| 1 | 黄羽肉鸡胰蛋白酶原的原核表达及其在体内分布的研究显示文摘本试验对胰蛋白酶原(trypsinogen,TRY)进行原核表达并对其诱导条件、纯化条件进行优化,将纯化后的目的蛋白免疫新西兰白兔,制备兔抗TRY多克隆抗体。利用免疫组织化学法、PCR技术和荧光定量PCR技术分析TRY在不同日龄雌雄黄羽肉鸡体内的分布情况。结果显示,诱导表达重组蛋白的最佳诱导条件为37℃200r/min,0.8mmol/LIPTG,诱导时间为24h;亲和层析法纯化蛋白以160mmol/L的咪唑洗脱效果最好;TRY基因在黄羽肉鸡体内的组织分布具有广泛性,但雌雄黄羽肉鸡各组织的TRY表达量存在差异;TRY基因从1日龄即随着黄羽肉鸡的生长发育表达量也随之增加,在14日龄时,其表达量极显著提高;胰腺组织TRY基因具有性别差异性,在14、35和56日龄,雄性黄羽肉鸡的表达量高于雌性的表达量,差异显著(P〈0.05)。上述研究结果可为进一步研究肉鸡胰蛋白酶原结构与功能、肠道消化功能的早期发育过程提供参考。 | 许丽惠 胡世忠 吴卓秋 詹湉湉 王全溪 王长康 | 2018 | 中国兽医科学2018，48，9： | 2 |
| 2 | 兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b^(0,+)AT多克隆抗体的制备及其效价和特异性分析显示文摘为了获得兔抗鸡碱性氨基酸转运载体b0,+AT多克隆抗体,并对多克隆抗体进行特异性分析,本试验利用鸡b0,+AT cDNA全序列(GenBank登录号HQ338713)进行生物信息学分析,预测其蛋白质理化性质、跨膜区域、二级结构及抗原表位,并设计出1段抗原多肽;构建鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒,原核表达融合蛋白经纯化后,注射于新西兰大白兔,经3次加强免疫后,制备兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,并采用酶联免疫分析(ELISA)和蛋白质免疫印迹(Westernblot)技术分析其效价和特异性。结果如下:1)鸡肠道b0,+AT分子质量为53.8 ku,等电点为8.27,编码493个氨基酸,其中含33个强碱性氨基酸残基(K、R)、28个强酸性氨基酸残基(D、E)、235个疏水性氨基酸残基(A、I、L、F、W、V)、122个极性氨基酸残基(N、C、Q、S、T、Y);经推测,b0,+AT有12个跨膜螺旋结构,由32.05%α-螺旋、25.96%延伸链和41.99%无规则卷曲组成。2)成功构建了鸡pET-32a(+)-b0,+AT质粒并获得兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体,抗体效价可达到1∶204 800,且特异性较好。3)利用制备的兔抗鸡b0,+AT多克隆抗体作为一抗,肠道组织膜蛋白为抗原,采用Western blot验证获得预期的特异性条带,一抗稀释比例为1∶4 000。结果提示,本试验成功制备了与膜蛋白b0,+AT特异性较好的多克隆抗体,同时其在鸡肠道组织中具有较好的应用效果。 | 孙育平 甘鲁飞 夏伟光 冯定远 左建军 | 2013 | 动物营养学报2013，25，5： | 0 |
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