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| 1 | 转录组测序(RNA-seq)策略及其数据在分子标记开发上的应用显示文摘新一代测序技术已经广泛应用于转录组的研究(即RNA-seq),其数据几乎涵盖了特定组织和特定时期的所有转录本。由于其高通量和低成本的优势,RNA-seq越来越受到研究者的青睐,特别是在那些缺乏基因组信息的物种上。在此综述中,讨论了RNA-seq的测序策略,包括物种遗传背景的考量,测序平台和数据拼接软件的选择。RNA-seq数据对于SSR和SNP等分子标记的开发是非常有用的,由于这些标记在相关物种中有很高的通用性,因此在比较作图中有其不可替代的优势。 | 李小白 向林 罗洁 胡标林 田胜平 谢鸣 孙崇波 | 2013 | 中国细胞生物学学报2013,35,5: | 88 |
| 2 | 基于杜仲转录组序列的SSR分子标记的开发显示文摘简单重复序列(simple sequence repeat,SSR),又称微卫星,是广泛存在于真核和原核生物基因组中的1~6个核苷酸串联重复单元,研究发现基因组中平均每50kb就有1个SSR(Morgante et al.,1993;Kalia et al.,2011),SSR标记主要包括基因组SSR和表达序列标签SSR(EST-SSR)。 | 黄海燕 杜红岩 乌云塔娜 刘攀峰 | 2013 | 林业科学2013,49,5: | 112 |
| 3 | 基于EST信息的百合SSR标记的建立显示文摘依据已知的百合EST(expres sedsequence tags)序列信息,开发新的SSR(simple sequence re-peats)标记,在NCBI的EST数据库1688条EST中检索到98条含有101个SSR的序列,SSR的检出率为5.98%,其中三核苷酸重复类型占主导地位,出现频率为2.84%。EST-SSR的重复基元共搜索到47种,其中三核苷酸重复基元类型最为丰富,大约占重复基元类型总数的一半。利用部分EST-SSRs序列共设计23对SSR引物,以铁炮百合‘Snow Queen’DNA为模板,对引物进行筛选,其中18对引物有扩增产物,占所设计引物总数的78.26%;进一步用这些引物在5个杂种系列13个百合品种进行多态性测试,显示多态性的引物占可扩增引物的66.7%。本研究结果证明了基于百合EST信息建立SSR标记是一种有效而又可行的方法。 | 杨素丽 明军 刘春 穆鼎 李名扬 | 2008 | 园艺学报2008,35,7: | 41 |
| 4 | 甘蓝EST-SSR标记的开发与应用显示文摘从NCBI数据库下载62567条甘蓝相关EST,处理后得到19611条无冗余的EST,对其进行SSR搜索,共得到1219条SSR,分布在1176条EST上,分布密度为1/11.48kb,包括273种重复基元。在甘蓝EST-SSR中,二核苷酸(353个SSR)和三核苷酸(423个SSR)占主导地位,所占比例分别为28.96%和34.70%;出现最多的重复基元是AG/CT,占总数的25.59%,其次为AAG/CTT(94个,占7.71%)。针对1176条含有SSR的EST设计合成了978对引物。用两份甘蓝自交系对978对引物进行初筛,897对引物有扩增产物,共扩增出1026条扩增带;128对引物表现出多态性,共有258条多态性带(占总带数的25.15%)。利用4对多态性引物,初步构建了中甘11、8398、中甘15、中甘21杂交新品种及其亲本的指纹图谱。以上结果说明从甘蓝相关EST数据库中开发的SSR引物有较好的可用性。 | 陈琛 庄木 李康宁 刘玉梅 杨丽梅 张扬勇 程斐 孙培田 方智远 | 2010 | 园艺学报2010,37,2: | 42 |
| 5 | 茶树转录组中SSR位点的信息分析显示文摘利用茶树全转录组的高通量测序获得的127 094条Unigenes来发掘茶树转录组SSR功能性标记。在这些序列中共搜索出12 242个SSRs,分布于10 325条Unigenes中,出现频率为9.63%。茶树转录组SSRs的平均长度为16 bp,平均分布频率是1/3.68 kb。在茶树转录组的SSRs中,二核苷酸重复是主要的类型,占总SSRs的63.78%。茶树转录组SSRs共包含181种重复基元,二核苷酸重复基元CT/AG和TC/GA是优势重复基元类型,分别占总SSRs的23.84%和23.58%。同时对这些SSR的可用性进行了评价。 | 杨华 陈琪 韦朝领 史成颖 方从兵 宛晓春 | 2011 | 安徽农业大学学报2011,38,6: | 50 |
| 6 | 基于松树EST序列的马尾松SSR引物开发显示文摘本文用生物信息学方法对松树359521条EST进行处理,得到无冗余EST序列56776条,其中有2315个SSR分布于2057条EST中,出现频率是4.08%,平均距离是22.06kb。检测到二、三碱基重复SSR总数为1631个,四碱基至六碱基重复SSR共117个。在所得二碱基以上重复SSR中,多态潜能高的有488个,占27.92%;多态潜能次高的有1260个,占72.08%。选择整体长度不小于24个碱基的SSR位点用于开发马尾松SSR引物,设计出135对备选引物,最终有51对引物在马尾松中得到扩增,有效扩增率为37.78%;其中39对有多态性,多态率为28.89%。在51对可扩增引物所对应的SSR类型中,P型占74.51%,I型占3.92%,C型占21.57%。 | 刘公秉 季孔庶 | 2009 | 分子植物育种2009,7,4: | 27 |
| 7 | 用于白菜和大白菜品种鉴定的EST-SSR复合标记的建立显示文摘为了有效和全面鉴定白菜和大白菜品种,研制了由3个引物对组成的6套EST-SSR复合标记组合,并形成了多重SSR的最佳实用试验条件。经由这6套标记组合完全鉴别了43个白菜和大白菜品种差异的检测,并在3个大白菜杂交种个体之间的表现一致,比较了单引物标记与复合标记的鉴定效率,验证了这套技术和组合可以表达白菜和大白菜品种间多态性、品种内一致性及稳定性和重复性,确认其可以高效准确和全面地鉴别白菜和大白菜品种的真实性和杂交种纯度。 | 李丽 郑晓鹰 | 2009 | 园艺学报2009,36,11: | 28 |
| 8 | 马蹄香表达序列标签资源的SSR信息分析显示文摘目的分析马蹄香EST资源的SSR信息,为开发EST-SSR标记奠定基础。方法从GenBank中获得马蹄香EST序列,用Sequencher4.8软件进行序列拼接得到Uni-EST序列,用SciRoKo3.4软件对Uni-EST序列进行SSR扫描,分析EST-SSR的分布频率和重复基元的类型特征。结果共获得10274条马蹄香EST序列,通过预处理共得到全长为5.11×106bp的无冗余Uni-EST6643条。在这些序列中共搜索出1408个SSR位点,分布在1232条Uni-EST序列中,发生频率为18.55%,EST-SSR的平均长度为22.30bp,平均每3.63kb含1个SSR位点。单核苷酸重复在马蹄香EST-SSR中占主导地位,发生频率为12.24%,其次为二核苷酸重复,发生频率为5.01%。在所有重复基元中,A/T基元出现频率最高,其次为AG/CT。结论马蹄香EST中SSR出现的频率较高,并且类型较为丰富。 | 李珊 周天华 赵桂仿 朱云国 杨晓伶 程舟 | 2010 | 中草药2010,41,3: | 21 |
| 9 | 褐飞虱EST资源的微卫星信息分析显示文摘表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)是开发微卫星标记的一个重要的资源。褐飞虱Nilaparvata lugens(Sta°l)EST序列的公布为开发EST-SSRs提供了宝贵的数据资源,本研究利用生物信息学对NCBI公共数据库中的37398条褐飞虱ESTs序列进行EST-SSRs特征分析,得到全长为7619.324kb的无冗余EST9852条。按照3个不同的查找标准在这些序列中搜索SSR。查找结果显示:褐飞虱EST-SSRs主要重复基元以1~3碱基为主,占总EST-SSR的95%以上。在单碱基重复基元中,A/T是占优势的重复基元,在二相重复类型中,AG/CT重复基元出现的频率最多,而AAG/CTT是三相重复中占绝对优势的重复基元。在褐飞虱EST-SSRs中未查找到GC重复基元。以100bp为参照,在3种查找标准下含有SSR的EST序列中两端侧翼序列均≥100bp的序列分别为738,89和42个。通过分析褐飞虱EST-SSRs标记可以为褐飞虱和近缘种的SSR标记的开发提供信息,同时通过分析褐飞虱EST-SSRs的分布频率和分布特征可以为昆虫EST-SSRs的研究提供借鉴和参考。 | 刘玉娣 侯茂林 | 2010 | 昆虫学报2010,53,3: | 20 |
| 10 | 甘薯EST资源的SSR信息分析显示文摘从NCBI公共数据库下载获得22371条甘薯EST序列,去除低质量的和冗余的序列后,得到总长为5.09×103kb的9204条唯一序列。从这些序列中搜索到总共436个SSR位点,平均相距11.68kb出现一个SSR。这些SSR的出现频率和平均长度分别为4.4%和24.28bp。在2~6bp的重复基元中,六核苷酸重复基元出现频率最高(30.96%),其次是三核苷酸重复基元(29.59%)和二核苷酸重复基元(24.54%)。出现最多的重复基元是AG/CT(16.28%),其次是AAG/CTT(11.01%)。 | 黄立飞 房伯平 陈景益 张雄坚 罗忠霞 | 2009 | 植物生理学通讯2009,45,1: | 18 |
| 11 | 菠菜性别相关EST-SSR标记的开发及应用显示文摘为了明确菠菜EST序列中SSR的总体特点,开发菠菜EST-SSR引物;为利用EST-SSR引物进行菠菜性别相关特异序列的克隆奠定基础,本文从NCBI上获得1093条EST,利用在线软件SSRIT检测所含SSR序列,并进行分析。共检索出68条SSR序列,分布于64条EST中,检出率为6.22%,包括22种重复基元。其中二核苷酸重复基元的EST-SSR占主导地位,占总SSR数目的32.3%。利用在线引物设计软件Primer3.0设计了7对EST-SSR引物,在适合的PCR反应体系下,分别以雌、雄菠菜DNA基因组为模板,对设计的EST-SSR引物进行筛选,结果显示以EST序列HS097148设计的一对引物从菠菜雌雄基因组中扩增出一条雄性特异的条带,表明通过菠菜EST-SSR引物获得菠菜性别相关特异序列是可行的。 | 邓传良 高俊 曹莹 秦瑞云 高武军 卢龙斗 | 2012 | 基因组学与应用生物学2012,31,5: | 16 |
| 12 | 基于Solexa高通量测序的唐古特红景天(Rhodiola algida)微卫星信息分析显示文摘利用所获得的Solexa高通量唐古特红景天转录组拼接EST序列进行微卫星位点的挖掘分析,期望为红景天属SSR标记的开发提供生物信息学依据。在得到的6552条EST序列中,三碱基最多,占总EST序列的41.50%;单核苷酸和二核苷酸重复类型的SSR含量相似,分别为27.76%和24.76%;二至六碱基微卫星分布密度与其对应的SSR含量成正比。在单核苷酸重复类型中,T和A重复类型最多,分别为总SSR的14.91%、12.70%,而G和C重复类型则很少;在二核苷酸重复类型中,AG重复类型最多,占总SSR的5.60%,GA和TC重复类型次之,分别为4.75%、4.72%;在三核苷酸重复类型中,GAA重复类型最多,为总SSR的1.85%,GAT次之,为1.79%,TTC、TCT、TCA、GGA、GCT、GAG重复类型间的SSR数相差不大;四、五、六核苷酸重复类型则很少。除五、六核苷酸重复类型外,其长度变化与其对应的重复类型碱基长度成反比;同种重复类型中,微卫星的长度与其对应的SSR数成反比。 | 雷淑芸 高庆波 付鹏程 杨慧玲 陈世龙 张发起 | 2014 | 植物研究2014,34,6: | 16 |
| 13 | 西瓜抗枯萎病相关EST-SSR的信息分析显示文摘对西瓜枯萎病菌生理小种1诱导的抑制差减杂交cDNA文库测序获得的4 000条EST进行分析,经过前处理后拼接得到1 487条unigene序列,全长为759 kb。在其中978条unigene序列中共检索出2 136个EST-SSR,出现频率为53.4%。EST-SSR的平均分布距离和平均长度分别是1/0.36 kb、19.59 bp。EST-SSRs中的重复单元以二核苷酸和三核苷酸重复为主,二者在总EST-SSRs中的出现频率为98.08%。GA/TC和GAA/TTC是二、三核苷酸中的优势重复类型,分别占二、三核苷酸重复的25.78%和12.97%。西瓜抗枯萎病相关EST资源的SSR信息分析为进一步建立西瓜EST-SSR标记和探索其在西瓜基因组学研究中的应用奠定了基础。 | 冯建明 郭绍贵 吕桂云 陈年来 张海英 宫国义 许勇 | 2009 | 华北农学报2009,24,3: | 16 |
| 14 | 基于牡丹EST信息的滇牡丹SSR标记开发显示文摘对NCBI(美国国立生物技术信息中心)中牡丹的ESTs(expressed sequence tags)的序列进行分析,结果表明:在所分析的2 204条序列中,仅324条分布有SSRs(simple sequence repeats),占全部ESTs序列的14.70%;SSR的出现频率为15.20%,共计335个,其中,二核苷酸重复比例84.18%,三核苷酸重复比例为15.22%,四和六核苷酸重复比例为0.30%。在此基础上,利用软件(serafer 1.3)设计了51对备选SSR引物,以6个滇牡丹不同花色类群DNA为模板对引物进行筛选,其中,10对引物有扩增产物;用这些引物进一步在10个类群50个DNA模板进行多态性测试,结果显示:上述10对SSR引物均有多态性,且同一类群内不同模板DNA间也存在多态性。本研究结果证明:基于牡丹EST信息建立SSR标记是一种有效而可行的方法,有助于滇牡丹遗传多样性分析及基因组学方面的研究。 | 张艳丽 王雁 李正红 马宏 | 2011 | 林业科学研究2011,24,2: | 16 |
| 15 | EST-SSR标记的开发及其在木本植物中的分布特点显示文摘随着基因组学的发展和高通量测序技术的应用,EST在很多植物中开展起来,为开发EST分子标记奠定了基础。近年来EST-SSR在木本植物研究报道较多,主要介绍了EST-SSR开发的一般步骤,综述了木本植物中EST-SSR的分布特点及其原因,并对今后的发展进行展望。 | 许玉兰 蔡年辉 康向阳 张瑞丽 王大玮 何承忠 段安安 | 2012 | 中国农学通报2012,28,4: | 16 |
| 16 | 大豆EST资源的SSR信息分析显示文摘微卫星或简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)存在于表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)中。为了在大豆中开发EST-SSR功能性标记,利用生物信息学对NCBI公共数据库中的394370条大豆ESTs序列进行EST-SSRs特征分析。剔除冗余序列,得到全长为51332.21kb的无冗余EST80735条。在这些序列中搜索出7754个SSR,分布于6674条EST中,出现频率是8.27%。这些EST-SSR的平均长度为15.26bp,平均分布频率是1/6.62kb。在1~6bp的重复基元中,三核苷酸重复基元的SSRs出现频率最高(43.72%),其次是二核苷酸(37.34%)、单核苷酸(15.92%)。AG/CT和AAG/CTT是二、三核苷酸中的优势重复基元,分别占二、三核苷酸重复的62.83%和25.22%。本研究为开发多态性大豆微卫星标记提供了候选序列。 | 陈相艳 李伟 戴海英 张礼凤 | 2009 | 大豆科学2009,28,3: | 15 |
| 17 | 木薯EST资源的SSR信息分析显示文摘为了进一步利用现有木薯EST-SSR资源,笔者从NCBI公共数据库下载了38411条木薯EST,去除低质量的和冗余的的序列后,得到全长为4.16×103kb的无冗余序列5401条。在无冗余序列中发现含有SSR的EST序列595条,共691个SSR,平均相隔6.02kb出现一个SSR。这些SSR的出现频率和平均长度分别是11.02%和18.89bp。在1~6bp的重复基元中,二核苷酸重复基元出现频率最高(36.03%),其次是三核苷酸重复基元(31.84%)、单核苷酸重复基元(30.10%)。出现较多的重复基元是A/T(29.23%),其次是AG/CT(24.75%)。结果说明,木薯的EST-SSR出现频率较高、类型较丰富、多态性潜能较高,具有较高的利用价值。 | 彭丁文 郑柳城 朱宏波 | 2008 | 中国农学通报2008,24,2: | 14 |
| 18 | 大白菜简单序列重复(SSR)和插入/缺失(InDel)标记的开发及通用性分析显示文摘为探讨大白菜基因组序列中SSR位点的分布规律并开发SSR引物,利用SSRHunter软件对大白菜A10(16899818~17299817)的DNA序列进行简单序列重复(SSR)位点查找,共得到394个SSRs,平均每1.02kb出现1个SSR。二核苷酸和三核苷酸重复是最主要的SSR类型,分别占79.44%和18.78%。为了提高SSR标记开发的准确性和通用性,对检索得到的含SSR位点的序列进行了同源比对,选取符合条件的15条SSR序列并设计引物;依据Blast过程中发现的在SSR位点不存在差异而在其侧翼序列中存在插入/缺失(InDel)差异的序列,设计了19条InDel引物。用34对SSR及InDel引物在6个大白菜(Brassica rapassp.pekinesis)材料中进行多态性研究,发现28对引物能扩增出理想的PCR产物,有效扩增率为82.35%,其中27对引物具有多态性,多态性比率为79.41%。为验证SSR引物的真实性,随机对4对SSR引物的部分白菜扩增片段进行了测序,发现100%的片段具有相应的SSR位点。28对SSR和InDel引物在甘蓝(B.oleracea)、油菜(B.napus)和萝卜(Raphanus sativus)品种的有效扩增率分别为85.71%、100%和77.78%,说明新开发的SSR和InDel标记具有较好的多态性和通用性。利用6对引物分析了48份十字花科种质的遗传多样性,结果表明48份材料被明显地区分成白菜和甘蓝组、萝卜组、油菜组3大类群,与传统分类一致。大白菜SSR和InDel标记的开发对于十字花科种质亲缘关系及遗传多样性分析具有重要的应用价值。 | 仪泽会 卢有飞 郭晓芹 惠麦侠 张鲁刚 张明科 | 2012 | 农业生物技术学报2012,20,12: | 14 |
| 19 | 三种人参属植物的EST-SSR信息分析及其在三七中的应用显示文摘为了解人参属植物EST中SSR分布特点及其在三七SSR标记中的应用,利用生物信息学方法,用primer3软件对dbEST数据库中人参属植物人参、西洋参和三七的EST序列进行搜索,发现人参属植物EST-SSR出现频率为11.54%,平均每4.39kb出现1个SSR。人参属植物单核苷酸重复基元占主导地位,其次为三核苷酸重复基元和二核苷酸重复基元,分别占总SSR的54.48%、17.31%和16.36%。人参属EST-SSR的优势类型为A/T和AT/TA,分别占54.73%和8.21%。根据人参属植物EST中的SSR设计48对引物,在合适的PCR扩增体系下,用5个三七样品的DNA为模板进行PCR扩增,引物有效扩增率85.42%,其中多态性引物占可扩增引物的70.73%。结果表明,利用人参属EST序列开发三七EST-SSR标记是可行的。 | 杨维泽 金航 崔秀明 沈涛 杨美权 张金渝 | 2011 | 基因组学与应用生物学2011,30,1: | 14 |
| 20 | 利用EST-SSR标记分析西南扁穗牛鞭草种质的遗传多样性显示文摘利用禾谷作物EST-SSR标记对采自我国西南地区的40份野生扁穗牛鞭草和3份扁穗牛鞭草国审品种的遗传变异和亲缘关系进行了研究。试验筛选出23对引物对43份供试材料进行扩增,共获得323条带,其中多态性条带261条,多态性条带比率(PPB)达80.4%,多态信息含量(PIC)为0.354~0.500,平均值为0.474,遗传相似系数(GS)为0.690~0.913,表现出丰富的遗传多样性。聚类分析结果表明,各供试材料间的聚类与其地理来源及形态特征具有一定的相关性。5个扁穗牛鞭草地理类群间的分子方差分析(AMOVA)揭示了供试的扁穗牛鞭草类群内的遗传变异占总变异的95.32%,类群间变异占总变异的4.68%。表明禾谷作物的EST-SSR能用于扁穗牛鞭草遗传多样性研究,是一种有效的分子标记。本研究结果为扁穗牛鞭草种质的收集、利用及育种提供了理论依据。 | 陈永霞 张新全 谢文刚 马啸 刘影 | 2011 | 草业学报2011,20,6: | 14 |