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| 1 | GST-π基因对人脐血造血干细胞抗肿瘤药物耐药性的影响显示文摘目的:研究谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因转染人脐血造血干细胞对其抗肿瘤药物耐药性的影响。方法:取正常足月妊娠分娩抗凝脐血,采用磁分离法分离CD34+细胞,应用反转录病毒载体将GST-π基因转导入人脐血CD34+细胞。采用RT-PCR检测GST-π基因在被转染的CD34+细胞内的表达。采用克隆培养技术进行体外对药试验,检测在不同浓度的卡铂、4-羟基环磷酰胺(4-HC)或阿霉素(ADM)存在的条件下,CD34+细胞形成CFU-GM及BFU-E克隆的数目,判断GST-π基因转染对CD34+细胞耐药性的影响。并采用RT-PCR技术检测耐药CFU-GM克隆中GST-πmRNA的表达。结果:体外耐药试验显示,药物浓度为0时,实验组与对照组CFU-GM及BFU-E无显著性差异;当卡铂达到一定浓度时,经GST-π基因转染的CD34+细胞,CFU-GM及BFU-E克隆形成数显著高于对照组。ADM及4-HC存在条件下,实验组CFU-GM形成数也显著高于对照组,而BFU-E在两组差异无显著性。在对卡铂(3μg/ml)耐药的CFU-GM中,70%(7/10)检测到GST-πmRNA;对ADM(25 ng/ml)耐药的CFU-GM中,80%(8/10)检测到GST-πmRNA;对4-羟环磷酰胺(2.5μg/ml)耐药的CFU-GM中,80%(8/10)检测到GST-πmRNA。对照组中均未检测到GST-πmRNA。结论:GST-π基因转染人脐血造血干细胞,能增强造血干细胞对卡铂、阿霉素及4-羟基环? | 杨兴升 姜洁 张友忠 王立杰 孔北华 | 2004 | 山东大学学报(医学版)2004，42，2： | 2 |
| 2 | 应用AdEasy腺病毒载体系统构建人GST-π基因的重组腺病毒显示文摘目的:利用AdEasy腺病毒载体系统构建人谷胱甘肽转移酶-π(GST-π)基因重组腺病毒并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:从质粒中通过PCR的方法扩增出目的基因GST-π并带有适宜的酶切位点,双酶切后连pAdtrackCMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAdtrack-GST-π,经酶切线性化后,采用电穿孔转化到含腺病毒骨架质粒AdEasy1的BJ5183大肠杆菌电感受态细菌中,挑选同源重组质粒AdEasy-GST-π,酶切线性化重组质粒并转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察绿色荧光表达。重组病毒上清乒乓交互感染HEK293细胞,荧光显微镜观察绿色荧光表达。结果:经限制性内切酶检测和GFP表达证实成功地构建了携带GST-π基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒。结论:成功地构建了携带GST-π基因的重组腺病毒载体,为利用GST-π基因转染造血干细胞的基因治疗奠定了基础。 | 罗小辑 金先庆 陈瑾 | 2006 | 重庆医科大学学报2006，31，4： | 2 |
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