| 2 | N-甲基-D-天冬氨酸诱导的视网膜兴奋性毒性大鼠模型中5-甲基胞嘧啶的表观转录组学分析显示文摘目的分析和验证N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的视网膜兴奋性毒性大鼠模型中经5-甲基胞嘧啶(m5C)甲基化修饰的转录本的差异性表达。方法7~8周龄雄性Sprague Dawley大鼠65只,随机分为正常对照组、NMDA组。NMDA组大鼠右眼(模型眼)玻璃体腔注射浓度为50.0 mmol/L的NMDA 3μl,正常对照组大鼠右眼玻璃体腔注射等体积生理盐水。建模后7 d,采用视觉诱发电位检测大鼠视神经传导功能;苏木精-伊红染色观察大鼠视网膜整体结构,检测视网膜各层厚度以及视网膜神经节细胞层的细胞数量;视网膜铺片免疫荧光染色检测β3微管蛋白免疫荧光染色阳性细胞个数。收集正常对照组、NMDA组大鼠视网膜,提取总RNA,进行高通量m5C修饰RNA测序,并进行生物信息学分析;实时定量聚合酶链反应检测视网膜中SLFN3、PLXNB3、CD36、HIC2 mRNA相对表达量。组间比较行非配对t检验。结果正常对照组、NMDA组P1波潜伏期分别为(117.86±6.48)、(148.46±3.78)ms,振幅分别为(42.57±2.41)、(8.68±0.63)μV;与正常对照组比较,NMDA组潜伏期延长,振幅显著下降,差异均有统计学意义(P<0.001)。正常对照组大鼠视网膜神经节细胞(RGC)排列均匀,细胞核大而圆;NMDA组大鼠视网膜RGC体积萎缩,数量减少,细胞核固缩。正常对照组、NMDA组视网膜总厚度分别为(207.51±12.76)、(187.51±12.54)μm;β3微管蛋白阳性细胞数分别为(79.86±6.56)、(29.36±2.16)个。与正常对照组比较,NMDA组视网膜总厚度、β3微管蛋白阳性细胞数均降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组比较,NMDA组筛选出差异表达m5C mRNA 576个,其中上调、下调基因分别为230、346个。生物信息分析结果显示,与正常对照组比较,NMDA组表达上调的m5C mRNA主要参与感知力、细胞-细胞黏附等生物过程,主要富集于细胞因子-细胞因子受体的相互作用、神经活性配体-受体相互作用通路中;表达下调的m5C mRNA参与的生物过程主要包括G蛋白偶联受体信号传导途径、细胞通信等,主要富集于原发性免疫缺陷通路、神经活性配体-受体相互作用等通路中。实时定量聚合酶链反应检测结果显示,相对于正常对照组,NMDA组大鼠视网膜中SLFN3、PLXNB3 mRNA相对表达量明显升高,CD36、HIC2 mRNA相对表达量明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论NMDA诱导的视网膜兴奋性毒性大鼠模型中,经m5C修饰的视网膜转录组存在异常表达。 | 王森楠 李亚红 刘勋 张琰 | 2023 | 中华眼底病杂志2023，39，10： | 0 |
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