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| 1 | Role of ornithine decarboxylase in breast cancer显示文摘鸟氨酸 decarboxylase (ODC ) ,在 polyamine 生合成的限制率的酶那 decarboxylates 鸟氨酸到 putrescine,为癌症研究成为了一个有希望的目标。这研究的目的是在乳癌调查 ODC 的角色。我们在乳癌纸巾和四个乳癌房间检测了 ODC 的表示线,和有带 antisense ODC (rAd-ODC/Ex3as ) 的 adenoviral 向量的 transfected 乳癌房间并且检验了他们的生长和迁居。ODC 是在乳癌纸巾的 overexpressed,房间与非肿瘤纸巾和正常的胸相比衬里上皮的房间,并且在 ODCmRNA 的水平和肿瘤的阶段之间有积极关联。ODC 的表示与 cyclin D1 相关,房间周期蛋白质,在同步乳癌 MDA-MB-231 房间。rAd-ODC/Ex3as 的基因 transfection ODC 和 cyclin D1 的显著地下面调整的表示,在殖民地形成,一个抛锚无关的生长模式,和 MDA-MB-231 房间的迁移的能力的 G 0-G1 阶段,和抑制导致增长和房间周期拘捕的抑制。rAd-ODC/Ex3as 显著地也减少了 putrescine,然而并非亚精胺或精胺的集中,在 MDA-MB-231 房间。结果建议 ODC 基因可能为乳癌充当一个预示的因素,它能是一个有希望的治疗学的目标。 | Wensheng Deng Xian Jiang Yu Mei Jingzhong Sun Rong Ma Xianxi Liu Hui Sun Hui Tian Xueying Sun | 2008 | Acta Biochimica et Biophysica Sinica2008，40，3： | 8 |
| 2 | 新型重组人血小板衍化生长因子B腺病毒载体的构建与转染牙周干细胞的研究显示文摘目的构建人血小板衍化生长因子B(platelet—derived growth factor—B,PDGF—B)重组复制缺陷型腺病毒载体,使其感染牙周韧带干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSC)并检测其相关生物学变化。方法采用常规分子生物学方法,构建重组穿梭载体PAdTrackCMV.PDGF—B,用PmeI酶线性化后,线性化质粒在细菌BJ5183内与腺病毒骨架载体质粒AdEasy Ⅰ同源重组,构建重组腺病毒质粒pad-PDGF—B,在HEK293细胞中包装成重组腺病毒Ad—PDGF—B。Western blotting法检测其在HEK293中的表达情况,同时利用包装好的病毒感染PDLSC,用免疫组化的方法鉴定PDGF—B在细胞中的表达;采用甲基噻唑基四唑(MTY)法检测感染病毒后PDLSC的增殖变化,用反转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测感染后细胞分泌Ⅰ型胶原的变化。结果重组缺陷型腺病毒载体经限制性内切酶酶切分析鉴定,与预期结果一致。重组质粒转染HEK293细胞3d后即可观察到绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)明显表达,Western blotting检测证实PDGF—B表达。重组病毒能够感染PDLSC并表达蛋白,MTT结果显示感染Ad—PDGF—B后的PDLSC增殖能力明显加强。在感染后第4天,感染Ad—PDGF-B后的PDLSC组吸光度值为(0.68±0.02),与对照组相比差异有统计学意义(P〈0.01)。同时Ⅰ型胶原表达量增高。结论利用新型腺病毒载体AdEasy系统可快速构建同时表达EGFP和PDGF-B的重组复制缺陷型腺病毒Ad-PDGF—B,此病毒能够感染PDLSC并促进其增殖,同时增强Ⅰ型胶原的表达,为牙周病患者牙周组织再生和种植体周韧带重建的基因治疗奠定基础。 | 尚姝环 张玉峰 施斌 程祥荣 | 2008 | 中华口腔医学杂志2008，43，10： | 7 |
| 3 | 鸟氨酸脱羧酶抗酶蛋白与细胞增殖抑制显示文摘鸟胺酸脱羧酶抗酶(ornithine decarboxylase antizyme,OAZ)基因通过特殊的阅读框移机制翻译全长有功能的抗酶蛋白,结合并降解鸟氨酸脱羧酶,使细胞内多聚胺浓度下降,抑制细胞增殖。抗酶还能结合cyclinD1,阻滞细胞周期。此外,OAZ还能够引起肿瘤细胞逆分化。它在多种肿瘤细胞中呈低表达,对肿瘤细胞的基因治疗有重要意义。 | 姜立 马文丽 | 2008 | 医学分子生物学杂志2008，5，2： | 6 |
| 4 | 鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对大肠癌细胞生长的抑制作用显示文摘目的:研究鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)对大肠癌细胞生长的抑制作用,并初步探讨其参与细胞周期调节的分子机制。方法:将Ad-ODC-AdoMetDCas感染大肠癌细胞株HT-29,通过MTS法观察其对HT-29细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞周期的影响,采用Western blot检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞中ODC、AdoMetDC及细胞周期调节蛋白(Cyclin D1 and CDK4)的表达的影响,利用RT-PCR检测Ad-ODC-AdoMetDCas对细胞周期蛋白Cyclin D1的mRNA水平的影响。结果:Ad-ODC-AdoMetDCas可抑制HT-29细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,并可明显抑制细胞的增殖,引起细胞周期Gl期阻滞,抑制G1期主要的细胞周期蛋白Cyclin D1的转录和翻译。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas可有效下调ODC和AdoMetDC的表达,并通过抑制Cyclin D1的表达使其细胞周期停滞于G1期,从而抑制大肠癌细胞HT-29的增殖,为进一步研究大肠癌的基因治疗打下基础。 | 龚磊 姜春英 张冰 胡海燕 王伟 刘贤锡 | 2007 | 中国现代普通外科进展2007，10，1： | 4 |
| 5 | Adenovirus-mediated expression of SSAT inhibits colorectal cancer cell growth in vitro显示文摘目的:那能表示人的亚精胺/精胺 N'-acetyltransferase ( SSAT )构造 recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌并且在颜色上检测它的禁止的效果在 vitro.Methods 的表面的癌症细胞生长: SSAT 的 516 bp cDNA 被放大并且克隆进 pGL3-hTERT plasmid.The pGL3-hTERT-SSAT recombinant 被消化,并且小碎片被克隆进梭向量 pAdTrack.The pAdTrack-hTERT-SSAT 原生质标志在 AdEasy-1 细胞与 pAdEasy-1 向量被重新结合。积极克隆被选择,进在他们被包装的侵入人体气管粘膜的病菌和扩大的 PacI.The 过程线性化以后,包装细胞(转变人的中肾细胞)的 HEK293 的 transfected 由绿色被监视荧光灯的蛋白质( GFP ) expression.The SSAT 蛋白质层次被西方的弄污决定,并且细胞内部的聚胺内容被反向阶段的高效液相色谱法检测。山(3-( 4,5-dimethylthiaol-2-yl ) -5-(3-carboxy-mefhoxyphenyl)-2-(-4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium,inner 盐)和形成殖民地的试金被用来在 HT-29 的生长上分析基因转导变异效率和效果,可行房间数的 LoVo cells.A 被用来决定细胞生长与或没有外长的 polyamines.Results :在 293 个细胞的 GFP 表示在病毒收拾行李期间并且扩大被萤光显微镜检查观察。西方的弄污结果证明 Ad-hTERT-SSAT 能增加 SSAT 的表示,并且因而,亚精胺和精胺被归结为底层。山和形成殖民地的试金结果证明 HT-29 和 LoVo 细胞生长显著地被禁止,并且禁止的效果能被外长的亚精胺和 spermine.Conclusion 部分颠倒:成功地构造的 recombinant 侵入人体气管粘膜的病菌 Ad-hTERT-SSAT 能加速聚胺分解代谢并且禁止在 vitro.It 的表面的细胞生长也有的颜色在颜色的治疗的治疗学的潜力表面的癌症。 | Hui SUN Bin LIU Ya-pei YANG Chun-xiao XU Yun-fei YAN Wei WAN Xian-xi LIU | 2008 | Acta Pharmacologica Sinica2008，29，5： | 4 |
| 6 | 鸟氨酸脱羧酶和S-甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA腺病毒抑制食管癌细胞的增殖和侵袭显示文摘目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)和S-甲硫氨酸脱羧酶(s-adenosylmethionine decarboxylase,AdoMetDC)的双反义RNA腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:重组腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,应用Western blotting和HPLC分别检测双反义RNA腺病毒对食管癌细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺合成的抑制作用。采用活细胞计数法观察其对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Matrigel侵袭实验检测重组腺病毒载体感染对食管癌Eca109细胞侵袭活性的影响。同时应用裸鼠皮下移植瘤模型观察Ad-ODC-AdoMetDCas对移植食管癌生长增殖的抑制作用。结果:Western bloting证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白的表达,HPLC结果显示食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas 后细胞内腐胺、精胺、精脒等3种多胺含量都明显降低(P<0.01)。活细胞计数法表明Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109 细胞生长增殖有明显抑制作用(P<0.01),Matrigel侵袭实验结果显示Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低食管癌Eca109细胞的体外侵袭能力(P<0.01)。体内实验显示,双反义RNA腺病毒载体对已形成的裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用(P< 0.05或P<0.01)。结论:ODC和AdoMetDC双反义RNA重组腺病毒能显著抑制食管癌细胞的增殖和侵袭,具有食管癌基因治疗临床应用的潜在价值。 | 宋旭 田辉 刘贤锡 张冰 李文军 徐杰 | 2008 | 中国肿瘤生物治疗杂志2008，15，4： | 2 |
| 7 | ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体抑制人食管癌Eca109细胞增殖和侵袭的研究显示文摘背景与目的:食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一,对人民的生命和健康危害极大。有研究发现,在食管癌细胞和肿瘤组织中多胺的含量和生物合成明显增高。本研究中我们探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对人食管癌Eca109细胞多胺合成、细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:采用活细胞计数法和BrdU掺入实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对Eca109细胞增殖的影响;应用Westernblot法和HPLC法分别检测腺病毒对Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达的影响,以及胞内多胺合成的抑制作用,采用Matrigel侵袭实验分析腺病毒载体对Eca109细胞侵袭活性的影响,同时检测Ad-ODC-AdoMetDCas对Eca109细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用。结果:活细胞计数法和BrdU掺入实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对Eca109细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.05)。Westernblot证实Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达。HPLC结果显示,感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,Eca109细胞内三种多胺腐胺、精脒、精胺含量均明显降低(P<0.05)。Matrigel侵袭实验结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低Eca109细胞的体外侵袭能力(P<0.05)。同时发现,与Ad-GFP相比,Ad-ODC-AdoMetDCas对裸鼠皮下移植瘤具有明显的抑制作用。结论:ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体具有显著抑制Eca109细胞增殖和侵袭的作用。 | 宋旭 田辉 刘贤锡 张冰 李文军 徐杰 | 2008 | 癌症2008，27，11： | 1 |
| 8 | 双反义腺病毒载体Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌细胞凋亡及抑制细胞生长影响的研究显示文摘目的:探讨双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞生长的影响。方法:应用MTT法测定不同MOI的腺病毒对肺癌Eca109细胞的基因转染效率,观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,采用流式细胞术检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA(Ad-ODCas)和Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞周期分布的影响,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。结果:MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P<0.05)。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P<0.05)。流式细胞术结果显示感染了Ad-ODC-AdoMetDCas的食管癌Eca109细胞周期阻滞在G1期。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量均明显降低(P<0.05)。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMet-DCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P<0.05)。结论:Ad-ODC-AdoMetDCas能显著抑制食管癌细胞生长,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据。 | 徐杰 田辉 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 | 2008 | 中国肿瘤临床2008，35，23： | 1 |
| 9 | 鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对肺癌增殖和侵袭抑制作用的研究显示文摘目的探讨重组鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)反义RNA对肺癌细胞多胺合成、增殖和侵袭的抑制作用。方法采用活细胞计数法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响,采用Western印迹法和高效液相色谱分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及细胞内多胺含量,采用活细胞计数法和流式细胞仪分别检测腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶反义RNA和Ad-ODC-AdoMetDCas对A-549细胞增殖和细胞周期分布的影响,应用Matrigel侵袭实验分析腺病毒对肺癌细胞侵袭活性的改变。结果当感染效率为50时,腺病毒对A-549细胞的感染率约75%。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制A-549细胞ODC和AdoMetDC的表达。A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内多胺含量明显降低。感染Ad-ODC-AdoMetDCas的A-549细胞停滞在G1期。Ad-ODC-AdoMetDCas可显著降低A-549细胞的体外侵袭能力。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒能够显著抑制肺癌A-549细胞的增殖和侵袭。 | 孙东峰 田辉 刘贤锡 张冰 张岩 孙启峰 | 2008 | 中华外科杂志2008，46，1： | 1 |
| 10 | miR Let-7a1/f1下调前列腺癌1LNCaP细胞中AMD1蛋白的表达显示文摘目的研究let-7a1/f1在前列腺癌LNCaP细胞中对S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AMD1)表达的影响及作用机制。方法以LNCaP细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增let-7a1/f1基因的前体序列,将其克隆到pSilencerTM4.1-CMV neo载体中,构建成let-7a1/f1真核表达载体pSilencer-let7a1/f1。瞬时转染LNCaP细胞后,通过RT-PCR法,检测let-7a1/f1在转录水平的表达,同时通过RT-PCR及Western blot检测AMD1在转录和翻译水平的表达变化。构建AMD1基因3'非翻译区(3'-UTR)荧光素酶报告基因融合质粒(pMIR-AMD1),并与pSilencer-let7a1/f1共转染LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检测,确定let-7a1/f1对AMD1 3'-UTR的作用。结果 pSilencer-let7a1/f1和pMIR-AMD1经酶切电泳及测序鉴定正确,pSilencer-let7a1/f1转染LNCaP细胞后,let-7a1/f1表达明显上升,AMD1在转录水平无变化,在翻译水平明显下降,let-7a1/f1转染后,pMIR-AMD1的荧光素酶活性明显降低。结论 miR Let-7a1/f1可作用于AMD1 3'-UTR靶点,抑制AMD1蛋白的翻译,从而降低LNCap细胞中AMD1蛋白的水平。 | 陈兆波 刘春艳 倪娜娜 于洋 张鹏举 陈蔚文 姜安丽 | 2012 | 山东大学学报(医学版)2012，50，1： | 1 |
| 11 | ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡影响的研究(英文)显示文摘为探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响,采用Westernblot和HPLC的方法分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变.实验结果显示,应用MTT法观察发现Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用.以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达.HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内3种多胺含量都明显降低.TUNEL标记检测结果显示Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡.透射电镜观察到典型的细胞凋亡特征(表现细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等).实验表明,ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)具有显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供实验依据. | 田辉 徐杰 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 | 2009 | 生物化学与生物物理进展2009，36，2： | 1 |
| 12 | 人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的克隆、表达和纯化显示文摘目的构建人精脒/精胺N1乙酰基转移酶基因的原核表达载体,诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化其表达的重组蛋白。方法从大肠癌组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增人SSAT基因的cDNA片段,经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx-4-SSAT。将重组表达质粒转化入E.coliJM109(DE3)中,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白,并通过6His-tag,利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果酶切鉴定和DNA测序显示,人SSAT的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx-4中,而且方向正确,SDS-PAGE电泳显示表达出20 kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示,表达出的蛋白为6His-tag的融合蛋白,而且用Ni-NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论成功构建、表达和纯化了重组SSAT蛋白,为制备其抗体及研究该基因与结直肠肿瘤的关系提供了有力的工具。 | 孙慧 龚磊 刘斌 杨亚培 徐春晓 刘贤锡 | 2008 | 山东大学学报(医学版)2008，46，2： | 0 |
| 13 | 鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌细胞凋亡和抑制侵袭的作用显示文摘目的观察鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义腺病毒对食管癌Eca109细胞凋亡作用及抑制细胞侵袭的影响。方法采用Western印迹检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达;应用噻唑蓝(MTT)比色法测定观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;应用原位末端标记(TUNEL)法和Matrigel侵袭实验分别观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响和侵袭活性的改变。结果Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P〈0.05)。MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P〈0.05)。TUNEL标记检测Matrigel侵袭实验结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P〈0.05),可显著降低食管癌细胞Eca109的体外侵袭能力(P〈0.05)。结论Ad-ODC-AdoMetDCas能显著促进细胞凋亡,抑制食管癌细胞侵袭。 | 徐杰 田辉 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 | 2008 | 中华实验外科杂志2008，25，9： | 0 |
| 14 | 低氧射线双调控的TK表达载体的构建及其对人乳腺癌细胞系的放射增敏作用显示文摘目的利用AdEasy系统构建低氧射线双调控的TK表达载体——腺病毒Ad.HRE.CArG.HSV-TK,并观察其对人乳腺癌细胞系Bcap37和MDA-MB-435的放射增敏作用。方法用分子克隆技术构建插入HRE.CArG.HSV-TK片段的Ad.HRE.CArG.HSV-TK。CsCl梯度离心法纯化病毒,用AdEasy系统GFP标签测定病毒功能滴度。Ad.HRE.CArG.HSV-TK体外转导细胞48h,流式细胞仪测GFP阳性率,Real-time RT-PCR和Western blot检测TKmRNA和蛋白表达。MTT法检测腺病毒(Ad)转导联合放射(RT)对细胞的生长抑制作用和放射增敏比(SER)。结果 Ad.HRE.CArG.HSV-TK滴度为2.1×109TU/mL。50 MOI病毒转导Bcap37和MDA-MB-435细胞48 h,GFP阳性率分别为92%和93%,TK基因表达明显增加(P<0.05)。Ad与RT联用组(Ad+RT)细胞生长抑制率明显高于Ad组和相应同等剂量RT组(P<0.05),SER为1.55。结论应用AdEasy系统可制备同时表达GFP和TK的重组腺病毒。腺病毒对乳腺癌细胞具放射增敏作用,为进一步开展乳腺癌的基因放射治疗奠定基础。 | 魏玲 宋现让 王兴武 孙菊杰 宋宝 郑燕 | 2010 | 基础医学与临床2010，30，8： | 0 |
| 15 | 腺病毒介导的鸟氨酸脱羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶双反义RNA抑制肺癌A-549细胞的实验研究显示文摘目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)和S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(AdoMetDC)双反义重组腺病毒(Ad-ODC-AdoMetDCas)介导的ODC和AdoMetDC反义RNA对肺癌A-549细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法:采用FACS检测Ad-GFP感染细胞中GFP表达,以测定不同MOI的腺病毒对肺癌A-549细胞的基因转染效率;应用MTT法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC的方法分别检测腺病毒对肺癌A-549细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,并应用TUNEL标记检测法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌细胞凋亡的影响。结果:基因转染效率结果显示,以50 MOI的Ad-GFP感染肺癌细胞48 h后,大约有75%肺癌A-549细胞GFP表达阳性;Ad-ODC-AdoMetDCas对肺癌A-549细胞生长增殖有明显抑制作用。Ad-ODC-AdoMetDCas可明显抑制肺癌细胞中ODC和AdoMetDC基因表达,基因抑制率大于60%(P<0.05)。HPLC结果显示,肺癌A-549细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量都明显降低(P<0.05)。TUNEL标记检测结果证实,Ad-ODC-AdoMetDCas可引起肺癌A-549细胞明显凋亡。结论:ODC和AdoMetDC双反义腺病毒具有显著抑制肺癌增殖和侵袭的作用,对于肺癌的防治研究具有一定的意义,有望成为治疗肺癌的基因药物。 | 孙启峰 田辉 刘贤锡 张冰 张岩 孙东峰 | 2007 | 山东大学学报(医学版)2007，45，8： | 0 |
| 16 | endostatin基因重组腺病毒的构建及在人肺腺癌细胞的表达显示文摘目的利用AdEasy系统构建鼠内皮抑素(ES)基因重组腺病毒Ad.ES,并观察其在人肺腺癌细胞SPCA-1的表达。方法采用酶切、连接和转化等方法,将质粒pcDNA3.ES中的ES片段插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV,构建重组腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack.CMV.ES,经PmeⅠ酶切线性化后与含腺病毒基因骨架的质粒载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内进行同源重组得到腺病毒质粒pAd.ES,重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切后,转染人胚肾293细胞包装成腺病毒颗粒Ad.ES,将病毒上清反复感染293细胞获得高滴度病毒,应用氯化铯(CsCl)梯度离心的方法纯化病毒,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白(GFP)标签测定重组腺病毒的功能滴度。用2MOI重组腺病毒Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h,流式细胞仪检测GFP表达阳性率,ELISA法测定细胞培养上清液中ES的含量。结果双酶切证实重组腺病毒穿梭载体pAdTrack.CMV.ES质粒构建正确,卡那霉素抗性筛选和PacI酶切鉴定证实腺病毒重组质粒构建成功。PacI酶切线性化的重组质粒导入293细胞3d,约20%的细胞表达GFP,回收病毒重复感染293细胞,CsCl梯度离心纯化最终获得约5.6×1010TU/mL滴度的重组病毒。Ad.ES体外转导SPCA-1细胞48h后,细胞GFP阳性率为93%,细胞培养上清液中ES的含量较Ad.GFP感染组和阴性对照组明显增加(P<0.05)。结论应用新型腺病毒载体AdEasy系统可在短期内制备同时表达GFP和ES的重组腺病毒,Ad.ES体外感染人肺腺癌细胞SPCA-1可显著提高ES表达,为进一步研究抗血管生成治疗肺癌奠定了基础。 | 魏玲 宋现让 王兴武 宋宝 郑燕 | 2008 | 中国现代医学杂志2008，18，6： | 0 |
| 17 | ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体对食管癌细胞凋亡的影响显示文摘目的探讨ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体(Ad-ODC-AdoMetDCas)对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响。方法应用MTT法实验观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖的影响;采用Western印迹和HPLC分别检测腺病毒载体对食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC蛋白表达以及胞内多胺含量的抑制作用,同时应用原位末端标记(TUNEL)法观察Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞凋亡作用的影响,应用透射电镜进一步观察细胞超微结构的改变。结果应用MTT法实验表明,Ad-ODC-AdoMetDCas对食管癌Eca109细胞生长增殖有显著抑制作用(P<0.05)。以Ad-ODC-AdoMetDCas感染食管癌Eca109细胞,可明显抑制食管癌Eca109细胞中ODC和AdoMetDC基因表达(P<0.05)。HPLC结果显示,食管癌Eca109细胞感染Ad-ODC-AdoMetDCas后,细胞内三种多胺含量均明显降低(P<0.05)。TUNEL标记检测结果显示,Ad-ODC-AdoMetDCas可明显引起食管癌Eca109细胞凋亡(P<0.05),透射电镜下可见典型的细胞凋亡特征,表现为细胞体积缩小,核皱缩、碎裂,染色质呈块状边集等。结论ODC和AdoMetDC双反义腺病毒载体能显著抑制食管癌细胞生长增殖,降低细胞多胺合成,促进细胞凋亡,为探讨食管癌基因治疗的可行性提供了实验依据。 | 徐杰 田辉 刘贤锡 张冰 李文军 宋旭 | 2008 | 山东大学学报(医学版)2008，46，10： | 0 |
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