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| 1 | 马立克氏病病毒38kD磷蛋白表达产物的细胞质亲和性显示文摘将 pcDNA3 1 /Zeo表达性载体质粒中的启动子PCMV片段用HindⅢ及BglⅡ消化去除后 ,在该相应位点插入GA株马立克氏病病毒 (MDV)的包含上游调控序列的 38kD磷蛋白 (pp38)基因的完整片段 ,以此获得能用自身启动子表达 pp38的重组表达性质粒pcDNA pp38。转染试验表明 ,pp38基因的天然启动子在整合进载体质粒中后 ,仍能在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中启动pp38的表达。用 pp38特异性单克隆抗体H1 9对转染的CEF做间接荧光抗体检测试验发现 ,在转染细胞中表达的 pp38仅位于细胞浆中 ,基本不进入细胞核。而与此相对照的用pcDNA3 1 /Zeo为载体表达的MDV的肿瘤基因meq产物则正相反 ,仅显现在经转染CEF的细胞核中。meq和 | 崔治中 | 2004 | 病毒学报2004，20，1： | 4 |
| 2 | 马立克氏病病毒38kd磷蛋白H19-和T65-抗原表位分析及鸡对该抗原表位点突变病毒的免疫反应显示文摘对马立克氏病病毒(MDV)38 kd磷蛋白(pp38)基因的编码序列的测定表明,所有在间接荧光抗体试验(IFA)中与单抗H19反应的10个不同致病型MDV毒株,在第320位碱基为“A”,相应第107位氨基酸是谷氨酰胺,而在IFA中不与单抗H19反应的疫苗株CVI988相应位点分别是“G”和精氨酸。另一方面,在IFA中能与另一个单抗T65反应的毒株,在第326位碱基是“G”,第109位氨基酸是甘氨酸,而其他不与单抗T65反应的毒株,相应位点碱基和氨基酸分别是“A”和谷氨酸。通过比较CVI988及其在pp38基因的第320和326位的单一或双碱基点突变病毒CVI988/rpp38(AG)和CVI/rpp38(AA)对H19和T65的反应性,证明了在第107和109位的谷氨酰胺和甘氨酸分别对pp38上的H19和T65两个抗原表位起关键作用。比较CVI988及其点突变株CVI/rpp38(AG)在SPF鸡诱发的抗体反应表明,接种了点突变株CVI/rpp38(AG)鸡的抗体反应出现得比天然株抗体反应明显延缓且显著降低。进一步对MDV不同抗原成分的相应抗体水平比较表明,该功能区内可能存在着第3个特异性抗原表位,它决定于CVI988株pp38第107位的精氨酸,而且天然CVI988株及其点突变株诱发的抗MDV抗体水平间的显著差异可能正与这个抗原表位相关。 | 崔治中 张志 秦爱建 L.F.Lee | 2003 | 中国科学(C辑)2003，33，3： | 3 |
| 3 | Analyzing the H19-and T65-epitopes in 38 kd phosphory-lated protein of Marek's disease viruses and comparing chicken immunological reactions to viruses point-mutated in the epitopes显示文摘DNA sequencing analysis in 38 kd phosphorylated protein (pp38) ORF of Marek's disease viruses (MDV) indicated that all tested 10 virulent strains with different pathotypes had 'A' at base #320 and glutamine at aa#107 while reacted with monoclonal antibody (Mab) H19 in indirect fluorescence antibody test (IFA). However, vaccine strain CVI988 had 'G' at base#320 and arginine at aa#107 instead, when it was negative in IFA with Mab H19. Some strains were also reactive with Mab T65 in IFA while there was 'G' at base #326 and glycine at aa#109, but the other strains, which had 'A' at base #326 and glutamic acid at aa#109, did not react with Mab T65. By comparison of CVI988 to its point mutants CVI/rpp38(AG) and CVI/rpp38(AA) with 1 or 2 base(s) changes at bases #320 and /or #326 of pp38 gene for their reactivity with Mab H19 and T65, it was confirmed that the glutamine at aa#107 and glycine at aa#109 were critical to epitopes H19 and T65 respectively. Immuno-reactions to MDV were compared in SPF chickens inoculated with cloned CVI988 and its mutant CVI/rpp38(AG). It was found that antibody responses to MDV in chickens inoculated with CVI/rpp38(AG) were delayed and significantly lower than that in chickens inoculated with the native CVI988. By differential comparison of antibody titers to different antigens, a third epitope specific to CVI988 and dependent on arginine at aa#107 was suggested to be responsible for the big difference in antibody responses induced by native CVI988 and its mutant. | Lee Lucy F | 2004 | Science China(Life Sciences)2004，47，1： | 2 |
| 4 | 猪瘟流行毒株E2基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建显示文摘用RT PCR方法扩增了陕西省近期猪瘟流行野毒株E2基因 ,并将其克隆到 pMD 18 T载体 ;经转化、筛选、鉴定后 ,测定了核苷酸序列 ,根据C株、Brescia株和Alfort株确定起始氨基酸三联体的正确位置后进行 gp5 5氨基酸序列推导 ,并进行同源性比较。结果表明 ,该猪瘟流行毒株的E2核苷酸序列与C株、Brescia株和Alfort株的E2核苷酸序列同源性分别为 81.9%、83.4 %和83.5 % ;相应地 ,gp5 5氨基酸同源性分别为 94 .8%、95 .6 %和 95 .3%。将此E2基因亚克隆到杆状病毒转移载体 pFastBacHTb后获得了重组质粒 pFBHT E2 ,进而转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中 ,发生转座作用 ;经抗性及蓝白斑筛选得到了含E2基因的重组DNA ,将其命名为rBacmid E2。此研究为进一步在昆虫细胞中表达E2基因、开发研制猪瘟基因工程疫苗奠定了基础。 | 季新成 陈杰 张彦明 吴发兴 李晓成 黄保续 张燕霞 许信刚 | 2004 | 中国兽医科技2004，34，1： | 1 |
| 5 | MDV型疫苗株pp38基因同源物在家蚕细胞中的表达显示文摘用 PCR技术 ,从马立克氏病病毒 CVI988/C株感染的鸡胚成纤维细胞基因组 DNA中扩增出含起始密码子的 pp38基因同源物编码序列 .在 Southern blotting中 ,pp38基因探针能识别该 PCR扩增片段 .将该扩增片段克隆进 p UC1 8质粒载体 ,并进行了全序列分析 .进一步将该基因克隆入转移载体 p BacPAK8中 ,得到重组转移载体质粒 ,经酶切分析和 Southern blotting确证了插入方向的正确性 .以重组转移载体与经 Cvn 酶切线性化的亲本病毒 DNA通过脂质体法共转染家蚕细胞 ,通过白斑结合点杂交 ,筛选出纯化的重组病毒 .用间接荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞 ,可见感染细胞的胞浆及胞膜出现强荧光反应 . | 朱国强 王永坤 崔治中 殷震 肖庆利 何家禄 | 2000 | 扬州大学学报(自然科学版)2000，3，4： | 0 |
| 6 | 以杆状病毒为载体在昆虫细胞中表达致弱Ⅰ型马立克氏病病毒pp38基因同源物显示文摘用限制性内切酶Eco RI将不含起始密码子的pp38 基因从重组转移载体质粒pVLpp38 Ⅰ中切出,将致弱Ⅰ型MDV pp38 基因同源物克隆进该转移载体的相同位点。用所得的含pp38 基因同源物的重组转移载体质粒pVL pp38′与野生型杆状病毒(AcMNPV)以脂质体介导法共转染昆虫细胞系Sf9 后,用单克隆抗体H19 介导的间接荧光抗体法筛选到能表达MDV pp38 基因同源物的重组杆状病毒克隆。经SDS-PAGE和Western blot试验,证实pp38 基因同源物在Sf9 细胞中得到表达,抗重组杆状病毒血清能像抗MDV 血清那样,与MDV Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒感染的鸡胚成纤维细胞在荧光抗体试验中呈阳性反应。 | 朱国强 王永坤 崔治中 殷震 | 1999 | 中国兽医学报1999，19，6： | 0 |
| 7 | 马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆显示文摘用 P C R 技术,从马立克氏病病毒( M D V) C V I988/ C 株感染的鸡胚成纤维细胞( C E F)基因组 D N A 中扩增出含起始密码子的 M D V pp 38 基因同源物编码序列。在以 Digoxigenin ( Dig.)标记的 pp38 基因作为探针,在 Southern blot中,该探针能识别该 P C R 扩增片段。将该 P C R 扩增片段在 Bam HⅠ和 PstⅠ位点克隆进 p U C18 质粒载体,酶切分析筛选到含 pp38 基因同源物的重组质粒并进行了全序列分析,证明该重组质粒是 pp 38 基因同源物克隆。 | 朱国强 王永坤 崔治中 殷震 | 1999 | 江苏农业研究1999，20，2： | 0 |
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