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| 1 | 黄疣海参皂苷hillaside A和hillaside B的体外抗真菌及抗肿瘤活性显示文摘目的阐明黄疣海参hillaside A和hillaside B的抗肿瘤及体外抗真菌活性。方法对黄疣海参的总提取物采取硅胶柱色谱及半制备高效液相色谱(HPLC)法等分离手段进行活性成分追踪分离,通过理化性质及波谱学手段进行化学结构鉴定,以磺酰罗丹明B蛋白染色(SRB)法评价化合物的抗肿瘤活性。结果分离得到了2个新的三萜皂苷元类化合物,命名为hillaside A和hillaside B。2个新化合物均显示了较强的体外抗真菌及抗肿瘤活性。结论研究为研制新的抗肿瘤药物提供了先导化合物,为充分开发利用我国的海洋生物资源提供了一定的物质基础和科学依据。 | 张佳佳 朱可奇 巫军 王开义 | 2014 | 中国药业2014，23，8： | 5 |
| 2 | 禾谷镰孢菌β_2-微管蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化显示文摘【目的】在大肠杆菌中表达禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)的β2-微管蛋白,筛选使β2-微管蛋白可溶性表达的诱导因子,并对可溶性蛋白进行纯化。【方法】以构建好的质粒(pET32a+-β2-tubulin)为模板,PCR扩增出β2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,并转化到表达宿主菌BL21(DE3)及Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达,并筛选蛋白可溶性表达的诱导因子;对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western blot验证。【结果】获得了在大肠杆菌中表达效率高的阳性克隆;为了克服常规诱导条件下表达的β2-微管蛋白主要以包涵体形式存在的问题,通过对诱导温度、时间、诱导物浓度、初始诱导时的菌液浓度、培养液及宿主菌等六因子的综合分析,获得了β2-微管蛋白可溶性表达的优化条件;利用HisTrap HP预装柱对β2-微管蛋白进行纯化,可获得纯度很高的可溶性β2-微管蛋白;SDS-PAGE确认表达出的融合蛋白分子量为51.6 kD;Western blot证实表达的融合蛋白能与6×His及β-微管蛋白的单克隆抗体发生特异性反应。【结论】本研究为外源基因在大肠杆菌中的可溶性表达提供了参考;获得的微管蛋白为研究微管蛋白靶标类药物的抗性机制以及生产中开发新的以微管蛋白为靶标的杀菌剂提供了物质基础。 | 徐建强 周裕军 张聪 周明国 | 2012 | 中国农业科学2012，45，6： | 4 |
| 3 | 细粒棘球蚴原头节β_4微管蛋白的可溶性表达、纯化及生物信息学分析显示文摘目的对细粒棘球蚴原头节的β4微管蛋白(EgTub4)基因进行生物信息学预测和分析,并探索该基因在大肠埃希菌中可溶性表达的最佳诱导条件,纯化目标蛋白。方法采用ProtParam、SMART、Predictprotein和Swiss-model软件分析EgTub4蛋白的理化性质和结构,采用SignalP4.1软件进行信号肽预测。提取细粒棘球蚴原头节的总RNA,并反转录成cDNA,PCR扩增EgTub4基因,构建原核重组表达载体pET28aEgTub4、pET30a-EgTub4和pET32a-EgTub4,进行酶切鉴定,并测序。探索重组蛋白rEgTub4可溶性表达的最佳诱导条件[表达载体、诱导温度(T)、诱导剂(IPTG)浓度、诱导时间(t)和培养基类型]。利用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹分析(Westernblotting)。结果经生物信息学分析预测EgTub4蛋白理论等电点(pI)值为4.79,理论相对分子质量(M_r)为49700;EgTub4不含信号肽,含有3个结构域,分别为微管蛋白GTPase结构域、C末端结构域和卷曲螺旋区。成功构建了重组质粒pET28a-EgTub4、pET30a-EgTub4和pET32a-EgTub4,经双酶切后,均可得到与目的基因相对分子质量相符的片段,测序正确。经Westernblotting分析,在表达质粒pET28a(+)、pET30a(+)和pET32a(+)中重组蛋白分别为M_r56000、60000、68000。EgTub4基因在pET28a(+)中表达时不可溶,主要以包涵体形式存在,需要在变性条件下进行纯化。而在pET30a(+)和pET32a(+)中表达时均部分可溶,可以在非变性条件下进行纯化。综合考虑,本研究最终选择pET30a(+)作为EgTub4基因的表达载体。目标蛋白可溶性表达的优化条件为:T=25℃、[IPTG]=0.01mmol/L、t=10h、2×YT培养液。最佳洗杂咪唑浓度为150mmol/L,洗脱咪唑浓度为500mmol/L。Western blotting分析结果显示,纯化的蛋白均能与β-微管蛋白抗体及His-Tag标签抗体反应,条带大小符合预期,约M_r 60000。结论对EgTub4进行了生物信息学预测、分析和表达,得到该基因在大肠埃希菌中可溶性表达的最佳诱导条件,纯化目标蛋白。 | 姚嘉青 刘丛珊 薛剑 陶奕 张皓冰 | 2018 | 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2018，36，3： | 3 |
| 4 | 小麦赤霉病菌α-微管蛋白原核表达及纯化研究显示文摘为了制备小麦赤霉病菌的α-微管蛋白,以小麦赤霉病菌cDNA为模板,PCR扩增出α1-、α2-微管蛋白基因,将其克隆到pET30a+表达载体上,转化到表达宿主菌Rossatta(DE3)pLysS,筛选阳性克隆,进行蛋白诱导表达。SDS-PAGE及Wes-tern-b1ot结果表明:融合蛋白主要以包涵体形式存在;融合蛋白分子量约为52.1和55.9 kD;融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。通过对包涵体洗涤及透析复性后采用HisTrapTMHP Columns对融合蛋白进行纯化,可以得到纯度较高的融合蛋白。该研究为体外筛选以微管蛋白为靶标的杀菌剂提供了物质基础。 | 徐建强 张聪 于金凤 彭迪 周明国 | 2012 | 植物病理学报2012，42，3： | 2 |
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