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| 1 | 嵌合人偏肺病毒表位的重组流感病毒毒株的构建显示文摘目的构建和拯救重组嵌合表达人偏肺病毒(human metapneumovirus,hMPV)表位的流感病毒株。方法将通过生物信息学软件预测的hMPVB细胞表位、CTL表位和Th表位串联为不同表位组合,将其表位蛋白基因分别插入A/PR/8/34(PR8)流感病毒非结构蛋白NS1基因,利用8质粒系统共转染293T/MDCK细胞,拯救重组流感病毒毒株,全基因组测序鉴定重组流感病毒。同时测定重组病毒的血凝素(HA)活性和半数细胞感染量(TCID50)及生长曲线。结果在hMPV不同表位间引入间隔序列GPGPG和KK,构建串联多表位抗原,将该抗原基因插入PR8流感病毒非结构蛋白NS基因,经反向遗传学成功拯救出3株重组流感病毒毒株。经MDCK细胞传代3次,鸡胚传代1次,3株重组流感病毒毒株增殖稳定。流感病毒全基因组测序证实,重组的3株流感病毒毒株分别嵌入了hMPV的B细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位,命名为rFLU/hMPV/B、rFLU/hMPV/CTL-Th、rFLU/hMPV/B-Th。HA滴度分别为128、128、256,TCID50分别为10^7.0/ml、10^6.8/ml和10^7.0/ml。生长曲线试验结果表明重组流感病毒毒株可在MDCK细胞中有效复制。结论成功拯救出3株嵌合有hMPVB细胞表位、CTL表位/Th细胞表位和B细胞表位/Th细胞表位的重组流感病毒株,为后续评价该重组病毒株的免疫效果及是否有潜在疫苗应用价值提供实验资料。 | 李晓燕 Lin Yipu 孔梅 郭丽茹 邹明 苏旭 | 2019 | 中华微生物学和免疫学杂志2019，39，1： | 2 |
| 2 | 禽流感病毒H5N1基因突变对神经氨酸酶抑制剂敏感性和神经氨酸酶活性的影响显示文摘目的 研究感染人的禽流感病毒H5N1神经氨酸酶突变I117V,I314V,I117V+I314V对神经氨酸酶抑制剂(NAIs)敏感性和神经氨酸酶(NA)活性的影响.方法 定点突变技术将变异位点引入禽流感病毒株A/Vietnam/1203/04(H5N1)(VN1203)的NA基因中,以A/WSN/33(H1N1)为背景,通过反向遗传学方法构建重组流感病毒,鸡胚传代增殖病毒,荧光定量评估病毒对NAIs的敏感性和NA活性(IC50值和Km,Ki值).结果 与野生株VN1203相比,I117V使NA对奥司他韦敏感性降低(IC50值升高了17倍,Ki值升高了20倍),对扎那米韦敏感性无明显影响(IC50值升高了2倍,Ki值升高了3倍),NA活性降低(Km值升高了23倍).I314V对NAIs敏感性和NA活性均无明显影响.结论 初步结果认为NA突变I117V和I314V对感染人的禽流感病毒H5N1并不产生NAIs耐药,临床上仍然可以用奥司他韦或扎那米韦抗病毒治疗. | 谌资 郑煜煌 Yipu Lin Patrick J Collins Alan J Hay | 2010 | 中华医学杂志2010，90，27： | 1 |
| 3 | 禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的重组牛痘病毒表达显示文摘目的研究H5 I151F和H5 I151F+A134V+E186D两种氨基酸变异对血凝素蛋白(HA)亲人受体结合的影响,并获得该HA。方法构建载体pRB21’,共感染/转染vp37^-牛痘病毒vRB12和pRB21’,基因同源重组牛痘病毒表达HA,Western免疫印迹法鉴定。结果获得了克隆有H5HA全长基因片段的载体pRB21’,构建了2种重组牛痘病毒re-VV H5 I151F和re-VV H5 I151F+A134V+E186D,且能在被感染细胞膜表达这两种HA。结论首次通过构建重组牛痘病毒成功表达了禽流感病毒H5N1的H5HA,为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性奠定了基础。 | 谌资 郑煜煌 Yipu Lin | 2009 | 中国感染控制杂志2009，8，3： | 1 |
| 4 | 禽流感病毒H5N1血凝素蛋白的细胞膜上提纯和结晶显示文摘目的从细胞膜上提纯禽流感病毒H5N1的血凝素蛋白H51151F和H51151F+A134V+E186D,并使蛋白结晶。方法细胞内大量增殖重组牛痘病毒,去垢剂提取细胞膜中的HA蛋白,连续蔗糖密度梯度超速离心,Western印迹检测,菠萝蛋白酶等裂解HA,离子交换层析,SDS—PAGE电泳并染色检测蛋白纯度,坐滴气象扩散法结晶。结果从细胞膜中提取了高纯度的血凝素蛋白H51151F和H51151F+A134V+E186D,并得到了H51151F蛋白晶体。结论首次获得了禽流感病毒H5N1的I-IS1151F蛋白晶体,为进一步研究禽流感病毒人传人的可能性打下基础。 | 谌资 郑煜煌 Yipu Lin David J Stevens Steve A Wharton Patrick J Collins Junfeng Liu Alan J Hay | 2009 | 中国医师杂志2009，11，5： | 0 |
| 5 | H3N2流感病毒体外细胞传代引起的变异显示文摘目的了解用不同来源MDCK细胞分离H3N2流感病毒时,HA和NA片段氨基酸变异情况。方法选取H3N2流感病毒核酸阳性的咽拭子标本13份,分别在三种不同来源的MDCK细胞中传5代。对标本中病毒及细胞传代的病毒进行HA和NA基因序列测定,分析病毒传代后HA和NA片段变异情况。结果与咽拭子中的病毒序列相比,MDCK5代病毒和MDCK-parent5代病毒均发生了HA和/或NA的突变。9株MDCK5代病毒HA发生了P221L/P/H突变;8株病毒发生了NA片段的148位或151位的突变。2株MDCK-parent5代病毒HA221位为多态性。13株病毒MDCK-parent传代后均发生了NA多态性,大多发生在151位。在MDCK-SIAT传5代后的病毒HA均无突变,3株有NA突变。结论在对流感病毒进行抗原性分析前对病毒进行细胞传代会发生病毒的适应性突变。H3N2流感病毒在MDCK、MDCK-parent中传代后,会引起HA和/或NA突变;MDCK-SIAT传代,病毒变异明显减少。 | 李晓燕 Yipu Lin 孔梅 邹明 郭丽茹 苏旭 | 2017 | 国际病毒学杂志2017，24，1： | 0 |
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