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| 1 | 植物RNA干扰表达载体构建方法的研究显示文摘从传统酶切—连接、同源重组、PCR技术为基础结合酶切—连接等方法,对近年来植物RNA干扰表达载体的最新构建方法进行综述。 | 马建 魏益凡 厉志 王丕武 | 2009 | 安徽农业科学2009，37，18： | 10 |
| 2 | RNA干扰载体构建方法的研究进展显示文摘RNA干扰是通过外源或内源的双链RNA在细胞内诱导同源序列的基因表达沉默的现象。目前RNA干扰技术不但被广泛地应用于各种基因的功能研究,而且在农作物抗逆品种的选育方面起重要的作用。RNA干扰技术的关键是构建能在受体中稳定表达的干扰载体。阐述了近几年发展起来的3种简单、快捷、稳定的构建RNA干扰载体的方法。 | 粟挺 刘爱玲 陈信波 | 2011 | 湖南农业科学2011，，10： | 10 |
| 3 | DNA重组技术的研究综述显示文摘DNA重组技术,即DNA克隆技术的研究和运用是现代生物学发展的一个重要分支,是分子生物学发展的突出领域。本文介绍了DNA重组的类型及相关的生物学概念;综述了目前已报道的传统的酶切-连接经典克隆方法、位点特异性重组克隆方法、以及同源重组克隆方法,重点阐述了各自的原理、步骤、特点及实际应用等方面;最后归纳总结了各种方法的优缺点和应用范围,并对该技术的科研成果进行了回顾和对未来的研究进行了展望。 | 张亚旭 | 2012 | 生物技术进展2012，2，1： | 8 |
| 4 | 反向重复RNA介导转基因烟草对花生条纹病毒抗性显示文摘将花生条纹病毒(Peanut stripe virus,PStV)外壳蛋白基因(cp)反向重复序列重组至植物表达载体pK7GW1WG2,通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101导入本生烟(Nicotiana benthamiana)。卡那霉素抗性植株5~6叶期摩擦接种PStV,通过症状观察和ELISA检测,T0代转基因烟草植株87%表现免疫,不同抗性系T1代植株的免疫比例为60%~100%,多数抗性系T2代植株免疫比例达到100%。利用PStV cp基因特异探针对转基因植株T1代进行特异小干扰性RNA(siRNA)的Northern blot检测,转基因植株都检测出不同含量的特异siRNA,而非转基因植株未检测到特异siRNA;对病毒接种前的转基因植株进行特异siRNA检测,免疫植株比感病植株特异siRNA含量高;对免疫转基因植株进行不同时期的siRNA检测,植株在接种前、接种15和50d后的叶片中都检测到特异siRNA,同一植株不同时期siRNA含量相对稳定;各个转化系植株体内siRNA含量存在差异。实验成功地利用双链RNA(dsRNA)策略获得对PStV具有较高比例抗性的转基因烟草植株。 | 晏立英 许泽永 陈坤荣 Rob Goldbach Marcel Prins | 2007 | 农业生物技术学报2007，15，4： | 3 |
| 5 | 利用RNAi介导的抗病性获得抗2种花生病毒的转基因烟草显示文摘分别以花生条纹病毒红安株系(PStV-Hongan)外壳蛋白基因(CP),花生矮化病毒轻型株系(PSV-Mi)和花生黄瓜花叶病毒(CMV-CA)复制酶基因2a为模板,通过PCR方法分别得到PStV-CP 5'端,PSV-Mi和CMV-CA2a 3'端150 bp的片段,3种片段混合物为模板经PCR拼接得到450 bp的片段,此拼接片段通过Gateway系统重组至植物表达载体pK7GW1WG2,得到含反向重复拼接片段的植物表达载体pK450。冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101后,叶盘法转化本生烟(Nicotiana benthamiana),经PCR检测,获得转基因植株。对T1代转基因植株分别人工接种3种病毒,66.7%的植株表现对PStV免疫,9%的植株表现对CMV-CA的恢复抗性,全部植株对PSV感病。siRNA的Northern blot结果表明,所有转基因烟草植株都含有病毒特异siRNA,siRNA含量随接种后时间延长而衰减。 | 晏立英 许泽永 廖伯寿 | 2012 | 植物病理学报2012，42，1： | 2 |
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