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1槲皮素对人胃癌MKN45细胞的抑制作用研究显示文摘目的探讨槲皮素对人胃癌MKN45细胞凋亡的影响及其作用机制。方法取对数生长期的MKN45细胞分为对照组和20、40、80μmol/L槲皮素组。应用MTT比色法测定细胞活性,Hoechst染色、流式细胞技术检测细胞凋亡,比色法检测凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达。结果槲皮素能显著抑制MKN45细胞增殖,促进细胞凋亡,升高Caspase-3、Caspase-9基因表达水平。结论槲皮素可通过增强Caspase-3、Caspase-9基因表达诱导人胃癌MKN45细胞凋亡。付丽娜 刘维红 徐爱军 宋丽杰 2017现代药物与临床2017,32,6:16
2四君子汤对胃癌细胞株SGC-7901侧群细胞增殖的影响显示文摘目的对胃癌细胞株SGC-7901侧群(side population,SP)细胞、非侧群(non-side population,NSP)细胞及未分选(Total)细胞进行四君子汤药物血清干预,观察药物血清干预后胃癌细胞株SGC-7901的SP、NSP及Total细胞增殖能力的变化。方法 16只纯种新西兰家兔按随机数字表法分为对照组及四君子汤低[7 mL/(kg·d)]、中[14 mL/(kg·d)]、高[28 mL/(kg·d)]剂量组,每组4只,每组动物给予对应等体积灌胃,每天2次,持续2周。提取兔血清,应用高效液相色谱法对药物血清进行鉴定;应用流式细胞仪对人胃癌细胞株SGC-7901的SP细胞进行检测并分选出SP及NSP细胞;应用CCK-8法检测SP、NSP及Total细胞的增殖曲线及药物血清干预后的SP、NSP及Total细胞增殖能力变化。结果在制备的药物血清中检测到四君子汤的有效成分人参皂苷Rg1;胃癌细胞株SGC-7901 SP细胞的增殖能力明显高于NSP及Total细胞(P<0.05),药物血清对胃癌细胞株SGC-7901 SP、NSP及Total细胞的增殖具有抑制作用,但对SP细胞的增殖抑制作用明显低于NSP及Total细胞(P<0.05)。结论四君子汤可以明显抑制胃癌细胞株SGC-7901的SP、NSP及Total细胞增殖,但对3组细胞抑制程度存在明显差异。李靖 钱军 贾建光 金鑫 喻大军 谢波 钱立宇 张立功 郭晨旭 2014中国中西医结合杂志2014,34,6:12
3Radiobiological characteristics of cancer stem cells from esophageal cancer cell lines显示文摘AIM:To study the cancer stem cell population in esophageal cancer cell lines KYSE-150 and TE-1 and identify whether the resulting stem-like spheroid cells display cancer stem cells and radiation resistance characteristics.METHODS:A serum-free medium(SFM)suspension was used to culture esophageal cancer stem cell lines and enrich the esophageal stem-like spheres.A reverse transcription polymerase chain reaction assay was used to detect stem cell gene expression in the spheroid cells.Radiosensitivity of stem-like spheres and parental cells were evaluated by clonogenic assays.Furthermore,different cells after different doses of irradiation were tested to evaluate the change in sphere formation,cell cycle and CD44+CD271+expression of tumor stem-like spheroid cells using flow cytometry beforeand after irradiation.RESULTS:The cells were observed to generate an increased number of spheres in SFM with increasing cell passage.Radiation increased the rate of generation of stem-like spheres in both types of cells.The average survival fraction(SF2)of the cultured KYSE-150compared with TE-1 stem-like spheres after 2 Gy of radiation was 0.81±0.03 vs 0.87±0.01(P<0.05),while the average SF2 of KYSE-150 compared with TE-1 parental cells was 0.69±0.04 vs 0.80±0.03,P<0.05.In the esophageal parental cells,irradiation dose-dependently induced G2 arrest.Stem-like esophageal spheres were resistant to irradiation-induced G2arrest without significant changes in the percentage population of irradiated stem-like cells.Under irradiation at 0,4,and 8 Gy,the CD44+CD271+cell percentage for KYSE150 parental cells was 1.08%±0.03%vs1.29%±0.07%vs 1.11%±0.09%,respectively;the CD44+CD271+cell percentage for TE1 parental cells was 1.16%±0.11%vs 0.97%±0.08%vs 1.45%±0.35%,respectively.The differences were not statistically significant.Under irradiation at 0,4,and 8 Gy,the CD44+CD271+cell percentage for KYSE-150 stemlike spheres was 35.83%±1.23%vs 44.9%±1.67%vs 57.77%±1.88%,respectively;the CD44+CD271+cell percentage for TE1 stem-like spheres was 16.07%±0.91%vs 22.67%±1.12%,16.07%±0.91%vs33.27%±1.07%,respectively.The 4 and 8 Gy irradiated KYSE-150 and TE-1 stem-like spheres were compared with the 0 Gy irradiated group,and the differences were statistically significant(P<0.05).CONCLUSION:The KYSE-150 and TE-1 stem-like spheres are more radioresistant than their parental cells which may suggest that cancer stem cells are related to radioresistance.Jian-Lin Wang Jing-Ping Yu Zhi-Qiang Sun Su-Ping Sun 2014World Journal of Gastroenterology2014,20,48:11
4Gastric cancer stem cells in gastric carcinogenesis,progression,prevention and treatment显示文摘In recent decades,the study of the mechanism of tumorigenesis has brought much progress to cancer treatment.However,cancer stem cell(CSC)theory has changed previous views of tumors,and has provided a new method for treatment of cancer.The discovery of CSCs and their characteristics have contributed to understanding the molecular mechanism of tumor genesis and development,resulting in a new effective strategy for cancer treatment.Gastric CSCs(GCSCs)are the basis for the onset of gastric cancer.They may be derived from gastric stem cells in gastric tissues,or bone marrow mesenchymal stem cells.As with other stem cells,GCSCs highly express drug-resistance genes such as aldehyde dehydrogenase and multidrug resistance,which are resistant to chemotherapy and thus form the basis of drug resistance.Many specific molecular markers such as CD44 and CD133 have been used for identification and isolation of GCSCs,diagnosis and grading of gastric cancer,and research on GCSC-targeted therapy for gastric cancer.Therefore,discussion of the recent development and advancements in GCSCs will be helpful for providing novel insight into gastric cancer treatment.Kang Li Zeng Dan Yu-Qiang Nie 2014World Journal of Gastroenterology2014,20,18:10
5Tumor heterogeneity of gastric cancer: From the perspective of tumor-initiating cell显示文摘Gastric cancer(GC) remains one of the most common and malignant types of cancer due to its rapid progression, distant metastasis, and resistance to conventional chemotherapy, although efforts have been made to understand the underlying mechanism of this resistance and to improve clinical outcome. It is well recognized that tumor heterogeneity, a fundamental feature of malignancy, plays an essential role in the cancer development and chemoresistance. The model of tumor-initiating cell(TIC) has been proposed to explain the genetic, histological, and phenotypical heterogeneity of GC. TIC accounts for a minor subpopulation of tumor cells with key characteristics including high tumorigenicity, maintenance of self-renewal potential, giving rise to both tumorigenic and non-tumorigenic cancer cells, and resistance to chemotherapy. Regarding tumor-initiating cell of GC(GATIC), substantial studies have been performed to(1) identify the putative specific cell markers for purification and functional validation of GATICs;(2) trace the origin of GATICs; and(3) decode the regulatory mechanism of GATICs. Furthermore, recent studies demonstrate the plasticity of GATIC and the interaction between GATIC and its surrounding factors(TIC niche or tumor microenvironment). All these investigations pave the way for the development of GATIC-targeted therapy, which is in the phase of preclinical studies and clinical trials. Here, we interpret the heterogeneity of GC from the perspectives of TIC by reviewing the above-mentioned fundamental and clinical studies of GATICs. Problems encountered during the GATIC investigations and the potential solutions are also discussed.Jian-Peng Gao Wei Xu Wen-Tao Liu Min Yan Zheng-Gang Zhu 2018World Journal of Gastroenterology2018,24,24:9
6侧群细胞及其在肿瘤干细胞研究中的进展显示文摘肿瘤干细胞研究已成为国内外研究热点。肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织中存在一小部分具有自我更新及多向分化潜能的细胞,在肿瘤耐药和复发中起着关键的作用,这一部分细胞被称为肿瘤干细胞。目前肿瘤干细胞的分离、富集方法主要有:侧群细胞分选技术、细胞表面特异性分子标记筛选技术、肿瘤微球培养技术、细胞滞留标记技术、ALDEFLUOR分析技术等。侧群细胞是一小群能够将核酸染料Hoechst 33342排出,经过流式细胞检测呈Hoechst 33342低染的细胞。侧群细胞中富含肿瘤干细胞,其分选技术已作为简单有效的富集肿瘤干细胞的方法应用在肿瘤干细胞研究中。郑丹薇 廖珊 朱广超 周艳宏 李桂源 2014中南大学学报(医学版)2014,39,5:8
7人参对胃癌SGC-7901侧群细胞裸鼠移植瘤生长及Bcl-2、Bax表达的影响显示文摘目的探讨人参对胃癌SGC-7901侧群(SP)细胞裸鼠移植瘤生长及Bcl-2、Bax表达的影响。方法分选SP和非侧群(NSP)细胞;熬制人参汤剂,制备人参含药血清;Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax表达;建立裸鼠移植瘤模型,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率;免疫组化法检测瘤体Bcl-2、Bax的表达。结果 SP细胞生理盐水(NS)组移植瘤体积明显大于NSP细胞NS组(P<0.05),NS组移植瘤体积明显大于相应人参组,差异有统计学意义(P<0.01),SP细胞人参组移植瘤体积与NSP细胞人参组差异无统计学意义;SP组和NSP组人参的抑瘤率分别为43.04%、31.55%;Western blot及免疫组化显示人参可抑制移植瘤Bcl-2、诱导Bax的表达,与相应NS组比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 SP细胞的成瘤能力较NSP细胞强,人参可以抑制裸鼠移植瘤的生长,机制可能与诱导细胞凋亡相关。钱军 刘元 郭成旭 朱超 承泽农 2016安徽医科大学学报2016,51,6:7
8胃癌干细胞表面标记物的研究与最新进展显示文摘背景:最近人们研究发现,肿瘤的复发与肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞理论为研究胃癌的发病机制以及诊治开辟了新的途径,确定的表型有利于锁定胃癌干细胞,这有助于探讨胃癌干细胞在自我更新和分化过程中的作用,并为治疗胃癌提供新思路,但其表型仍存在争议。目的:综述胃癌干细胞表面标志物的研究进展。方法:由第一作者分别以'Gastric Cancer Stem Cells'为英文关键词检索PubM ed英文数据库(http://gffzz16a62c593b5540ceh6x95x5vpnqqn69w6.ffgz.tsg.suse.edu.cn/pubmed)中1965年1月至2015年10月的文献,共保留68篇文献进行综述。结果与结论:通过分析整理,传统上的肿瘤干细胞表型不适合于标记胃癌干细胞。研究发现CD90在胃癌原发性肿瘤中有表达,分离后经无血清肿瘤球培养法培养可获得肿瘤球。CD24的表达有助于提高胃癌细胞的黏附、侵袭、迁移能力。此外研究证实CD44及CD54共表达的细胞会大量出现在胃癌复发早期患者的体内而不是晚期,表达CD44及CD54的肿瘤细胞很可能是导致胃癌发生以及复发的重要原因。综上所述,CD44^+CD24^+CD90^+CD54^+很可能是胃癌干细胞的表型。杜华 师迎旭 2016中国组织工程研究2016,20,41:6
9胃癌细胞系SGC-7901肿瘤干细胞样细胞的分离和鉴定显示文摘目的探讨人胃癌细胞系SGC-7901中鉴定胃癌干细胞样细胞。方法采用无血清培养基培养胃癌细胞系SGC-7901,得到悬浮生长状态的细胞球;流式细胞术分别检测贴壁胃癌细胞和悬浮细胞球中Side Population(SP)侧群细胞的含量;NOD/SCID鼠体内异位移植成瘤实验检测成瘤能力;基因芯片技术筛选悬浮细胞球与贴壁细胞差异表达的基因;实时荧光定量PCR验证基因芯片结果。结果 (8.00±0.54)%SGC-7901细胞在无血清培养基中能增殖并形成可连续传代的细胞球;悬浮细胞球中SP细胞百分含量高达(12.34±1.01)%,贴壁细胞情况中SP仅占(0.62±0.05)%;NOD/SCID小鼠成瘤实验显示,悬浮球细胞组致瘤能力高于贴壁细胞组;基因芯片结果显示,肿瘤球高表达与干细胞相关的基因ABCG2、HES1和KRT153。实时荧光定量PCR方法检测结果与基因芯片结果基本一致。结论胃癌细胞系SGC-7901中存在肿瘤干细胞样细胞。许扬梅 龚福生 陈雪芳 郑秋红 2013福建医科大学学报2013,47,4:4
10茯苓对胃癌细胞株SGC-7901的侧群细胞增殖的影响显示文摘目的:探讨含茯苓药物血清对胃癌细胞SGC-7901侧群细胞(side population,SP)的增殖能力的影响。方法:首先制作含茯苓药物血清。之后应用流式细胞仪技术分选体外培养的胃癌SGC-7901细胞株中的SP细胞。应用CCK-8法观察含茯苓药物血清干预SP细胞后细胞增殖能力的变化。之后利用流式细胞仪技术检测含茯苓药物血清干预SP细胞后细胞周期的变化。结果:胃癌SGC-7901细胞株中SP细胞比例为4.4%±0.6%。含茯苓药物血清干预后,胃癌SGC-7901细胞株SP细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.01)。此外,含茯苓药物血清干预后,SP细胞的细胞周期被阻滞于G0、G1期,而S、G2/M期细胞减少,并且随着干预时间的延长,此种趋势更加明显,同时也就验证了细胞增殖实验的实验结果。结论:研究结果表明,胃癌SGC-7901细胞株中存在且能成功分选出SP细胞。含茯苓药物血清通过对细胞周期的改变,来抑制胃癌SGC-7901细胞株SP细胞的增殖能力。郭晨旭 钱军 2014中国临床药理学与治疗学2014,19,11:4
11川芎嗪对PGcABCG-2蛋白影响的研究显示文摘目的研究川芎嗪对肺癌PG-BE1干细胞样细胞ABCG-2蛋白表达的影响。方法采用无血清成球培养法分选PG-BE1中的干细胞样细胞亚群,并检验其干性,采用MTT法检测PG-BE1干细胞样细胞与原代细胞对常用化疗药的耐药性。采用Western blot法检测PG-BE1干细胞样细胞与原代细胞ABCG-2蛋白表达及不同浓度川芎嗪对ABCG-2蛋白表达的影响。结果 PG-B1干细胞样细胞的干细胞相关蛋白表达及克隆灶形成数目与原代细胞差异有统计学意义;PG-BE1干细胞样细胞化疗药耐药性强于原代细胞;PG-BE1干细胞样细胞ABCG蛋白表达高于原代细胞;川芎嗪对ABCG蛋白的表达有抑制作用。结论无血清成球培养法可有效富集PG-BE1干细胞样细胞,PG-BE1干细胞较其原代细胞有更强的耐药性,这可能与其高表达ABCG-2蛋白有关,川芎嗪对PG-BE1干细胞样细胞ABCG-2蛋白有抑制作用。杨栋 张培彤 王耀焓 郭秀伟 马雪曼 2015吉林中医药2015,35,8:3
12人结肠直肠癌组织中侧群细胞分选、鉴定及其化疗耐药特性的初步研究显示文摘目的分选人结肠直肠癌组织中侧群(SP)细胞,探讨其相关生物学特性。方法利用Hoechst33342染色荧光激活细胞分选(FACS)技术分选SP细胞,非侧群(NSP)细胞作为对照。三维(TD)培养分选的SP细胞,分析其在裸鼠体内致瘤能力。无血清培养观察SP细胞与NSP细胞的成球能力,水溶性四唑盐试剂(WST)分析SP细胞与NSP细胞的耐药性差异。结果人结肠直肠癌组织中SP细胞的比例为(0.90±0.10)%。SP细胞在无血清培养基中形成悬浮细胞球的能力强于NSP细胞。在103、104、105、106个SP细胞接种裸鼠皮下时,其成瘤率分别为30.0%、50.0%、70.0%、100.0%,而NSP细胞的成瘤率分别为0%、0%、40.0%、60.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。耐药实验中,SP细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的耐药性显著高于NSP细胞(P<0.05)。结论人结肠直肠癌组织中有SP细胞,SP细胞具有干细胞特性,SP细胞能在无血清培养基中以细胞球的形态存在,SP细胞对5-FU有耐药性。刘贵远 周海华 张超逸 徐洁 2020实用临床医药杂志2020,24,4:1
13胃癌干细胞抗原负载树突细胞与细胞因子诱导的杀伤细胞显示文摘背景:目前临床常用的治疗手段难以彻底消灭肿瘤,其原因主要是由于肿瘤干细胞的存在。目的:探讨胃癌干细胞抗原负载树突细胞结合细胞因子诱导杀伤细胞对胃癌细胞的影响。方法:分离人胃癌细胞系侧群细胞,利用冻融法制备肿瘤抗原,将胃癌干细胞与树突细胞、树突细胞-杀伤细胞、胃癌细胞抗原、胃癌干细胞抗原进行联合培养,采用MTT检测胃癌细胞杀伤率,记录各组树突细胞表面成熟标志CD83表达率。结果与结论:(1)树突细胞组、树突细胞-杀伤细胞组、胃癌细胞抗原组的树突细胞表面成熟标志CD83表达率均显著低于胃癌干细胞抗原组,差异均有显著性意义(P<0.05);(2)树突细胞组、树突细胞-杀伤细胞组、胃癌细胞抗原组的胃癌细胞杀伤率均显著低于胃癌干细胞抗原组,差异均有显著性意义(P<0.05);(3)结果表明,以胃癌干细胞作为抗原刺激树突细胞,并结合细胞因子对杀伤细胞进行诱导,可以促进细胞增殖以及提高胃癌细胞的杀伤能力。文利红 胡文杰 叶恒曦 向卫东 2016中国组织工程研究2016,20,36:1
14神经母细胞瘤SP细胞的分离鉴定及增殖功能分析显示文摘目的检测人神经母细胞瘤细胞系SH—SY5Y及wN中是否存在侧群(side popula—tion,SP)细胞,并研究该sP细胞是否具有干细胞某些生物学特性。方法经Hoechst33342荧光染料和PI染色,流式细胞仪分析并分选SP细胞,并再次经流式细胞仪分析验证。采用免疫荧光及RT-PCR分析SP细胞ABCG2,CDl33的表达情况。MTT法分析SP细胞及NSP细胞的增殖能力。结果人神经母细胞瘤细胞系SH—SY5Y及WN中存在SP细胞,其比例在0.2%~1.3%左右,维拉帕米阻断后减少为0.1%~0.5%左右。免疫荧光及RT-PCR分析表明sP细胞表达ABCG2及CDl33。MTT证实SP细胞与NSP细胞的增殖能力有差异(P〈0.05)。结论人神经母细胞瘤细胞系细胞中的SP细胞具有肿瘤干细胞特性。邢莉莉 沙永亮 吴晔明 2013中华小儿外科杂志2013,34,5:1
15人原代胃癌细胞中肿瘤干细胞的分离与鉴定显示文摘目的 :探讨联合应用无血清微球培养技术及磁珠分离技术从新鲜胃癌组织中分离与鉴定人胃癌干细胞的方法。方法 :利用新鲜胃癌组织获得胃癌原代培养细胞,行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)免疫组织化学鉴定证实为胃癌细胞后,体外进一步行无血清微球体培养获得胃癌微球体细胞;采用免疫荧光法检测胃癌球体细胞中CD44的表达,并以CD44为标志物对胃癌球体细胞进行免疫磁珠分选;将分选出的CD44+细胞接种SCID小鼠,观察移植瘤的生长情况,HE染色观察移植瘤组织中细胞形态结构的情况,免疫组织化学法检测CEA和CD44的表达情况。结果 :17例新鲜胃癌组织中成功培养出高、中和低分化程度胃癌细胞各1例;以无血清微球体培养法培养获得胃癌微球体细胞中CD44高表达;分选获得的CD44+细胞更早更快形成移植瘤,移植瘤组织见干细胞的自我更新及分化特性。结论 :利用无血清微球体培养法结合以CD44为标志物的免疫磁珠分离技术可以高效募集新鲜胃癌组织中的肿瘤干细胞。胡孔旺 秦蓉 吴黎明 朱化刚 韩文秀 尹纯林 李鸿君 2014肿瘤2014,34,8:1
16人原代胃癌细胞中肿瘤干细胞的分化培养显示文摘背景:肿瘤干细胞与肿瘤的发生和复发存在密切的联系,但是否所有肿瘤中都存在肿瘤干细胞,仍存有一定的争议。目的:探讨人原代胃癌细胞中肿瘤干细胞的分化培养效果。方法:获得新鲜胃癌组织进行原代培养,并进行苏木精-伊红染色和CEA免疫组化鉴定。利用无血清微球体培养体系获得胃癌微球体细胞,免疫荧光法检测微球体细胞CD44表达。以CD44作为标志物对胃癌微球体细胞进行免疫磁珠分选,将分选出的细胞接种于小鼠腋窝后方皮下,观察移植肿瘤生长情况。结果与结论:(1)以无血清培养体系获得人原代胃癌微球体细胞。球体培养获得的细胞中CD44+细胞数量显著多于常规培养获得的细胞(P<0.05);(2)球体培养细胞接种小鼠的移植肿瘤体积增长速度明显快于常规培养细胞接种;(3)移植90 d,获得肿瘤标本,可见球体培养细胞接种小鼠的移植瘤体积明显大于常规培养细胞接种;(4)实验结果表明,利用无血清微球体培养体系结合免疫磁珠分离法可以从胃癌组织中分离出肿瘤干细胞,该细胞具有一定的成瘤性。王影 2016中国组织工程研究2016,20,23:0
17肿瘤干细胞与胃癌的研究进展显示文摘肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是指一类存在肿瘤细胞中少量具有自我更新、繁殖能较强的细胞,该类细胞与肿瘤的发生、发展、转移和预后有着重要的关系。传统的理论认为所有的肿瘤细胞都具有自我更新和无限繁殖能力,都能再次形成新的肿瘤细胞,这与恶性肿瘤的生物学特性有所不符。而CSCs理论认为:肿瘤组织中只有极少数的肿瘤细胞能分裂增殖形成肿瘤,这部分细胞即是CSCs,CSCs和正常干细胞一样,它具有自我更新和分化增殖的特征,巩佃霞 李贵新 王文浩 李方超 2013中国临床研究2013,26,10:0
18胃肠间质瘤与转化医学显示文摘胃肠间质瘤(Gastrointestinal stromal tumor,GIST)是近些年实体瘤诊治中取得显著突破的肿瘤类型.而进步的根本原因就在于成功实现了从发现其发病机制到抑制或阻断这一过程的药物研发及应用的快速转化.对本病的认识与诊治过程,本身就是对于肿瘤转化医学这一新兴的医学研究模式极佳的诠释.何裕隆 2013腹部外科2013,,6:0
19胃干细胞和胃癌干细胞的研究进展显示文摘在我国胃癌患者中,约90%是进展期腺癌,仅约10%为早期胃癌.而其中以胃腺癌最常见,并可分为肠型、弥漫型和混合型[1].据估计,美国每年花在胃癌治疗上的费用约为18.2亿美元[2].不管是传统的治疗方法如手术、放疗、化疗,还是有针对性的靶向治疗,总的5年生存率仍仅约20%.祝一鸣 俞继卫 姜波健 2013腹部外科2013,,6:0
20胃癌侧群细胞与肿瘤干细胞的研究新思路显示文摘以肿瘤干细胞(CSC)理论为基础,人们一直在探索恶性肿瘤的治疗方案。胃癌侧群细胞(SP)具有肿瘤干细胞特性。从胃癌侧群细胞出发,基于肿瘤干细胞理论,探讨胃癌的分子靶向治疗策略,可以为胃癌的早期诊断、治疗效果的鉴定、预后以及胃癌的治疗道路寻找新的方向。郭晨旭 钱军 2013国际肿瘤学杂志2013,40,7:0
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