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| 1 | HPV16 E5蛋白免疫优势肽段分析及其多克隆抗体的制备显示文摘目的预测人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus 16,HPV16)E5蛋白的免疫优势肽段,并制备其多克隆抗体。方法以人HPV16 E5蛋白全长氨基酸序列为基础,采用Hopp&Woods的亲水性方案、Zimmerman极性参数、Jameson-Wolf抗原指数方案和Emini表面可及性方案及抗原性指数(antigenic index,AI)等生物信息学方法,综合分析E5蛋白免疫优势肽段。通过免疫日本大耳白兔进行E5蛋白免疫优势肽段的免疫原性验证并制备多克隆抗体;进一步采用ELISA法和间接免疫荧光试验分别检测多克隆抗体的效价及特异性。结果HPV16 E5蛋白N-端1~17氨基酸序列(MTNLDTASTTLLACFLL)为免疫优势肽段,可诱导兔产生高水平的E5蛋白特异性IgG抗体,抗体滴度随免疫次数增加而升高;间接细胞免疫荧光试验结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别TC-1-E5细胞胞浆内表达的E5蛋白。结论HPV16 E5蛋白氨基酸肽段(MTNLDTASTTLLACFLL)具有良好的免疫原性;成功制备了HPV16 E5蛋白多克隆抗体,为进一步研究HPV16 E5蛋白的生物学特性奠定了基础。 | 唐婉林 王路得 顾美萍 Kamara SAIDU 汪琪 李明洋 陈韶 张丽芳 | 2021 | 中国生物制品学杂志2021，34，6： | 4 |
| 2 | 新型冠状病毒E蛋白结构与免疫优势表位的信息学预测分析显示文摘目的:应用生物信息学方法预测和分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)包膜蛋白(E蛋白)的结构及免疫优势表位。方法:从NCBI GenBank数据库中检索SARS-CoV-2 E蛋白的氨基酸序列,通过Expas y服务器上的软件分析预测其理化性质、二级结构、跨膜区域;并结合其亲水性、表面可及性、极性、抗原性和柔韧性等综合分析,预测其可能的B细胞表位;利用Net CTL1.2 server预测CTL表位;通过Vector NTI对冠状病毒属E蛋白进行同源性分析;同时应用Swiss Model对E蛋白进行三维结构同源建模及功能结构域预测分析。结果:SARS-CoV-2 E蛋白由75个氨基酸残基组成,为跨膜蛋白,跨膜区域以α螺旋为主;E蛋白可能含有2个B细胞表位和6个CTL表位,其免疫优势表位区域分别位于其N端16-34aa和C端50-70aa区段;SARS-CoV-2与SARS-CoV和Bat-SARS-like-CoV E蛋白的免疫优势表位存在极高的同源性;其疏水性跨膜结构和PDZ结合基序分别位于N端12-34aa和C端72-75aa区段。结论:E蛋白为跨膜蛋白,其氨基酸序列的16-34和50-70区段可能为免疫优势表位。 | 李明洋 SAIDU Kamara 汪琪 郭艳茹 李青峰 朱珊丽 陈俊 蒋朋飞 张丽芳 | 2021 | 温州医科大学学报2021，51，3： | 3 |
| 3 | 小鼠PD-1及其配体PD-L1胞外区基因的原核表达及亲和性显示文摘目的:制备小鼠PD-1胞外区(mPD-1)与其配体PD-L1胞外区(mPD-L1)原核表达蛋白,并制备mPDL1兔多克隆抗体,在体外对mPD-L1和mPD-1的结合亲和性进行验证。方法:通过分子克隆方法分别构建重组质粒pET21a/mPD-L1和p GEX4T-1/mPD-1,并通过原核表达系统制备相应的重组蛋白并纯化,通过Western blot进行鉴定;将纯化的mPD-L1蛋白免疫健康日本大耳白兔制备兔多克隆血清抗体,用ELISA、Western blot分析得到的多克隆抗体的效价和特异性,并且将该多克隆抗体作为免疫荧光的阳性对照。最后应用ELISA和免疫荧光验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的亲和性。结果:SDS-PAGE和Western blot结果显示原核表达的重组蛋白与预期大小一致,mPD-L1和mPD-1分别为25 kDa和40 kDa。经mPD-L1蛋白免疫后的日本大耳白兔能够产生特异性抗体,抗体效价在免疫后第6周达到高峰,Western blot检测结果显示多克隆血清可特异性识别mPD-1。ELISA结果表明,原核表达的mPD-L1蛋白能够和mPD-1蛋白结合,实验组OD450值明显高于对照组。免疫荧光结果显示,在小鼠PD-L1阳性细胞B16(小鼠黑色素瘤细胞株)的胞膜区出现绿色荧光团块。结论:利用原核细胞表达并纯化后获得mPD-L1和mPD-1蛋白,并在体外成功验证了mPD-L1和mPD-1之间的结合特性,为后期利用mPD-1和PD-L1的生物学特性研究提供了基础。 | 吕开绩 陈旭东 程开 王路得 朱进顺 Kamara Saidu 张丽芳 朱冠保 | 2018 | 温州医科大学学报2018，48，6： | 1 |
| 4 | EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定显示文摘目的:制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)C端(187~386)的原核表达蛋白及其多克隆抗体并检验其生物学特性。方法:选择LMP1C端的基因并进行原核密码子优化,全基因合成pET21a(+)/EBVLMP1C端重组质粒,并转入E.coliBL21(DE3)感受态细菌进行诱导表达重组蛋白,利用His标签提取纯化重组蛋白并经SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定。将纯化的LMP1C端重组蛋白免疫日本大耳白兔,获得多克隆抗体,分别采用ELISA、Westernblot及免疫荧光方法对兔多克隆抗体进行分析。结果:EBVLMP1C端(187~386)重组蛋白可经原核表达系统表达;通过免疫兔获得了特异性的多克隆Ig G抗体;制备的兔多克隆抗体可特异性结合并识别LMP1C端蛋白。结论:EBVLMP1C端重组蛋白免疫原性较强,制备的兔多克隆抗体效价高、特异性强。 | 毛珊珊 王路得 周萌 吕开绩 朱进顺 Kamara Saidu 叶晓鲜 张丽芳 | 2018 | 温州医科大学学报2018，48，7： | 0 |
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