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| 1 | 构建Tet-on调控稳定表达肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子-4的人类MSCs细胞株显示文摘目的:通过慢病毒转染UE7T-13细胞,构建Tet-on基因开关调控稳定表达肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、成纤维细胞生长因子-4(fibroblast growth factor 4,FGF4)的人类骨髓间充质干细胞株.方法:全基因合成HGF和FGF4序列,通过酶切、重组分别构建包含目的基因HGF、FGF4的两个慢病毒载体plenti6.3/TO-HGF和plenti6.3/TO-FGF4,包装并计算其滴度.以U E7T-13细胞最适M O I值稀释慢病毒Lenti3.3/T R,并转染U E7T-13细胞,加入抗生素Zeocin筛选,获得带有Tet-on基因调控开关的UE7T-13-TR细胞株.采用已构建好的慢病毒plenti6.3/TO-HGF和plenti6.3/TOF G F4分别转染U E7T-13-T R细胞并经过抗生素Blasticidin筛选,构建Tet-on调控稳定表达HGF的UE7T-13-TR-HGF细胞株和Tet-on调控稳定表达FGF4的UE7T-13-TR-FGF4细胞株.通过Q-PCR、Western blot及ELISA在基因、蛋白及蛋白分泌水平检测目的基因HGF、FGF4的表达情况.结果:成功构建UE7T-13-TR-HGF和UE7T-13-TR-FGF4细胞株.经Q-PCR检测,当Tet存在时,HGF基因在UE7T-13-TR-HGF中的表达为无Tet时的78倍;FGF4基因则超过2万倍,且1μg/m L的Tet为较佳浓度.Western blot及ELISA结果在蛋白表达水平及蛋白分泌水平验证了以上结果,证明已合成的HGF及FGF4能成功分泌到细胞外.结论:通过慢病毒转染UE7T-13细胞,我们成功构建出Tet可调控稳定表达HGF、FGF4细胞株(UE7T-13-TR-HGF和UE7T-13-TRF G F4细胞株),为进一步的研究奠定了良好的实验基础. | 肖江强 施晓雷 袁献温 丁义涛 | 2015 | 世界华人消化杂志2015，23，27： | 2 |
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