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| 1 | 中药WCA对人胃癌细胞SGC-7901体内作用基因的筛选与验证显示文摘目的:探讨以四君子汤等健脾中药为基础的复方胃肠安(WCA)对胃癌细胞的体内作用分子机制。方法:采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型系统评价WCA对胃癌细胞的体内抑瘤作用;链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP法)检测增殖细胞核抗原PCNA表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL法)检测凋亡指数以及SP法检测caspase-3的活化表达;cDNA array筛选出WCA组N.S.对照组差异表达2倍以上基因,Real-tim e Quantitative PCR验证与增殖、凋亡、分化及信号转导密切相关的19条基因的表达;SP法检测部分有差异表达的基因在细胞内的蛋白表达。结果:与对照组比较,WCA组对皮下移植瘤生长的平均抑制率为(44.32+5.67)%,3次实验WCA组的平均瘤重分别为(0.99±0.76),(1.02±0.16),(0.88±0.47)g,分别低于对照组的(1.93±0.58),(1.65±0.46),(1.63±0.52)g(P<0.05);WCA组移植瘤PCNA阳性表达率(35.73±6.01)%、强阳性表达率(3.39±1.48)%和总阳性率(39.03±7.37)%均分别低于对照组的(53.48±9.34)%,(8.78±5.43)%,(62.26±13.80)%(P<0.05);凋亡指数为(9.72±4.51)%高于对照组的(2.45%±1.37)%(TUNEL法);WCA组活化caspase-3表达阳性率为(5.20±2.26)%,较对照组的(2.82±1.84)%高(P=0.0367);与对照组比较,全基因表达谱芯片筛选出WCA组共45个2倍以上差异表达基因,其中上调表达24个,下调表达21个。35个已克隆基因,10个表达序列标签(expression sequence tag,EST);2-ΔΔCT法对19条目标基因的表达量进行评估,与对照组比较,表达量显著差异4倍以上的有Stat3(2-ΔΔCT=0.16),R IPX(2-ΔΔCT=0.18),ROD1(2-ΔΔCT=0.23),bc l-2(2-ΔΔCT=0.10),均为下调表达作用;WCA组P-Stat3阳性表达率(35.93±12.67)%、强阳性表达率(3.64%±1.72)%和总阳性率(39.57±13.31)%均分别低于对照组的(56.49±9.34)%,(13.16±7.06)%,(69.65±10.80)%,差异有显著性;bc l-2蛋白阳性表达率(1.62±0.82)%低于对照组的(7.53±3.73)%(P<0.05)。结论:健脾中药复方WCA在体内可抑制胃癌细胞增殖,诱导凋亡;WCA对胃癌细胞SGC-7901在核酸层次上有影响作用的已知基因主要为Stat3,R IPX,ROD1,bc l-2,均为下调表达作用;在蛋白表达水平的作用机制与抑制磷酸化的Stat3,bc l-2蛋白在细胞内的表达,上调活化caspase-3的表达有关。 | 赵爱光 杨金坤 尤圣富 李婷 赵海磊 顾缨 唐莱娣 | 2007 | 中国中药杂志2007，32，19： | 16 |
| 2 | 胃癌从脾论治研究显示文摘脾胃虚弱是胃癌基本病因病机之一,脾虚证型与患者性别、Karnofsky评分、胃癌病理类型、TNM分期、癌胚抗原(CEA)及某些基因具有相关性,并通过实验及临床研究验证了脾虚证及健脾法在胃癌诊断及治疗中的作用。在此基础上提出了胃癌的病本在'脾',脾胃虚弱是胃癌发生与发展的基本因素之一,并形成了健脾法为基础的治疗法则。 | 慕晓艳 赵爱光 | 2013 | 辽宁中医药大学学报2013，15，3： | 14 |
| 3 | 补中益气汤、党参、白术含药血清对脾虚大鼠壁细胞胞内Ca^(2+)/CaM活性的影响显示文摘目的检测脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性并探讨补脾方药血清对其的作用。方法大鼠壁细胞的分离与纯化采用我室建立的常规方法,Ca2+/CaM活性检测采用环核苷酸磷酸二酯酶(PDE)法。结果脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性明显高于正常大鼠;补脾方药血清作用后脾虚大鼠壁细胞胞内Ca2+/CaM活性均有不同程度的下降。结论壁细胞胞内Ca2+/CaM活性的增高可能是脾虚大鼠的深层次病理机制之一;补脾方药血清可不同程度逆转和恢复脾虚大鼠这一微观病理趋势。 | 隋峰 王汝俊 王建华 | 2005 | 中药药理与临床2005，21，4： | 10 |
| 4 | 补中益气汤、党参、白术含药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca^(2+)]i的影响显示文摘目的:探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的调节作用。方法:采用血清药理学方法,以第三代荧光指示剂Fluo-3/AM负载细胞,用共聚焦显微镜观察大鼠单个壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i的动态变化。结果:睥虚大鼠壁细胞胃泌素刺激后[Ca2+]i升高幅度明显高于正常大鼠,达峰时间也有缩短趋势;补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间。结论:壁细胞胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证的微观病理机制之一,Ca2+的异常介导可能参与了脾虚证的病理形成;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理变化。 | 隋峰 王汝俊 王建华 | 2005 | 中药药理与临床2005，21，3： | 7 |
| 5 | 中药诱导肝癌细胞分化的研究进展显示文摘 | 慕晓艳 赵爱光 | 2007 | 中西医结合学报2007，5，1： | 7 |
| 6 | 三氯化镧对体外培养人肝癌细胞的抑制作用显示文摘目的:研究三氯化镧(LaCl3)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其作用机理。方法:体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721,给予LaCl3(0.05、0.10、0.50及1.00 mmol.L-1)培养不同时间(1、3、5和7 d),观察癌细胞生长曲线、集落抑制率、培养上清中甲胎蛋白(AFP)的变化。采用流式细胞术检测SMMC-7721细胞周期变化。免疫组织化学检测培养细胞CyclinD1、PCNA、CDK4及P16的表达情况。结果:MTT法显示0.50及1.00 mmol.L-1LaCl3对SMMC-7721生长具有明显的抑制作用,且具有剂量和时间的依赖性;0.10和0.50 mmol.L-1的LaCl3对肝癌细胞集落的形成抑制率分别为51%和67%(P<0.05),1.00 mmol.L-1LaCl3的集落形成抑制率达97%(P<0.01);不同剂量LaCl3作用SMMC-7721细胞3 d后,细胞周期发生明显变化,表现为G0/G1期细胞百分数增加,与对照组比较差异有显著性(P<0.01)。0.10、0.50及1.00 mmol.L-1LaCl3均可抑制AFP的分泌,其中以1.00 mmol.L-1LaCl3组作用最显著(P<0.01)。免疫细胞化学结果显示,LaCl3促进P16蛋白的表达,使Cyclin D1、PCNA和CDK4蛋白的表达下降。结论:LaCl3对SMMC-7721细胞生长具有明显的抑制作用,其机制可能与阻断细胞周期进程、降低细胞的恶性程度有关。 | 刘玉荣 陈东 姜文华 陈爱军 | 2006 | 吉林大学学报(医学版)2006，32，6： | 6 |
| 7 | 补中益气汤、党参、白术含药血清对脾虚大鼠壁细胞胞内Ca^(2+)/CaM-PKⅡ活性的影响显示文摘目的:检测大鼠壁细胞胞内PKⅡ活性,探讨脾虚大鼠的微观病理状态及补脾方药血清对其的作用。方法:采用血清药理学方法,根据Ca2+/CaM-PKⅡ可催化底物蛋白磷酸化,而蛋白磷酸化量可通过放射标记的方法测定出,从而依据它们之间的线性关系推算出Ca2+/CaM-PKⅡ的活性。结果:睥虚大鼠壁细胞胞内PKⅡ活性明显高于正常大鼠,补脾方药血清治疗后各组中的各项指标介于两者之间。结论:壁细胞胞内PKⅡ活性的升高可能是脾虚证的微观病理机制之一;补脾方药血清可不同程度恢复和逆转睥虚状态下的微观病理状态。 | 隋峰 王汝俊 王建华 | 2005 | 中药药理与临床2005，21，5： | 5 |
| 8 | 马尾松花粉多糖硫酸酯对肝癌HepG2细胞的诱导分化显示文摘目的:观察马尾松花粉多糖硫酸酯(SPPM60)对人肝癌细胞株HepG2的诱导分化作用,并对其机制进行初步探讨.方法:MTT法检测HepG2细胞增殖活力;倒置显微镜、HE染色及透射电镜观察细胞形态;流式细胞技术检测细胞周期;荧光分光光度计检测细胞内钙离子浓度的变化;免疫细胞化学方法检测甲胎蛋白的表达,溴甲酚绿法测定白蛋白含量;重氮反应比色法测定γ-谷氨酰转肽酶活力,比色法测定碱性磷酸酶活力,考马斯亮蓝法测定总蛋白含量.结果:经SPPM60处理后,HepG2细胞的增殖受到抑制;细胞形态趋于正常;与对照组相比,SPPM60组G0/G1期细胞数增加(76.97%±0.91%vs64.62%±0.18%,P<0.05),S期细胞数减少(17.21%±0.71%vs24.26%±0.15%,P<0.05),G2/M细胞数减少(5.82%±0.20%vs11.13%±0.34%,P<0.01);[Ca2+]i降低;甲胎蛋白表达降低,白蛋白分泌量上升(6.77±0.33mg/106细胞vs4.87±0.30mg/106细胞,P<0.05),γ-谷氨酰转肽酶与碱性磷酸酶活力降低(16.3±0.7U/gvs22.3±1.2U/g;223.3±15.7U/gvs311.1±13.4U/gP<0.05或0.01),胎盘型碱性磷酸酶的比例降低(46.4%±1.5%vs62.5%±2.3%,P<0.05).PPM60组细胞没有明显变化.结论:硫酸酯化赋予了SPPM60抑制HepG2细胞的活性,其作用机理可能是降低细胞内钙离子浓度,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导HepG2细胞分化逆转其恶性. | 刘芳 刘靓雯 蔡云 王丽娟 耿越 | 2009 | 世界华人消化杂志2009，17，29： | 5 |
| 9 | 中药诱导肝癌细胞分化研究纂要显示文摘益气、温阳、活血化瘀与清热燥湿的单味中药及其有效成分可诱导肝癌细胞分化 ,补中益气与清热解毒中药复方也可诱导肝癌细胞分化 ,养阴、温阳等不同治法都有诱导肝癌细胞分化的作用 ,相互之间可能存在协同作用。中药可通过下列途径诱导肝癌细胞分化 :细胞形态改变 :细胞由原来的卵圆形为主转变为多边形、长梭形或树枝状 ;细胞核变小 ,核浆比例减少 ;细胞器成熟增多 ;细胞微绒毛减少。生化指标改变 :AFP分泌量和γ -GT的活力下降 ,ALB分泌量、OCT、TAT的活力升高。细胞周期改变 :人参总皂苷、苦参碱使肝癌细胞G1 /G0 期细胞数减少 ,S期细胞数增加 ;羟基喜树碱则使肿瘤细胞阻滞于G2 /M期。信号传导变化 :cAMP含量增加 ,cAMP/cGMP升高。基因表达改变 :抑癌基因wp5 3、P2 7、P16、Rb表达增强 ,癌基因c -myc、c -ras、突变型P5 3表达降低 ,cyclinD1表达减弱。 | 吴雄志 陈丹 陆重琳 | 2005 | 中医药学刊2005，23，2： | 2 |
| 10 | 益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响及机制显示文摘目的:观察益气健脾药物血清对离体脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合作用的影响并探讨其相关机制. 方法:采用血清药理学方法和放射配基受体结合测定技术分别对正常、脾虚、药物血清作用后的大鼠壁细胞结合位点数进行检测,并对补中益气汤含药血清抑制大鼠胃泌素与其受体结合的抑制率进行了测定. 结果:脾虚大鼠壁细胞胃泌素受体结合容量明显少于正常大鼠(876.0±88.2 vs 1 071.1±102.1,P<0.01);补中益气汤药物血清作用后结合位点数明显上升(980.4±89.2 vs 876.0±88.2,P<0.05);党参及白术药物血清组作用后结合位点数也有上升趋势,但与脾虚组相比差异不显著;补中益气汤含药血清部分抑制大鼠胃泌素与其受体的结合(抑制率=42.9%>30%). 结论:益气健脾药物血清对脾虚大鼠的结合位点数下降具有上调作用;其机制可能与其同胃泌素受体的竞争结合相关. | 隋峰 王汝俊 王建华 杜群 许琦 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，12： | 1 |
| 11 | 补脾方药血清对离体脾虚大鼠壁细胞胞内[Ca^(2+)]i的影响显示文摘目的:探讨脾虚状态的分子病理机制及补脾方药对其的影响. 方法:采用血清药理学方法对分离后的大鼠壁细胞在体外给药,并用荧光指示剂Fura-2/AM负载细胞,使用双波长荧光分光光度计分别检测静息状态下壁细胞内的[Ca2+]i及胃泌素负荷后[Ca2+]i动态变化情况. 结果:静息状态下,脾虚模型组大鼠壁细胞胞内[Ca2+]i (64.32±12.82)明显低于正常组(76.64±14.21)(P<0.05),加入胃泌素(终浓度100 nM)后,胞内[Ca2+]i的增高幅度模型组(13.43±2.70)明显大于正常组(9.80±2.12)(P<0.01);脾虚大鼠经补脾方药血清作用后各组的静息状态下[Ca2+]i均介于正常组与模型组之间,胃泌素刺激后胞内[Ca2+]i的增高幅度也有不同程度的减小,其中党参治疗组的增高幅度(11.13±2.46) 与模型组(13.43±2.70)相比差异显著(p<0.05). 结论:脾虚大鼠壁细胞胞内静息状态下[Ca2+]i降低和胃泌素刺激后胞内[Ca2+]i的异常变化可能是脾虚证病理机制之一, Ca2+可能在分子水平上参与了脾虚证的形成. | 隋峰 王汝俊 王建华 杜群 巫燕丽 | 2005 | 世界华人消化杂志2005，13，3： | 1 |
| 12 | 小鼠AFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建及鉴定显示文摘目的:克隆小鼠甲胎蛋白(mAFP)基因并构建小鼠甲胎蛋白-细胞毒性T淋巴细胞抗原4(mAFP-CTLA4)融合蛋白真核表达载体.方法:从Hepal-6细胞中提取总RNA进行RT-PCR,扩增出mAFP基因,亚克隆于pcDNA3.1载体.PCR法从质粒pmCTLA4-Ig中克隆出mCTLA4膜外部分基因并通过重叠PCR法添加接头,重组连接于pmAFP质粒中mAFP基因后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆酶切、测序鉴定.用质粒瞬时转染CHO细胞,Westernblot检测融合蛋白的表达.结果:利用RT-PCR从Hepal-6细胞总RNA中成功克隆出1.8kb的mAFP基因;重组阳性克隆经酶切鉴定证实连有接头的CTLA4膜外部分基因已正确插入pmAFP质粒中,测序结果证实各片段连接方向及阅读框正确.用质粒瞬时转染CHO细胞,Westernblot检测到预计大小分子量蛋白的表达结论:mAFP-CTLA4融合蛋白真核表达载体的构建成功,为进一步研究其在肝癌免疫治疗中的作用奠定了基础. | 田耕 易继林 | 2004 | 世界华人消化杂志2004，12，2： | 0 |
| 13 | 二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2细胞的诱导分化作用的实验研究显示文摘目的:探讨二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2细胞的诱导分化作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,用DMSO干预细胞,MTT法检测药物对细胞增殖活力的影响;倒置相差显微镜和瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;放射免疫法检测细胞甲胎蛋白(AFP)和清蛋白(ALB)的分泌量;酶促反应试剂盒检测细胞中γ-谷胺酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果:用DMSO处理HepG2细胞72h后,能显著抑制细胞的增殖(P<0.05);细胞的形态向成熟细胞分化;细胞AFP的分泌量和γ-GT酶的活性明显降低,ALP活性和ALB含量则显著升高(P<0.05)。结论:DMSO具有诱导人肝癌HepG2向正常细胞分化的作用并抑制细胞增殖。 | 赵岩 赵斐然 满永宏 | 2016 | 现代肿瘤医学2016，24，16： | 0 |
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