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| 1 | 应用CRISPR/Cas9系统构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系显示文摘目的利用成簇的、规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)基因组编辑技术,构建Rev-erbβ基因敲除的HEK293细胞系。方法通过单向导RNA(sgRNA)介导Cas9蛋白对目的基因靶位点DNA进行特异性的切割,然后经DNA同源重组单向导RNA或非同源末端连接方式进行修复,以实现对Rev-erbβ基因进行敲入、敲除修饰操作的目的。首先,针对Rev-erbβ基因设计4个sgRNA,经筛选选择活性较高的sgRNA1及sgRNA2用于构建p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2串联载体。然后将p CMV-h Cas9-U6-Rev-erbβsgRNA1&sgRNA2和p Ad-E1/hRev-erbβdonor质粒载体共转染至HEK293细胞,通过药物筛选、克隆化及序列测序获得整合有外源供体基因片段的一条链,另一条链为片段缺失的Rev-erbβ基因完全敲除的HEK293(Rev-erbβ-/-)细胞系。最后通过用Western blot法和实时定量PCR对敲除Rev-erbβHEK293细胞系(C3-6)进行检测。结果敲除Rev-erbβ基因的HEK293细胞系中均未检测到Rev-erbβmRNA和蛋白质的表达。结论利用CRISPR/Cas9技术,成功构建了基因定点修饰和敲除的Rev-erbβ-/-HEK293细胞系,为Rev-erbβ的功能和作用机制研究提供有效工具。 | 陈芳 张伟锋 赵俊丽 杨沛艳 马锐 夏海滨 | 2016 | 细胞与分子免疫学杂志2016，32，11： | 5 |
| 2 | 类风湿关节炎与钟基因相关性的研究进展显示文摘目的类风湿关节炎(RA)的昼夜节律性已被研究了许多年,并取得了很多重要的成果。比如前期研究发现了RA炎性因子的时间节律性,并引进了时间疗法,采用夜间服用小剂量糖皮质激素缓释剂,极大地改善了临床症状同时降低了长期服用激素药物的不良反应。近年来,钟基因的研究成为热点,钟基因在多种疾病中都发挥了重要作用,其对RA的影响尤为突出。但钟基因与RA的病理机制仍未彻底阐明,伴随着钟基因参与RA发病机制的明确,针对钟基因输出的靶向治疗方案必将取得更大的突破,从而为解决RA这一世界难题提供全新的思路。钟基因与RA的相关性值得更加全面深入的探索。 | 吴晓 马文彬 刘旭光 | 2018 | 广东医学2018，39，3： | 5 |
| 3 | 小鼠肝脏胆酸合成及转运基因表达的昼夜节律显示文摘目的观察昆明种小鼠肝脏胆酸合成基因及转运体表达的昼夜节律变化。方法成年昆明种小鼠48只,适应性饲养1周后,随机分为6组(每组8只,雌雄各半),分别于06∶00、10∶00、14∶00、18∶00、22∶00、02∶00不同时间点收集动物肝脏,提取肝脏总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR法检测肝脏胆酸代谢途径相关基因的mRNA表达。结果小鼠胆酸合成限速酶Cyp7a1,Cyp27a1mRNA最高表达在18∶00,且雌性表达高于雄性;而Cyp8b1和Cyp7b1表达最高则在10∶00,其中Cyp7b1表现为雄性高于雌性;肝脏核受体FXR在18∶00表达最高;且雌性表达高于雄性,SHP雌性表达最高在18∶00,而雄性最高表达则出现在10∶00;转运体Ntcp的最高表达在18∶00,Bsep最高表达则在14∶00,且雌性表达高于雄性。结论小鼠肝脏胆酸代谢基因表达存在昼夜节律性,且存在性别差异。 | 徐亚沙 李书俊 吴芹 陆远富 刘杰 | 2015 | 遵义医学院学报2015，38，5： | 3 |
| 4 | 石斑鱼转录因子NR1D1和NR1D2在冷胁迫中的调控作用显示文摘NR1D1和NR1D2转录因子属于核受体转录因子家族,二者通过调控靶基因表达参与众多生物学过程,尤其在昼夜节律调节中发挥重要作用。本研究通过分析NR1D1和NR1D2的蛋白质分子特征以及在冷胁迫下珍珠龙胆石斑鱼(Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂)的基因调控关系以及它们所参与的通路,揭示它们在鱼类低温环境中的功能作用。生物信息学比较分析显示NR1D1和NR1D2基因序列均有23个开放阅读框,编码的蛋白质均属于不稳定的亲水性蛋白质。NR1D1和NR1D2蛋白质均含有ZF-C4类锌脂蛋白结构域和Hormone_Recep核激素受体的配体结合域,主要配体为含铁原卟啉IX。这两种蛋白主要在细胞核中发挥调控基因表达的作用,且与昼夜节律通路的多个关键基因有直接作用关系。结果表明,在冷胁迫下NR1D1和NR1D2作为转录因子可通过调控靶基因的表达,参与昼夜节律调节并促进糖脂代谢、线粒体氧化等过程,为珍珠龙胆石斑鱼提供必要的能量,有助于增强其耐寒性。 | 苗奔奔 林楚 曹文科 梁燕珊 吴仁协 牛素芳 梁镇邦 | 2024 | 应用海洋学学报2024，43，1： | 0 |
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