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| 1 | FLT3-ITD插入长度对32D细胞增殖、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响显示文摘目的:研究FLT3-ITD突变体ITD插入长度对细胞增殖能力、凋亡及靶向抑制剂敏感性的影响,为临床分级治疗FLT3-ITD突变型急性髓系白血病提供数据参考。方法:从先前解析出的ITD序列中挑选3个位置相同或相邻的不同大小的ITD序列,构建FLT3-ITD真核表达质粒;利用慢病毒包被系统建立FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;检测FLT3-ITD细胞株细胞增殖情况,经靶向抑制剂AC220处理后的其增殖抑制及凋亡情况。结果:成功构建了ITD1、ITD2和ITD3三株FLT3-ITD稳定表达32D细胞株;ITD1、ITD2和ITD3细胞株在无IL3因子培养基生长条件下48 h后的增殖倍数分别是2.3、3.7和4.3倍;在FLT3小分子抑制剂AC220加药条件下,ITD1、ITD2和ITD3细胞株增殖抑制IC50值分别是0.183、0.446和0.836 nmol/L,凋亡率分别是88.6%、34.2%和16.1%。结论:插入ITD长度长的FLT3-ITD突变体表达细胞在增殖能力和耐受靶向抑制剂AC220的能力方面均增强。 | 刘松柏 董豪杰 王隽 邱桥成 薛胜利 李凌 | 2021 | 中国实验血液学杂志2021，29，4： | 0 |
| 2 | FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化显示文摘目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。 | 杨凡 杜佳慧 吴洁 袁濮玉 苏倩 撖荣 邱桥成 薛胜利 刘松柏 孙中文 | 2018 | 细胞与分子免疫学杂志2018，34，3： | 0 |
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