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1我国人类朊病毒病检测监测体系建立及相关基础和应用研究显示文摘目的在我国开展克雅氏病(CJD)监测,探讨朊病毒病的发病机制。方法采用多学科交叉技术开展以疾病监测为导向的应用研究和发病机制为导向的基础研究。结果建立了CJD病原学诊断技术,制定了《克雅氏病诊断标准》,开展了覆盖12个省(市)自治区的CJD监测。首次较全面地了解了我国CJD病人的流行病学、临床和实验室特征;首次报道了我国多种遗传型CJD病例。建立了包括朊病毒实验动物平台、体外无细胞转化平台、PMCA平台、PrPSc抗原库等技术平台。首次发现了朊病毒可利用脾脏和肌肉组织进行复制、NADPH可促进PrPSc增殖;系统描述了PrPSc和其他神经因子在疾病潜伏期和终末期的变化;报道了PrP蛋白与多种神经蛋白发生相互作用;证明了PrP蛋白序列、二级结构、糖基化类型及胞内存在位置的改变均可诱导细胞凋亡。结论本研究直接服务于我国朊病毒病的防控工作,为朊病毒的研究积累了重要的科学数据。董小平 洪涛 韩俊 高晨 石琦 张宝云 周伟 田婵 姜慧英 屈建国 张瑾 董辰方 张莹 赵同兴 2010中国预防医学杂志2010,11,1:3
2Treatment of Scrapie Pathogen 263K With Tetracycline Partially Abolishes Protease-resistant Activity in vitro and Reduces Infectivity in vivo显示文摘Objective To study the possible effect of tetracycline on protease-resistant activity in vitro and infectivity in vivo of a scrapie strain 263K. Methods Scrapie pathogens were incubated with tetracycline at different concentrations for various periods of time and protease-resistant PrP signals were evaluated with proteinase K-treatment and Western blots. The preparations treated with tetracycline were intracerebrally inoculated into golden hamsters and typical TSE manifestations were noted. PrPSc in brain tissues of the infected animals was detected by PrP specific Western blot assays. Results Protease-resistant PrP was significantly reduced in or removed from the preparations treated with tetracycline in a dose-dependant manner. Compared with the control group after incubated for 53.75±0.50 days, the preparations treated with 5 mmol/L and 20 mmol/L tetracycline prolonged the incubation time of 61.5±1.73 and 59.5±0.58 days (P<0.05). Conclusion Treatment of scrapie pathogen 263K with tetracycline reduces or removes its protease-resistant activity in vitro.YAN-JUN GUO JUN HAN HAI-LAN YAO BAO-YUN ZHANG JIAN-MEI GAO JIN ZHANG XIN-LI XIAO XIAO-FAN WANG WEI-QIN ZHAO DE-XIN WANG XIAO-PING DONG 2007Biomedical and Environmental Sciences2007,20,3:1
3羊瘙痒因子263K经多种途径感染仓鼠的脑外组织PrP^(Sc)分子和沉积特点研究显示文摘目的 比较研究实验仓鼠经不同途径感染羊瘙痒病 (Scrapie)毒株 2 6 3K的终末期病鼠脑外组织内PrPSc分子和沉积特点。方法 以Scrapie 2 6 3K毒株经颅内、腹腔、心内、肌肉注射及灌胃等途径接种金黄地鼠 ,在终末期取脑、脊髓、脾、肾、舌、肌肉、小肠回盲部和胃组织 ,用HE染色观察病理变化 ,免疫组化法检测PrPSc的组织沉积特点 ,Westernblot检测PrPSc分子特征。结果 五种感染方式均可引起动物发病 ,在脑和脊髓组织中观察到典型的病理改变 ;PrPSc免疫组化检测显示外周途径感染动物脊髓白质内有大量沿纤维走行的PrPSc沉积 ,灰质前后角内围绕空泡点状或网状沉积 ,而颅内感染主要在中央管附近和后角出现大量的点状PrPSc沉积 ;脾脏、肾、小肠回盲部、胃组织中均观察到点状PrPSc的沉积 ;WesternBlot检测发现不同感染途径动物脊髓提取物均出现可抵抗蛋白酶消化的PrPSc条带 ,与脑提取物中PrPSc电泳性状完全一致 ;外周组织仅在脾脏检测到抵抗蛋白酶消化的PrPSc,但与正常对照比较 ,各种组织中PrP的总量明显增高 ,同时呈现与中枢神经组织不同的PrP电泳特征。结论 在TSE感染发病过程中 ,多种组织细胞成分可能参与了TSE感染因子的向中枢神经系统传递过程 。张瑾 陈岚 肖新莉 张宝云 韩俊 高建梅 田海燕 李冰玲 姜慧英 马贵平 刘勇 董小平 2005中国人兽共患病杂志2005,21,1:1
4Establishment of Cell Free Conversion System With Biotin-labelled Recombinant PrP^(sen) Expressed in E.coli显示文摘Objective To report a protocol using biotin-labelled PrP protein in cell free conversion assay instead of isotope. Methods A hamster PrP protein (HaPrP) was expressed in E. coli and purified with HIS-tag affinity chromatograph. After being labelled with biotin, HaPrP was mixed with PrPSc preparation from scrapie strain 263K. Results Protease-resistant bands were detected after four-day incubation. Conclusion The new conversion model provides a reliable, easily handling, and environment-friendly method for studies of prion and transmissible spongiform encephalopathies.JIN ZHANG JIAN-MEI GAO FENG LI JUN HAN LAN CHEN BAO-YUN ZHANG XIAO-FAN WAMG WEI ZHOU YONG LIU XIAO-PING DONG 2006Biomedical and Environmental Sciences2006,19,3:1
5人神经元特异性烯醇化酶蛋白表达及抗体制备(英文)显示文摘目的克隆和表达人的神经元特异性烯醇化酶(HuNSE)基因,制备HuNSE多克隆抗体,以期用于朊病毒病及相关疾病的临床诊断。方法经RT-PCR扩增HuNSE基因和测序验证后,将其克隆于原核表达载体pQE30,在大肠杆菌M15中诱导表达HuNSE蛋白,蛋白经Ni-NTA亲和纯化后,免疫兔子,所制备的抗血清用ELISA、Westernblotting和免疫组化鉴定。结果所表达的HuNSE蛋白相对分子质量约为22000,以其为抗原制备的HuNSE特异性抗血清具有良好的免疫反应性。Westernblotting和免疫组化结果显示抗血清可识别重组和不同哺乳动物脑组织中的NSE蛋白。结论NSE基因在大肠杆菌中获得了高效表达,所制备的NSE特异性抗血清可用于朊病毒病及其他神经退行性疾病的诊断和研究。肖新莉 韩俊 张琳 陈岚 张瑾 陈新林 周伟 姜惠英 张宝云 刘勇 董小平 2006南方医科大学学报2006,26,11:0
6我国人朊病毒病病例特征分析及朊病毒病发病机制的研究进展显示文摘可传播性海绵状脑病(Transmissible spongiform encephalopathies,TSE)是一类侵袭人类及多种动物中枢神经系统的退行性脑病,潜伏期长,100%致死率,并可在同种动物间传播。典型的神经病理学改变为脑组织中出现海绵状空泡样变性、淀粉样斑块沉积、神经元丢失和胶质细胞增生^([1])。石琦 肖康 陈操 韩俊 周伟 陈冬冬 高利萍 高晨 董小平 2022疾病监测2022,37,10:0
7不同剂量羊瘙痒因子263K颅内感染仓鼠临床终末期脑中GFAP表达的研究显示文摘目的研究不同剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠后,在发病的终末期星形胶质细胞增生程度是否与注射剂量及潜伏期长短有关。方法以胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)作为星形胶质细胞增生的分子标志物,采用Western Blot和免疫组化方法检测感染仓鼠终末期脑匀浆和脑组织病理切片中的GFAP表达,经定量分析比较各感染剂量组间是否存在差异。结果与正常对照相比,不同剂量感染仓鼠发病终末期脑组织GFAP阳性细胞数量和总GFAP含量均明显升高,但各感染剂量组间无显著差异。结论不同感染剂量羊瘙痒因子263K经颅内注射感染仓鼠在发病终末期脑中星形胶质细胞的增生程度相似,与感染剂量及潜伏期无关联性。田婵 张宝云 石琦 韩俊 高晨 韩露 董小平 2008中华实验和临床病毒学杂志2008,22,4:0
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