变化。采用q RT-PCR及Western印迹法检测了周期相关蛋白的表达。旨在探究PTEN和p-PTEN在r BTI抑制Hep G2细胞增殖和周期阻滞中的作用。结果表明,r BTI能显著抑制Hep G2细胞增殖,将细胞周期阻滞在G0/G1期,并呈时间和剂量依赖性;r BTI作用于Hep G2后,可显著上调PTEN和p-PTEN的表达。同时发现,p-PTEN主要分布于细胞核中,能与核仁发生共定位;周期相关蛋白检测表明,细胞内p53、p21转录水平和蛋白水平均增加。综上所述,r BTI通过上调PTEN的表达,使得细胞周期阻滞于G0/G1期,进而抑制Hep G2细胞的增殖。 | 任荣 崔晓东 王转花 | 2016 | 中国生物化学与分子生物学报2016，32，2： | 4 |
| 8 | 重组荞麦rBTI的多克隆抗体制备及鉴定显示文摘目的:制备重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)的多克隆抗体。方法:通过大肠杆菌原核表达系统制备高纯度的rB-TI蛋白,免疫大白鼠,制备多克隆抗体。用Western blot、间接ELISA及免疫细胞组织化学法检测该抗体的效价和特异性。结果:间接ELISA法检测所制备抗体的效价达1∶128000以上;Western blot显示该抗体能与BTI蛋白特异结合;免疫组织化学法检测结果显示rBTI主要存在于EC9706细胞的胞质和细胞核内。结论:所制备的大鼠抗rBTI的抗血清具有较高的免疫反应性和特异性,为rBTI诱导肿瘤细胞凋亡的机制研究及进一步揭示荞麦胰蛋白酶抑制剂的结构与功能的关系提供重要的基础。 | 李玉英 崔晓东 张政 王转花 | 2009 | 细胞与分子免疫学杂志2009，25，6： | 3 |
| 9 | rBTI蛋白对人肝癌HepG2细胞增殖、迁移及ROS产生的影响显示文摘目的:研究重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(rBTI)对HepG2细胞增殖、凋亡、迁移及胞内活性氧(ROS)的影响。方法:以不同浓度的rBTI蛋白(1.25 10μmol/L)作用肝癌HepG2细胞,通过MTT比色法检测rBTI蛋白对HepG2细胞增殖抑制作用;DAPI荧光染色法观察凋亡细胞的发生及形态学变化,流式细胞术(FCM)检测细胞内活性氧变化、划痕擦伤实验检测rBTI蛋白对HepG2细胞迁移的影响。结果:rBTI蛋白对HepG2细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈剂量依赖效应,但对正常细胞HL-7702影响很小;DAPI染色发现细胞产生凋亡小体;细胞内活性氧水平检测结果表明rBTI可以诱导HepG2细胞内ROS水平显著升高;划痕擦伤实验显示rBTI在一定浓度范围内可以抑制HepG2细胞迁移。结论:rBTI蛋白能够诱导HepG2细胞发生凋亡并抑制细胞增殖和迁移。 | 李玉英 贾海燕 郭慧 王转花 | 2012 | 细胞与分子免疫学杂志2012，28，4： | 3 |
| 10 | 抗菌肽Fa-AMP基因的克隆及其原核表达载体的构建显示文摘为研究抗菌肽Fa-AMP的高效制备方法。采用大肠杆菌偏嗜性密码子设计编码该抗菌肽的核苷酸序列,通过重叠区扩增基因拼接法合成目的基因,并将其连接到表达载体pET-47b上,转化获得其BL21(DE3)pLysS工程菌,经PCR和测序鉴定,表明重组表达载体构建成功,这为体外生物活性检测与开发提供了参考。 | 李蒙 刘璞 张芝星 | 2021 | 江西农业学报2021，33，5： | 3 |
| 11 | 荞麦抗感染多肽研究进展显示文摘近年来,国内外学者在荞麦种子内发现了很多抗菌肽、抗肿瘤多肽以及胰蛋白酶抑制剂等抗感染多肽,这些多肽的结构特征和实际应用的研究越来越受关注。主要综述了荞麦抗感染多肽的分子结构特征,抗菌、抗肿瘤、胰酶抑制等生理活性及其作用信号机制等方面的研究进展。 | 李宗杰 周一鸣 周小理 | 2012 | 中国粮油学报2012，27，1： | 3 |
| 12 | 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂延长C.elegans寿命的作用机制显示文摘重组荞麦胰蛋白酶抑制剂(recombinant buckwheat trypsin inhibitor,r BTI)是一种来源于荞麦PotatoⅠ抑制剂家族的丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有很好的生物活性及功能。先前的研究表明,r BTI在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中具有很好的延长寿命的性质,但其具体的作用机制还不太清楚。本文的研究证明,r BTI能够调节转录因子DAF-16的转录活性,进而影响线虫的寿命,且该性质与其胰蛋白酶抑制活性密切相关。通过定点突变技术,分别对r BTI的45位、53位和44位氨基酸活性位点进行突变,获得了4种不同胰蛋白酶抑制活性的r BTI突变体,分别命名为r BTI-R45A,r BTI-R45F,r BTI-W53R和r BTI-P44T。经典模式生物秀丽隐杆线虫寿命检测实验显示,野生型r BTI可以明显延长C.elegans的寿命,且在0-10μmol/L范围内具有浓度依赖性。和未处理对照组相比,10μmol/L野生型r BTI延长寿命幅度可达到14.5%,但是突变体r BTI-R45 A,r BTI-R45 F和r BTI-W53 R均不同程度失去了延长寿命的功能。利用荧光显微观察及qRT-PCR等方法进一步研究发现,野生型r BTI可增强寿命调控转录因子DAF-16的转录活性。与寿命检测实验结果一致,4种r BTI突变体均不能使DAF-16转录活性增强。上述结果表明,在C.elegans中,r BTI可增强长寿因子DAF-16的转录活性,进而延长虫体寿命,且该功能的发挥依赖于其适当的胰蛋白酶抑制活性。本文的结果为进一步研究开发r BTI的功能提供了实验支持和理论基础。 | 李娇 崔晓东 马晓丽 王转花 | 2016 | 中国生物化学与分子生物学报2016，32，10： | 3 |
| 13 | BTI基因转染诱导EC9706细胞凋亡及G_1阻滞显示文摘为了研究荞麦胰蛋白酶抑制剂(buckwheat trypsin inhibitor,BTI)对肿瘤细胞凋亡与细胞周期的影响,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与BTI融合蛋白真核表达质粒.将BTI基因成功克隆至pEGFP-N1中转染食管癌EC9706细胞后,激光共聚焦显微镜镜检显示,BTI-EGFP获得良好表达.表达的融合蛋白大部分分布于细胞核,在细胞质中有少量分布.Western印迹检测可见约27kD和36 kD的特异性条带.流式细胞术分析结果显示,BTI能够诱导EC9706细胞发生凋亡,并使细胞停滞于G0/G1期. | 李玉英 田欣 张政 王转花 | 2010 | 中国生物化学与分子生物学报2010，26，4： | 2 |
| 14 | 石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞生长曲线及周期的影响显示文摘背景:有报道指出石墨碳纳米颗粒具有强大的吸附能力,只要尽可能将其控制在有效浓度范围内,石墨碳纳米颗粒会具有很好的细胞相容性、增敏效应。目的:观察石墨碳纳米颗粒对体外培养细胞的生长增殖、细胞周期及凋亡的影响。设计、时间及地点:细胞-材料学体外实验,于2007-01/2008-12在国家卫生部纳米生物技术重点实验室完成。材料:石墨碳纳米颗粒由中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心自制。人肝细胞(L02)、人肝细胞(Hl7702)、小鼠细胞(3T3)、人肝癌细胞(HepG2)购自湘雅医院中心实验室公司。方法:取石墨碳纳米颗粒母液,稀释10倍后,采用激光粒度分析仪观察石墨碳纳米颗粒的大小及Zeta电位。取含胎牛血清的RPMI-1640培养基,设立11瓶,分别加入适量石墨碳纳米颗粒母液,使其含石墨碳纳米颗粒的浓度分别为100,75,50,25,20,15,12.5,10,7.5,5,0mg/L。将L02细胞、Hl7702细胞、3T3细胞、HepG2细胞密度均调整为1×109L-1,接种后置37℃、体积分数为5%的CO2饱和湿度培养箱中,取处于指数生长期的细胞用于各项指标测定。主要观察指标:MTT比色法测定细胞数量,流式细胞仪检测细胞周期,计算细胞凋亡率。结果:石墨碳纳米颗粒的粒径约20nm,带有负电荷,其电位值为-14.8mV。与未加石墨碳纳米颗粒的空白对照组比较,除人肝癌细胞(HepG2)外,不同浓度的石墨碳纳米颗粒对其余3株细胞增殖均有促进作用,且浓度为7.5mg/L时促细胞增殖作用最强。在石墨碳纳米颗粒浓度为7.5mg/L条件下,4株细胞的凋亡率均明显低于空白对照组。石墨碳纳米颗粒作用24h的L02肝细胞周期发生改变,G0期细胞数减少,更多的细胞进入到S期和G2期。结论:石墨碳纳米颗粒能进入体外培养细胞内,并对细胞生长、增殖产生促进作用,不诱导细胞凋亡,其作用强度与浓度有关。 | 刘东京 张阳德 吴季霖 刘美洲 刘东非 潘一峰 陈伟 刘辉 曾庆仁 | 2009 | 中国组织工程研究与临床康复2009，13，29： | 0 |
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