PCR-构象敏感凝胶电泳技术在血友病A基因分型诊断及携带者检测中的应用

查看全文 作　　者：David [1]Lillicrap;[2]何国平;Jayne [1]Leggo;[2]刘雨生;[2]童先宏;[2]周桂香;[2]骆丽华 机构地区：[1]DepartmentofPathologyandMelecularMedicine,RichardsonLaboratoryofQueen'sUniversity,Canada;[2]安徽医科大学附属省立医院生殖医学中心 出　　处：《中华医学遗传学杂志》索引2009年第26卷第4期,共7页 基　　金：安徽省卫生厅医学科研课题(098115);安徽省教育厅自然科学研究项目(2006KJ066C);安徽省科技攻关项目(06013125B) 摘　　要：目的建立一种简便、快速的血友病A(hemophilia A,HA)基因突变筛查方法学,并用于直接基因诊断及携带者筛查。方法对于临床确诊的24例血友病A患者和家系女性成员,首先采用倒位PCR及PCR技术,检测是否为F脚基因第22、1内含子倒位或倒位携带者;对非倒位者则用PCR扩增FⅧ基因26个外显子,继而应用构象敏感凝胶电泳(conformation sensitive gel electrophoresis,CSGE)技术对37个扩增片段进行突变筛查,阳性者予以进一步测序验证;据突变类型,对非倒位HA先证者家系女性成员直接测序或行CSGE检测,以判读其是否为携带者。结果24个HA家系中,7例先证者FⅧ基因第22内含子倒位检测为阳性,未发现第1内含子倒位;13个有家族史及3个散发非倒位HA家系中均存在FⅧ基因不同外显子区的单碱基突变,1例未检出突变。本研究中,24个家系中基因分型诊断及携带者筛查阳性率、可诊断率分别为94.12%(16/17),100%(17/17)。结论PCR—CSGE检测HA单碱基突变高度敏感、特异;F脚基因第22、1内含子检测联合PCR—CSGE基因分型诊断技术及核苷酸测序可对所有的HA家系(含散发)进行直接基因诊断,理论上可筛查新突变并明确其突变类型。该法简便、快速、成本低,在HA直接基因诊断及携带者筛查中优势独特,应具重要应用价值。 关 键 词：血友病A 构象敏感凝胶电泳 基因诊断 携带者检测