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| 1 | 龟裂链霉菌M527接合转移体系的建立和优化以及启动子的活性分析(英文)显示文摘目的:建立并优化适用于龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析四个启动子的表达活性。创新点:有效的遗传转化系统和合适的启动子是链霉菌基因表达和基因工程的必要前提。由于链霉菌的遗传背景复杂,接合转移实验参数对菌种具有高度特异性。因此,本研究建立并优化了一套适用于S.rimosus M527的属间接合转移体系,并在此基础上分析比较了四个启动子的表达活性。这将为进一步遗传修饰S.rimosus M527奠定基础。方法:以S.rimosus M527为研究对象,通过对接合转移体系中的一些重要的实验参数(如接合转移培养基、供受体比例、热激温度和混合培养时长等)进行了优化。在此基础上,构建以为报告基因的质粒,通过直观显色反应以及GUS酶活的定量检测,分析比较了四个启动子的表达活性。结论:建立了一种有效的适用于S.rimosus M527接合转移体系,优化后的接合效率最高达3.05x10^-5。分析测试的四个启动子中,合成启动子SPL-21表现出最高表达活性,比常用强组成型启动子permE^*活性高出2.2倍,合成启动子SPL-57与permE^*的活性无显著差异,内源启动子permB的活性比permE^*降低了50%。 | Zhang-qing SONG Zhi-jun LIAO Ye-feng HU Zheng MA Andreas BECHTHOLD Xiao-ping YU | 2019 | Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)2019，20，11： | 3 |
| 2 | 天蓝色链霉菌M145中otrA基因的表达对菌株形态分化、放线紫红素合成及氨基糖苷类抗生素抗性的影响(英文)显示文摘目的:将来源于龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus)M527的otr A基因在天蓝色链霉菌M145中异源表达,通过考察宿主菌对土霉素以及氨基糖苷类抗生素的抗性、放线紫红素的合成、菌株形态等方面的变化鉴定otr A基因的功能。创新点:S.rimosus中的otrA基因与转录延伸因子EF-G具有很高的同源性,被认为是土霉素的抗性基因之一,但其具体的生物学功能目前尚未有研究报道。本文首次实现otrA基因在天蓝色链霉菌M145中的异源表达,不仅提高了宿主对土霉素以及氨基糖苷类抗生素的抗性,还促进了菌株产孢和放线紫红素的合成,从而初步证实了OTRA生物学功能。方法:克隆来源于S.rimosus M527的otrA基因,将其置于链霉菌整合型载体pIB139强启动子PermE*的下游,构建重组质粒pIB139-otrA;通过接合转移将其转入天蓝色链霉菌M145获得重组菌M145-OA,实现otrA基因在天蓝色链霉菌M145中的异源表达;通过扫描电镜观察菌株的形态变化;通过含有不同浓度的不同抗生素的抗性平板筛选测试菌株的抗性水平变化;通过5-L发酵罐发酵实验考察次级代谢产物放线紫红素的合成能力变化;通过荧光定量PCR考察放线紫红素合成途径中的调控基因actII-orf4的转录水平变化。结论:来源于S.rimosus M527的otrA基因在天蓝色链霉菌M145中实现异源表达。一方面对宿主天蓝色链霉菌形态分化、放线紫红素产量的影响表明otrA可能作为一种类似延伸因子的发挥重要作用;另一方面宿主对土霉素及氨基糖苷类抗生素抗性的提高可能归因于OTRA对核糖体的保护作用。 | Yan-fang ZHAO Dan-dan LU Andreas BECHTHOLD Zheng MA Xiao-ping YU | 2018 | Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)2018，19，9： | 3 |
| 3 | Critical review: vegetables and fruit in the prevention of chronic diseases显示文摘 | Boeing H Bechthold A Bub A | 2012 | Eur J Nutr2012，51，6： | 1 |
| 4 | Structure and function of the antibiotic resistance-mediating methyltransferase AviRb from Streptomyces viridochromogenes显示文摘 | Mosbaeher T G Bechthold A Schulz G E | 2005 | J Mol Biol2005，345，3： | 1 |
| 5 | Formulation and stability mechanisms of polymerizable miniemulsions 显示文摘 | LANDFESTER K BECHTHOLD N TIARKS F | 1999 | Macromolecules1999，32，： | 1 |
| 6 | A novel dark-inducible Protein, LeDI-2, and its involvement in rootspecific secondary metabolism in Lithospermum erythrorhizon显示文摘 | Yazaki K Matsuoka H Shimomura K Bechthold A Sato F | 2001 | Plant Physiol2001，125，： | 1 |
| 7 | Succinic acid:a new platform chemical for biobased polymers from renewable resources显示文摘 | Bechthold I Bretz K Kabasci S | 2008 | Chem Eng Technol2008，31，5： | 1 |
| 8 | Critical review:vegetables and fruit in the prevention of chronic diseases显示文摘 | Boeing H Bechthold A Bub A | | 0，，06： | 1 |
| 9 | Succinic Acid: A new platform chemical for biobased polymers from renewable resources 显示文摘 | Bechthold I Bretz K Kabasci S | 2008 | Chem Eng Technol2008，31，5： | 1 |
| 10 | Succinic acid: a new platform chemical for biobased polymers from renewable resources显示文摘 | Bechthold I Bretz K Kabasci S | 2008 | Chemical engineering&technology2008，31，5： | 1 |
| 11 | Structure and action of the C-C bond-forming glycosyltransferase UrdGT2 involved in the biosynthesis of the antibiotic urdamycin显示文摘 | Mittler M Bechthold A Schulz GE | 2007 | J Mol Biol2007，372，1： | 1 |
| 12 | Chemical and biochemical aspects of deoxysugars and deoxysugar oligosaceharides 显示文摘 | Kirschning A Bechthold A F-W Rohr J | 1997 | TopCurrChem1997，18，： | 1 |
| 13 | Development of intergeneric conjugal gene transfer system in Streptomyces diastatochromogenes 1628 and its application for improvement of toyocamycin production显示文摘 | Ma Z Liu J Bechthold A | 2014 | Current Microbiology2014，68，2： | 1 |
| 14 | Succinic acid: a new platform chemical for biobased polymers from renewable resources显示文摘 | BECHTHOLD I BRETZ K KABASCI S | 2008 | Chem Eng Technol2008，31，5： | 1 |
| 15 | Overexpression of ribosome recycling factor is responsible for improvement of nucleotide antibiotic-toyocamycin in Streptomyces diastatochromogenes 1628显示文摘 | Ma Z Tao L Bechthold A | 2014 | Applied Microbiology and Biotechnology2014，98，11： | 1 |
| 16 | Cloning of the genes coding for chorismate pyruvate-lyase and 4-hydroxybenzoate octaprenyl transferase from Escherichia coli显示文摘 | Siebert M Bechthold A Melzer M | 1992 | FEBS Lett1992，307，： | 1 |
| 17 | Structure and function of the antibiotic resistance-mediating methyl- transferase AviRb from streptomyces viridoehromogenes显示文摘 | MOSBACHER T G BECHTHOLD A SCHULZ G E | 2005 | Jour- nal of Molecular Biology2005，345，3： | 1 |
| 18 | Succinic acid: a new platform chemical for biobased polymers from renewable resources显示文摘 | Bechthold I Bretz K Kabasci S Kopitzky R Springer A | 2008 | Chemical Engineering &Technology2008，31，： | 1 |
| 19 | Two sequence elements of glycosyltransferases involved in urdamycin biosynthesis are responsible for substrate specificity and enzymatic activity显示文摘 | Hoffmeister D Ichinose K Bechthold A | 2001 | Chem Biol2001，8，16： | 1 |
| 20 | Evidence for the preservation of the particle identity in miniemulsion polymerization 显示文摘 | Landfester K Bechthold N F Rater S | 1999 | Macromolecules1999，20，： | 1 |
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