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| 1 | 猪肺炎支原体P97 TaqMan-BHQ荧光定量PCR检测方法的建立及应用显示文摘根据猪肺炎支原体(Mhp)P97基因的保守序列设计合成了引物和TaqMan-BHQ探针,建立了快速检测Mhp的TaqMan-BHQ荧光定量PCR方法。结果显示,该方法特异性良好,与其他病原不发生交叉反应;最低检测限可达10copies/μL,敏感性高;不同梯度定量模板的拷贝数的对数值与Ct值之间的线性关系表达式为Ct=-3.426×lg(conc)+43.343,有良好的线性关系,标准曲线的相关系数为0.997,扩增效率为95.85%,重复性良好。对江苏省某猪场的48份猪肺组织进行荧光定量PCR检测,结果有43份肺组织呈现阳性,阳性检出率为89.58%,比巢式PCR的敏感性高。表明,该检测方法能用于Mhp的快速检测,可对猪支原体肺炎的早期诊断和流行病学调查提供新的技术手段。 | 武昱孜 靳蒙蒙 白方方 张旭 华利忠 雷治海 邵国青 | 2012 | 中国兽医科学2012，42，12： | 20 |
| 2 | 支原体对细胞培养污染的研究概况显示文摘支原体是自然界中存在的最小、最简单的原核生物,大小介于细菌和病毒之间,可通过滤菌器,对许多抗生素有抗性,是细胞培养污染中一种常见的微生物。被支原体污染后的细胞培养物,引起细胞形态学和功能的改变,导致用细胞基质制备的生物制品报废,且很难清除。一旦发生污染,就意味着试验的失败,造成巨大的人力、物力、财力的浪费。从支原体对细胞培养物污染后造成的危害及对支原体污染的预防、检测、清除等的研究进展进行论述,为细胞支原体污染的防控提供依据和手段。 | 武昱孜 张旭 华利忠 刘茂军 邵国青 | 2013 | 动物医学进展2013，34，9： | 19 |
| 3 | 猪肺炎支原体致病机理研究进展显示文摘猪肺炎支原体是猪支原体肺炎的主要病原。近年来对该病原研究较多,但主要都集中在基因和膜蛋白方面。论文从猪肺炎支原体基因结构、黏附蛋白、蛋白组学和猪肺炎支原体的细胞炎性因子反应等方面对猪肺炎支原体的致病机理进行综述,为相关研究提供参考。 | 李彦伟 刘茂军 武昱孜 张旭 李桂兰 张映 邵国青 | 2013 | 动物医学进展2013，34，8： | 17 |
| 4 | PCR技术检测猪肺炎支原体的研究进展显示文摘猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)是引起猪支原体肺炎的重要病原,该病常引起继发感染和混合感染,严重威胁养猪业发展,造成巨大的经济损失。利用PCR技术对猪支原体肺炎早期正确诊断具有非常重要的意义。从猪肺炎支原体的特异性靶基因、临床样品采集方法与样品DNA处理方法、关键技术因素及普通PCR技术、多重PCR技术、套式PCR技术、荧光定量PCR技术、芯片检测和环介导等温扩增技术等在猪肺炎支原体检测中的研究进展、主要优缺点及应用进行综述。 | 张旭 白方方 武昱孜 刘茂军 冯志新 熊祺琰 张映 邵国青 | 2012 | 生物技术通报2012，28，5： | 16 |
| 5 | 猪肺炎支原体和猪鼻支原体双重荧光定量PCR检测方法的建立显示文摘建立同时检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体的双重荧光定量PCR方法。根据猪肺炎支原体P97序列和猪鼻支原体P37序列的特异性引物,分别标记FAM和Texas Red荧光报告基团的2条TaqMan探针,建立和优化双重实时荧光定量PCR反应条件和体系,同时检测其敏感性、特异性和重复性。建立的双重荧光定量PCR对猪肺炎支原体和猪鼻支原体的最低检测值均为10copies·μL-1;与猪源致病菌、病毒和其他常见细菌均无交叉反应;各浓度标准品的Ct值变异系数小于5%,重复性好。检测72份临床样本,其中猪肺炎支原体的肺阳性率为80%,鼻拭子阳性率22%,支气管肺泡灌洗液阳性率58.33%;猪鼻支原体的肺阳性率为40%,鼻拭子阳性率66%,支气管肺泡灌洗液阳性率41.67%。建立的双重荧光定量PCR方法比普通PCR更加敏感,实用性强,可用于临床样品的检测。该方法能同时快速和定量地检测猪肺炎支原体和猪鼻支原体,在短时间内获得样品的多个信息,快速地解决了多次检测所需的时间以及经济消耗,为猪肺炎支原体和猪鼻支原体的监测和防控提供了新型、可靠的检测技术。 | 武昱孜 熊祺琰 刘蓓蓓 张珍珍 王佳 华利忠 韦艳娜 邵国青 | 2017 | 畜牧兽医学报2017，48，8： | 16 |
| 6 | 巢式PCR检测猪鼻支原体方法的建立及应用显示文摘应用巢式聚合酶链式反应(Nested PCR)建立了一种检测猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)的方法,试验中以酚-氯仿法制备模板DNA,根据猪鼻支原体P37序列高度保守区设计2对引物,建立Nested PCR诊断方法。在特异性检测试验中,设计的引物不能扩增出猪絮状支原体、猪滑液支原体、猪肺炎支原体、鸡毒支原体、胸膜肺炎放线杆菌、猪瘟病毒、猪流感病毒、猪圆环病毒及猪繁殖与呼吸综合征病毒等病原体;敏感性试验表明,第1次PCR和第2次PCR的敏感度分别为3.01mg/L和3.01×10-4 mg/L。对41份临床样品肺组织的检测中,普通PCR和巢式PCR的检出率分别为29.3%(12/41)和82.9%(34/41)。结果表明,巢式PCR方法明显优于常规PCR方法,具有较高的敏感性和实用性,为猪鼻支原体的检测提供了一种新型、可靠的诊断技术。 | 白方方 武昱孜 靳蒙蒙 刘茂军 冯志新 熊祺琰 邵国青 | 2013 | 中国兽医学报2013，33，7： | 9 |
| 7 | 不同猪支原体肺炎活疫苗菌株P46和P97基因序列差异性分析显示文摘对我国用于生产的3种猪支原体肺炎活疫苗菌株(168株、RM48株、Z株)进行P46和P97R1R2基因序列分析,考察其保守性和差异。提取来源于四家猪支原体肺炎活疫苗生产企业的疫苗株基因组DNA,以其为模板进行PCR扩增、测序;利用DNAStar序列分析软件对测序结果和国际标准株J株、232株、7448株、7422株一起进行比对,分析3种疫苗菌株和4个标准株之间核苷酸及氨基酸差异。结果发现,疫苗株Z株、RM48株、168株的P46基因序列相似性为100%,与J株、232株相似性为99.1%,与7422株、7448株相似性为98.9%。疫苗株RM48株和Z株的P97R1R2基因序列相似性为100%;而与疫苗株168株相似性为97.5%;三个疫苗株与J株、232株、7448株、7422株的P97R1R2基因相似性仅为90.1%~93.6%,差异主要发生在R1区重复序列的次数上。本研究为临床猪支原体肺炎活疫苗菌株的检测及不同菌株之间的差异鉴定研究奠定了基础。 | 武昱孜 邢宪平 韦艳娜 熊祺琰 冯志新 邵国青 | 2017 | 畜牧兽医学报2017，48，12： | 8 |
| 8 | 猪肺炎支原体气溶胶富集检测技术的初步研究显示文摘为了建立一个简单易行的猪肺炎支原体气溶胶富集和检测技术,结合液体冲击式采样器和过滤式采样器的原理,自行设计一个气溶胶双重富集装置,并在密闭环境下采集人工制备的猪肺炎支原体气溶胶,荧光定量PCR检测以确定该装置的采集效率。再通过收集不同猪群中的气溶胶进行检测以确定该装置临床应用的可行性。首先,收集人工感染Mhp阴性仔猪后不同时间猪舍内的气溶胶;其次,收集1个猪支原体肺炎发病猪场和1个阳性未发病猪场的产房、保育舍和育肥舍共11个猪舍的气溶胶,荧光定量PCR或套式PCR检测所收集的气溶胶。结果显示:实验室模拟采样的采集效率达到(37.04±6.43)%,人工感染猪肺炎支原体后7天即在饲养房间的气溶胶中检到猪肺炎支原体;2个猪场共11个不同猪舍气溶胶中猪肺炎支原体检测结果均为阳性,检出率100%。成功建立了一个简单易行的猪场猪肺炎支原体气溶胶富集及检测技术。 | 华利忠 武昱孜 白方方 冯志新 刘茂军 靳蒙蒙 郑烨 邵国青 | 2013 | 中国农学通报2013，29，5： | 8 |
| 9 | 集成联合用药、隔离早期断奶(SEW)和“三点式”生产体系培育猪气喘病阴性群显示文摘为探索猪肺炎支原体阴性群的培育方法,本试验研究了集成联合用药、SEW和'三点式'饲养管理体系等技术对猪肺炎支原体的净化效果。先通过妊娠母猪的筛选,母猪程序性用药,SEW技术,屏障隔离系统,'三点式'生产饲养管理体系及仔猪程序性用药的培育方法,再通过猪肺炎支原体血清抗体检测和荧光定量PCR检测鼻拭子的方法对所培育的仔猪进行长达4个月的监测,结果发现新培育的5批猪在35日龄后血清抗体均为阴性,鼻拭子抗原检测全为阴性。结果表明集成联合用药、SEW和'三点式'生产管理体系技术可以有效净化猪肺炎支原体,为国内猪气喘病的控制和净化提供理论基础及临床实践经验。 | 甘源 华利忠 熊祺琰 马庆红 徐飞扬 刘茂军 杜改梅 武昱孜 韦艳娜 冯志新 王海燕 白方方 邵国青 | 2014 | 江苏农业科学2014，42，7： | 7 |
| 10 | 猪鼻支原体TaqMan MGB探针荧光定量PCR方法的建立显示文摘为建立快速检测猪鼻支原体(M.hyorhinis)的荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank中登录的p37基因序列设计并合成引物及MGB探针,构建含有p37基因的重组质粒,以其为标准品绘制标准曲线,并检测该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示该方法具有良好的特异性,与猪肺炎支原体、猪絮状支原体、猪滑液支原体、鸡毒支原体、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪圆环病毒、猪瘟病毒及猪流感病毒无交叉反应,对M.hyorhinis的检测敏感性为10拷贝/μL,并且稳定性好,变异系数小于2%。利用建立的荧光定量PCR方法对55份临床样品进行检测,阳性检出率为87.3%(48/55),而分离培养方法和普通PCR的阳性检出率分别为41.8%(23/55)和29.1%(16/55)。该结果表明,建立的方法特异性强、敏感性高、稳定性好,可以用于M.hyorhinis临床样品的检测,对M.hyorhinis的快速和定量检测具有重要意义。 | 白方方 武昱孜 刘茂军 冯志新 熊祺琰 韦艳娜 马庆红 邵国青 | 2013 | 中国预防兽医学报2013，35，10： | 5 |
| 11 | 猪肺炎支原体抗原定量ELISA检测方法的建立显示文摘为建立猪肺炎支原体抗原的快速检测方法,本研究以抗猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体为包被抗体,抗P46蛋白多克隆抗体为检测抗体,建立了猪肺炎支原体双抗体夹心ELISA方法。通过优化后的反应条件为:抗猪肺炎支原体P46蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5μg/mL,抗P46蛋白多抗及酶标二抗稀释度分别为1∶40 000和1∶10 000。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检出量为9.754 ng/mL,与猪鼻支原体、猪滑液支原体、絮状支原体等无交叉反应。使用该ELISA方法对人工稀释的培养物中抗原含量进行检测,通过单点法和对样品倍比稀释后进行双平行线拟合两种方法计算,得出两种计算方法结果均与真实值基本相符,但双平行线法检测比单点法检测更加稳定。本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为猪肺炎支原体的定量检测提供了有效手段,可用于猪支原体肺炎灭活疫苗生产过程中抗原的检测,为灭活疫苗生产中的质量控制提供了便利。 | 田瑞雨 熊祺琰 刘茂军 韦艳娜 武昱孜 冯志新 姜平 邵国青 | 2017 | 中国兽医科学2017，47，4： | 5 |
| 12 | 猪支原体肺炎活疫苗(168株)气溶胶免疫后呼吸道sIgA分泌及抗原存留规律显示文摘猪支原体肺炎是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae ,Mhp)引起的猪的一种慢性呼吸道疾病,严重影响养猪业发展,活疫苗气溶胶免疫是防治该病的新措施。为研究猪肺炎支原体活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,疫苗株在免疫猪肺内的占位存留规律,选用3周龄不吃初乳猪27头,随机分为3组,G1气溶胶免疫组12头,G2肺内免疫组12头,同时设立阴性对照3头。分别于免疫后第2 h、7 d、14 d及28 d进行鼻拭子Mhp sIgA检测以及血清抗体检测。另外在上述时间点分别宰杀G1和G2组各3头,对照组在实验组免疫后第28 d宰杀,采集肺泡灌洗液,分别进行Mhp sIgA检测及Mhp疫苗株含量检测。结果显示:(1)所有试验猪至实验结束,Mhp血清抗体未出现转阳现象;(2)鼻拭子sIgA水平G1组在免疫后第14 d与对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05);G2组在免疫后第7 d和14 d与相应的对照组相比上升,差异具有显著统计学意义(p <0.05),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(3)G1组肺泡灌洗液中的 sIgA在免疫后14 d部分转阳(阳性率33.33%),28 d全部转阳(阳性率100%);G2组在免疫14 d时已全部转阳(阳性率100%),各时间点G1组与G2组sIgA水平差异不具备统计学意义(p >0.05);(4)气溶胶免疫组肺泡灌洗液内Mhp疫苗株浓度在免疫后第2 h、7 d、14 d和28 d分别是相应肺内免疫组的0.37倍、1.01倍、0.88倍以及0.52倍。猪支原体肺炎活疫苗(168株)经气溶胶免疫后,和肺内免疫一样可以诱导免疫猪的局部黏膜免疫以及具有同等的占位效应,且经气溶胶免疫的疫苗株在免疫仔猪体内的增殖水平可能与其诱导的黏膜免疫水平相关。 | 华利忠 白昀 武昱孜 王佳 杨浩 吴猛 袁厅 邵国青 冯志新 | 2019 | 中国动物传染病学报2019，27，4： | 4 |
| 13 | 猪肺炎支原体对上皮细胞氧化损伤的分析显示文摘分析猪肺炎支原体致病株168和弱毒株168L对上皮细胞的氧化损伤。用猪肺炎支原体168和168L株体外感染猪肺泡上皮细胞(SJPL),通过对感染细胞进行MTT和NO检测,筛选感染时间和感染剂量,利用间接免疫荧光(IFA)检测细胞上Mhp,通过H2O2和DAPI验证细胞损伤。结果:在5×106 CCU感染36h时,细胞活力相同,Mhp168株感染细胞的NO浓度显著高于Mhp168L株(P<0.05);H2O2检测显示Mhp168对细胞的氧化损伤显著高于Mhp168L株,同时都显著高于对照(P<0.01);IFA观察分析显示Mhp168株在细胞上的黏附量高于Mhp168L。DAPI染色显示Mhp168对细胞造成的损伤程度高于Mhp168L。通过优化感染时间和感染剂量,找到了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞损伤的显著差异点,分析了猪肺炎支原体强弱毒株对上皮细胞的氧化损伤,为深入研究猪肺炎支原体强弱毒株感染细胞的差异机制奠定了基础。 | 李彦伟 刘茂军 刘蓓蓓 武昱孜 倪博 白方方 纪燕 张映 邵国青 | 2014 | 畜牧兽医学报2014，45，7： | 4 |
| 14 | 猪鼻支原体3种核酸检测方法的临床应用比较显示文摘为研究猪鼻支原体(Mhr)核酸检测方法的优越性及在临床应用中的价值,本实验比较了常规PCR、套式PCR和荧光定量PCR 3种方法的敏感性,并进行了临床样品的检测。常规PCR敏感性为104拷贝/μL,套式PCR和荧光定量PCR敏感性均为10拷贝/μL;对74份肺组织、36份气溶胶、99份鼻拭子和47份气管支气管灌洗液样品进行检测,常规PCR、套式PCR、荧光定量PCR检出率分别为18.0%(46/256)、53.9%(138/256)和55.1%(141/256)。常规PCR与套式PCR、荧光定量PCR方法的检出率差异极显著(p<0.01),而套式PCR与荧光定量PCR方法的检出率差异无显著性(p>0.05)。结果表明,套式PCR敏感性高,具有较高的临床实用价值;荧光定量PCR敏感性高,最具有实验室诊断价值,但对操作者要求较高;常规PCR方法敏感性稍低,可能造成漏检,但易于操作,对条件简单的基层实验室仍有一定的实用性。在检测临床样品时,推荐采用套式PCR结合荧光定量PCR,结果更为准确可靠,可以提高Mhr的检出率。 | 武昱孜 张旭 白方方 刘茂军 华利忠 杜改梅 邵国青 | 2013 | 中国预防兽医学报2013，35，12： | 4 |
| 15 | 猪肺炎支原体黏附猪肾细胞模型建立及体外黏附特性研究显示文摘为了建立猪肺炎支原体全菌体外黏附细胞模型及初步探讨其对不同细胞系的黏附特性,选取实验室保存的Mhp野毒分离株(XLW-1、XLW-2、XLW-3、WX株)、国际标准株232、弱毒疫苗168株感染猪肾传代细胞系(PK15),同时利用本实验室已建立的Mhp间接免疫荧光检测方法检测各菌株对PK15的黏附特性。结果发现,不同Mhp株全菌均可黏附PK15细胞,但不同菌株黏附能力存在差异。其黏附能力强弱依次为野毒株XLW-1株、WX株、疫苗168株、国际标准株232、野毒株XLW-2、XLW-3株。选取黏附能力较强的XLW-1株,继续探讨其对猪原代气管上皮细胞、猪肺泡上皮细胞(SJPL)、猪肺泡巨噬细胞(3D4/31)、恒河猴肾细胞(Marc145)的黏附性。XLW-1株能在体外黏附不同的细胞系,但对不同细胞的黏附能力存在差异,其中对猪源的原代分离的猪气管上皮细胞、SJPL细胞系、3D4/31细胞系黏附性均较强,而对非猪源的Marc145细胞系的黏附性较弱。本研究结果表明,Mhp全菌体可在多种细胞系上建立黏附感染模型,不同Mhp菌株的黏附能力存在着差异,且同一菌株对不同细胞系的黏附特性也存在差异。 | 张旭 冯志新 武昱孜 车巧林 刘茂军 熊祺琰 华利忠 李彬 邵国青 | 2013 | 畜牧兽医学报2013，44，5： | 3 |
| 16 | RNA干扰文库研究进展及其应用显示文摘RNA干扰是一种在进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,存在于许多不同种属的生物体中,在生物体细胞之间进行传递,具有抵抗病毒入侵和维持基因组稳定的作用。RNA干扰文库是以RNA干扰技术为基础建立的一种简单、高效、大规模、高通量的功能基因组学研究的工具,应用于大规模基因功能的筛选,在基因功能研究、发现新的药物靶基因和疾病相关基因等方面具有广阔的应用前景。 | 武昱孜 张旭 张映 | 2009 | 畜牧与饲料科学2009，30，10： | 2 |
| 17 | 猪鼻支原体血清抗体间接ELISA检测方法的建立显示文摘猪鼻支原体是猪体内的一种常在菌,可引发猪的多发性浆膜炎、肺炎、关节炎、心包炎等炎症。由于猪鼻支原体与猪其他支原体有较高的交叉反应,目前并没有特异性的血清学诊断方法的报道。本试验以建立猪鼻支原体特异性ELISA检测方法为目的,将猪鼻支原体的表面可变脂蛋白Vlp的特定肽段作为包被抗原,优化该方法检测条件,最终确定:其抗原的最佳包被浓度为0.312 5μg·mL^(-1);一抗的最佳稀释度为1∶100,作用时间为30min;二抗的最佳稀释浓度为1∶20 000,最佳作用时间为30min;显色时间为10min;阴阳性的判定值为0.27。交叉性试验结果显示,Vlp抗原与猪其他支原体阳性血清及猪常见传染病阳性血清均无交叉反应。在重现性试验中,批内及批间的变异系数均低于10%,证明重现性良好。利用所建立的方法对已知阴性及阳性样本进行检测,结果显示特异性和灵敏度均良好。最后,用建立的方法对人工感染后28d的猪血清和247份临床样品进行检测,感染猪血清抗体呈阳性,建立的Vlp-ELISA方法、吐温20膜蛋白-ELISA方法对不同猪群临床样品检测的阳性率趋势相同。综上所述,建立的Vlp-ELISA方法特异性、稳定性良好,可以广泛用于临床猪鼻支原体血清抗体检测,为该病的检测和防控提供了重要工具。 | 王佳 熊祺琰 华利忠 刘蓓蓓 甘源 冯志新 刘茂军 武昱孜 邵国青 | 2017 | 畜牧兽医学报2017，48，10： | 2 |
| 18 | 兔出血症病毒检测方法研究进展显示文摘兔出血症发病率和致死率都很高,感染兔通常48-72 h后死亡,有肝坏死和肺出血为典型特征的组织病变,给养兔业带来了巨大的经济损失。近年来,随着对其研究的不断深入,在兔出血症病毒检测与诊断方面取得了很大的进展。文章系统阐述了兔出血症病毒检测的研究进展,提出了存在的问题和展望,为更有效地防治此病提供了方便。 | 武昱孜 贾广乐 张映 张旭 | 2010 | 中国畜牧兽医2010，37，10： | 2 |
| 19 | 3种制备猪肺炎支原体DNA模板方法的探讨显示文摘为了筛选出一种快速、高效、廉价提取猪肺炎支原体模板DNA的方法,本研究分别对试剂盒法、双蒸水煮法、酚-氯仿法进行比较,从中选出最佳提取方法。结果显示:这3种方法均适合由菌液中提取基因组DNA;水煮法不能由组织中提取出基因组DNA,试剂盒法可由组织中提取出基因组DNA且得到的目的DNA较纯,但每次提取量少;酚-氯仿法能大批量提取组织基因组DNA,但操作繁琐、易污染且稍有杂带。针对不同的模板,选择合适的DNA制备方法,有利于做出准确检测、提高检测效率,为疾病的早期诊断提供保障。 | 张旭 武昱孜 白方方 刘茂军 华利忠 邵国青 | 2013 | 中国农学通报2013，29，29： | 2 |
| 20 | ELISA检测方法中最佳封闭液和样品稀释液的筛选研究(英文)显示文摘[目的]为提高酶联免疫吸附法(ELISA)的敏感性和特异性,研究分析了不同类别和不同浓度的封闭液和样品稀释液对ELISA检测结果的影响。[方法]研究采用酪蛋白(Casein)、明胶(Gelatin)、BSA、山羊血清(GS)、马血清(HS)和兔血清(RS)等不同类封闭液和同一类不同浓度封闭液进行ELISA检测试验。[结果]2%BSA较1%BSA和3%BSA封闭效果好,2%Casein和1%Casein较3%Casein封闭效果好,8%RS和10%RS封闭效果强于6%RS和7%RS;与BSA和Casein相比,RS具有更好的封闭效果,且8%RS封闭液和8%RS样品稀释液组合最佳。[结论]良好的封闭液和样品稀释液组合可有效降低非特异性反应,提高ELISA检测方法的敏感性和特异性,这为良好ELISA检测方法的建立提供了重要实践指导作用。 | 杜改梅 刘茂军 甘源 韦艳娜 武昱孜 邵国青 | 2013 | Agricultural Science & Technology2013，14，6： | 2 |
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