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| 1 | 苹果锈果类病毒实时荧光定量反转录PCR检测及其在苹果树体内的扩散转移规律显示文摘为明确苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,ASSVd)在苹果树体内的转移规律,本研究建立高灵敏度的实时荧光定量反转录PCR(real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)方法,利用此方法检测该病毒在树体内的转移规律以及苹果果实上病毒积累量与症状的相关性。结果表明,本研究所建立的RT-qPCR检测技术能针对枝皮、果实、根组织中的ASSVd进行准确、灵敏的检测,检测灵敏度下限为41.00 fg/μL(相当于5.95×105copies/μL RNA);在嘎拉苹果树上接种ASSVd,2个月后植株各组织部位病毒积累量均较高,尤其是接种枝先端和树冠下层枝组,根部病毒积累量很少;接种4个月后,各组织部位病毒积累量下降,病毒在植株上部、下部和根部均匀分布;接种6个月后,在接种枝中下部和根部病毒积累量相对较高;接种8个月后,地上部各组织部位病毒积累量很低,主要集中在根部。在花脸症果实着色不同的果皮中ASSVd积累量差异显著,未着色果皮病毒积累量是着色果皮的4~40倍。表明ASSVd自果树枝干嫁接接种后,病毒先在接种枝中增殖,然后向根部转移,病毒的增殖和转移可能主要受寄主生长发育时期的影响,花脸病症状表现与病毒积累量密切相关。 | 郗娜娜 李紫腾 张静怡 孟祥龙 王亚南 曹克强 | 2020 | 植物保护学报2020，47，6： | 9 |
| 2 | TMV侵染后烤烟叶片色素含量高光谱估算模型研究显示文摘人工诱发不同病级烟草普通花叶病,接种后第3d采用ASD Field spec FR2500光谱仪对叶片进行光谱分析和相应色素含量测定。运用单变量线性或非线性拟合分析技术,选取部分样本建立色素含量估测模型,并利用其余样本对模型进行精度检验。结果表明,以蓝边面积(SDb)为自变量的线性模型是估测叶绿素a含量的最佳模型;以蓝边面积(SDb)为自变量的指数模型是估测叶绿素b和叶绿素a+b含量的最佳模型;以绿峰幅值(Rg)为自变量的线性模型是估测类胡萝卜素含量的最佳模型,其估测叶绿素a,叶绿素b,叶绿素a+b和类胡萝卜素含量的相对误差为-9.131%,-22.975%,-11.408%,-5.855%。 | 刘大双 刘国顺 李向阳 左伟标 张彩霞 | 2009 | 中国烟草学报2009，15，2： | 9 |
| 3 | 烟草花叶病毒强、弱毒株对烟草植株的影响显示文摘分别接种烟草花叶病毒强毒株(TMV-W)、诱变获得的两个弱毒株(TMV-017、TMV-152)于普通烟(品种为K326),间接ELISA法测定了强、弱毒株在接种叶上的增殖速率,同时考察了叶绿素a、叶绿素b、叶绿素、可溶性蛋白含量的变化。实验发现强毒株在接种后第2d就可检测到,而弱毒株在第3d被检测到。弱毒株在烟草植株体内的稳定浓度低于强毒株。分别受强、弱毒株侵染的烟草叶片中的叶绿素a、叶绿素b、叶绿素含量都有所下降,但强毒株引起的下降幅度最大。受强、弱毒株分别侵染的烟叶中可溶性蛋白含量均发生变化,初期都有所升高,之后,弱毒株随着侵染时间的延长而有所下降,而强毒株下降后又有所回升。 | 邵碧英 吴祖建 林奇英 谢联辉 | 2002 | 中国烟草科学2002，23，1： | 4 |
| 4 | NSvc4和CP蛋白与水稻条纹病毒的致病相关显示文摘【目的】以水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)编码的NSvc4蛋白和CP蛋白的致病功能鉴定为切入点,研究RSV的致病机理。【方法】通过农杆菌介导在本氏烟中对RSV编码的6个蛋白进行细胞定位。采用双分子荧光互补(Bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术鉴定NSvc4蛋白与其余5个蛋白间的互作关系,并用酵母双杂交体系(Yeast two-hybrid,YTH)对NSvc4与CP蛋白间的互作再次验证。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)系统在本氏烟叶片研究NSvc4蛋白和CP蛋白的致病性,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术验证致病性鉴定结果。【结果】RSV NSvc4蛋白能与CP蛋白互作,且蛋白复合体在本氏烟细胞中能够定位到叶绿体。致病性鉴定显示,PVX-RSV-NSvc4侵染的本氏烟表现为花叶症状;PVX-RSV-CP能够在侵染叶上诱导花叶症状,但是系统叶却恢复健康;PVX-RSV-NSvc4与PVX-RSV-CP共侵染的本氏烟和PVX-RSV-NSvc4CP侵染的本氏烟的侵染叶、系统叶均表现出了严重病症。Real-time PCR结果显示,PVX载体在各侵染本氏烟中的累积量均较低,而RSV CP和NSvc4基因的表达量与本氏烟的发病症状紧密相关。【结论】NSvc4和CP蛋白均有致病性。CP蛋白的致病力不能持久,但是与NSvc4蛋白互作后具有持久致病力,表明二者协同在RSV致病过程中发挥作用。 | 袁正杰 贾东升 吴祖建 魏太云 谢联辉 | 2013 | 中国农业科学2013，46，1： | 4 |
| 5 | 黄瓜花叶病毒M株系全序列测定显示文摘在定向克隆和序列分析试验中,白肋烟(Nicotiana tabacumcv.white Burley)为繁殖寄主,根据美国NCBI核酸数据库中CMV基因组RNA1,RNA2和RNA3基因序列,共设计3对特异性引物。对3对特异性引物进行PCR扩增,分别得到3.3 kb的RNA1、3.0 kb的RNA2和2.2 kb的RNA3 PCR扩增产物。M-CMV基因组cDNA经过序列测定,3条链的长度分别为:M-CMVRNA1全长3 361 bp,分子量为111 kDa的1a蛋白;RNA2全长3 037 bp,含有两个分子量为96.7 kDa的2a蛋白和分子量为13.1 kDa的2b蛋白;RNA3全长2 215 bp,分别编码分子量为30.5 kDa的3a蛋白和分子量为24 kDa的外壳蛋白(cp)。这是继国内CMV-CD、CMV-CA全序列报道之后的首次M-CMV全序列分析,为以后采用基因突变、置换方法观察寄主的症状变化做了前期工作。 | 谈珺 陈红运 高必达 朱水芳 | 2007 | 安徽农业科学2007，35，17： | 3 |
| 6 | 南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白的致病性分析显示文摘利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)异源病毒载体在本氏烟中分别和共同表达了南方水稻黑条矮缩病毒可能编码的6种非结构蛋白(Pns52、Pns6、Pns71、Pns72、Pns91和Pns92),采用实时荧光定量PCR技术分析了其表达水平。结果表明,与PVX空载体侵染的本氏烟相比,只有Pns92蛋白的表达能够表现出典型的花叶症状,6种蛋白共同表达时的症状与Pns92单独表达呈现的症状相似。推测Pns92可能与病毒的致病性有关。 | 陈梅香 章松柏 袁正杰 张松柏 吴祖建 刘勇 | 2015 | 杂交水稻2015，30，3： | 2 |
| 7 | 南方水稻黑条矮缩病毒P8蛋白的定位和致病性分析显示文摘P8是南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV)编码的一种外壳蛋白,该蛋白的其他功能未知。利用马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)异源病毒载体和pEarleyGate101在本氏烟(Nicotiana benthamiana)中表达了P8,通过荧光共聚焦显微镜观察这些蛋白的亚细胞定位情况,分析该蛋白的表达对本氏烟的影响。结果显示:P8主要定位于细胞质,在细胞质中形成颗粒状聚集体;与PVX空载体侵染的本氏烟相比,P8蛋白的表达能够促使本氏烟表现出一定程度的花叶和新叶皱缩症状,推测可能参与病毒的致病性过程。 | 陶亚群 彭小琴 李佩 王浩然 李聪 鲁红学 章松柏 吴祖建 | 2017 | 长江大学学报(自然科学版)2017，14，6： | 1 |
| 8 | 利用酵母双杂交系统筛选与黄瓜花叶病毒外壳蛋白互作的寄主蛋白显示文摘利用酵母双杂交系统,以黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的外壳蛋白(coat protein,CP)为诱饵,从番茄叶片c DNA文库中筛选与其互作的蛋白。结果显示,诱饵载体pBT3-SUC-CMV-CP均能在酵母细胞中正确表达,无自激活活性而且对酵母无毒性;通过对酵母双杂交文库的筛选和回转验证,共获得了98个阳性克隆,分别编码67个可能与CMV-CP相互作用的蛋白,分别参与植物防御反应、光合作用、物质转运、信号转导、能量代谢、氨基酸代谢、细胞壁的形态建成、植物的激素代谢等。本研究结果表明,CMV CP可同时调控寄主的多个代谢过程,在CMV的致病过程中有多重功能。 | 宁小清 张璐 潘瑞兰 曾泉 陈保善 蒙姣荣 | 2019 | 基因组学与应用生物学2019，38，7： | 1 |
| 9 | 水稻条纹病毒CP与叶绿体Rubisco SSU引导肽融合基因的构建及其原核表达显示文摘PCR扩增获得水稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)叶绿体Rubisco SSU引导肽基因和水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)外壳蛋白(coat protein,CP)基因。分别借助于pGEX-4T-1和pET-29a表达载体,通过两种方法构建了融合基因PR-CP和PR-S-CP。测序表明,其读码框完整,连接部位正确。将重组子pGEX-PR-CP和pET-PR-S-CP转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE电泳检测其表达产物分子量分别为64和40kD,与预期结果大小一致。Western blot鉴定发现,两种融合基因的表达产物均能与RSV CP抗体特异结合,说明融合蛋白中RSV CP蛋白保持了自身的抗原活性,叶绿体Rubisco SSU引导肽并未影响其正确表达。可以推断两种融合基因PR-CP和PR-S-CP在生物体内表达时,融合蛋白中的Rubisco SSU引导肽和RSV CP蛋白可能都能保持各自独立的结构和功能。 | 鹿连明 林丽明 谢荔岩 林奇英 吴祖建 谢联辉 | 2008 | 农业生物技术学报2008，16，3： | 0 |
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