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| 1 | Gateway重组系统快速构建花生条纹病毒cp基因反向重复序列载体显示文摘Gateway重组系统是Invitrogen公司推出一种新的克隆策略。鉴于一般用于农杆菌转化植物的质粒比较大,采用常规的酶切和连接的克隆策略耗时、费力,Gaytewayw重组系统为大载体的操作提供了一种快速和可靠的手段。该系统利用噬菌体转染细菌后整合细菌DNA的位点特异性重组策略(Landy,1989),重组过程是保守位点特异性DNA链的切割和重接,整个过程中没有DNA的合成。应用Gateway重组系统构建植物反向重复序列表达载体包括两个重组过程:第一,BP重组:目的片段重组至入门载体(Entry clone);第二,LR重组,目的片段自入门载体重组至植物表达载体。本实验室拟利用这一系统构建花生条纹病毒(PStV)红安株系的cp反向重复序列载体,进行烟草转化,期望获得抗性的转基因植株。 | 晏立英 许泽永 陈坤荣 Rob Goldbach Marcel Prins | 2007 | 农业生物技术学报2007，15，2： | 5 |
| 2 | 反向重复RNA介导转基因烟草对花生条纹病毒抗性显示文摘将花生条纹病毒(Peanut stripe virus,PStV)外壳蛋白基因(cp)反向重复序列重组至植物表达载体pK7GW1WG2,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101导入本生烟(Nicotiana benthamiana)。卡那霉素抗性植株5~6叶期摩擦接种PStV,通过症状观察和ELISA检测,T0代转基因烟草植株87%表现免疫,不同抗性系T1代植株的免疫比例为60%~100%,多数抗性系T2代植株免疫比例达到100%。利用PStV cp基因特异探针对转基因植株T1代进行特异小干扰性RNA(siRNA)的Northern blot检测,转基因植株都检测出不同含量的特异siRNA,而非转基因植株未检测到特异siRNA;对病毒接种前的转基因植株进行特异siRNA检测,免疫植株比感病植株特异siRNA含量高;对免疫转基因植株进行不同时期的siRNA检测,植株在接种前、接种15和50d后的叶片中都检测到特异siRNA,同一植株不同时期siRNA含量相对稳定;各个转化系植株体内siRNA含量存在差异。实验成功地利用双链RNA(dsRNA)策略获得对PStV具有较高比例抗性的转基因烟草植株。 | 晏立英 许泽永 陈坤荣 Rob Goldbach Marcel Prins | 2007 | 农业生物技术学报2007，15，4： | 3 |
| 3 | 侵染花生的黄瓜花叶病毒CA株核酸全序列分析显示文摘对侵染花生的黄瓜花叶病毒CA(CMVCA)株系进行克隆和序列分析。CMVCARNA1全长3356个核苷酸(nt),编码分子量为111kDa的1a蛋白;RNA2全长3045nt,编码分子量为96.7kDa的2a蛋白和13.1kDa的2b蛋白;RNA3全长2219nt,编码分子量为30.5kDa的3a蛋白和分子量为24kDa的外壳蛋白(CP)。序列同源性比较表明,CMVCARNA1、2、3与CMV亚组IACMVFny、亚组IBCMVSD、亚组IICMVQ株系序列同源性,RNA1分别为91.3%、91.1%和76.5%,RNA2分别为92.1%、90%和71.2%,RNA3分别为96.1%、92.6%和74.5%;与同属花生矮化病毒(Peanutstuntvirus,PSV)RNA1、2、3序列同源性分别为67.1%、58.2%和55.7%。上述研究未发现CMVCA基因组与PSVRNA链的重组,CMVCA对花生的侵染应是该株系适应于花生的遗传变异、长期进化的结果;对RNA35′NTR结构分析以及RNA35′NTR和CP系统进化树分析表明,CMVCA属CMVIB亚组。 | 晏立英 许泽永 陈坤荣 Rob Goldbach Marcel Prins | 2005 | 中国病毒学2005，20，3： | 3 |
| 4 | High frequency induction of RNA-mediated resistance against Cucumber mosaic virus using inverted repeat constructs显示文摘 | Yuh-Kun Chen Dick Lohuis Rob Goldbach Marcel Prins | 2004 | Molecular Breeding2004，，3： | 1 |
| 5 | 花生矮化病毒(PSV)Mi株系RNA3全序列分析显示文摘完成了中国花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)Mi株系RNA3全序列分析。PSV—MiRNA3全长2170个核苷酸,含两个开放阅读框架(ORE),分别编码3a运动蛋白和壳蛋白(CP)。PSV-MiRNA3核苷酸序列和PSV亚组IER和J株系同源性为77.7%和78.5%,与亚组ⅡW株系同源性为76.7%;同一亚组ER和J株系RNA3序列同源性为91%。PSV—Mi3a和cp基因与PSV-ER,J and W株系同源性分别为78.3%~79.3%和74.4%~77.8%。PSV-Mi 3a和CP蛋白氨基酸序列与PSV-ER,J and W株系同源性分别为73.90%-77.4%和64.80%-77.5%。PSV-Mi RNA35’UTR和IR区域有较大的变异性,与PSV—ER,J and W株系序列同源性分别为78.4%79.8%和70.2%。73.2%,明显低于亚组Ⅰ、Ⅱ两个亚组间株系在这两个区域序列同源性。上述结果说明我国PSV Mi株系不同于已报道的PSV两个亚组,独自构成一个新亚组,即亚组Ⅲ。 | 许泽永 晏立英 陈坤荣 Marcel Prins | 2004 | 农业生物技术学报2004，12，4： | 0 |
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