结核分枝杆菌H37Ra FadD3基因克隆与表达研究

查看全文 作　　者：[1]袁方;[2]陈元晓;Stephanie [3]Dawes;Edward [3]N.Baker

机构地区：[1]昆明医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,云南昆明650500;[2]昆明医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学系,云南昆明650500;[3]MauriceWilkinsCentreforMolecularBiodiscoveryandSchoolofBiologicalSciences,UniversityofAuckland

出　　处：《云南大学学报(自然科学版)》索引2014年第36卷第4期,共6页

基　　金：国家自然科学基金(31160425);新西兰健康研究基金(grant 06/441)~~ 摘　　要：为探索FadD3在结核分枝杆菌胆固醇分解代谢中的作用,从结核分枝杆菌H37Ra的全基因组中克隆了FadD3基因,并在大肠杆菌BL21中表达.根据NCBI公布的结核分枝杆菌全基因组序列设计一对引物,PCR扩增FadD3基因.PCR扩增产物与克隆载体pGEM3Zf(+)进行拼接,得到重组基因FadD3-pGEM3Zf(+),再转化到大肠杆菌DH5ɑ得到克隆.PCR检测阳性克隆,再与表达载体pYUB28b拼接,得到重组质粒FadD3-pYUB28b.阳性重组质粒亚克隆到大肠杆菌BL21宿主菌进行自体诱导表达.经过表型筛选及鉴定分析,已成功构建了重组表达质粒FadD3-pYUB28b.SDS-PAGE和Western blotting证实,重组基因FadD3-pYUB28b在大肠杆菌BL21中有表达产物.实验结果表明,以pYUB28b为表达载体,FadD3重组基因在大肠杆菌表达体系于温度分别为18,28℃有包涵体形式的表达蛋白,在37℃无表达产物. 关键词：结核分枝杆菌 H37RA FadD3 基因克隆表达

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