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| 1 | 大肠杆菌必需基因的CRISPR-Cas9敲除策略及高效质粒置换方法显示文摘由于必需基因的功能必须性使其难以从基因组上被删除,而此前报道的方法存在效率低、非无痕敲除等缺点。基于此,该文建立了一种基于CRISPR/Cas9的基因组必需基因高效无痕敲除方法。以大肠杆菌metK基因(编码S-腺苷甲硫氨酸合酶)为例,首先将metK基因克隆至质粒pTarget-metK,并采用定点突变方式将metK基因进行同义突变移除对应的PAM序列,构建获得质粒pHL3。进一步构建含有与pHL3相同metK的回补质粒,pCas、pHL3及回补质粒依次转化即可完成基因组必需基因的高效无痕敲除。该方法对必需基因metK编辑时编辑效率可达100%。为了研究必需基因的酶学性质改变对宿主代谢的影响,探索了基于质粒不相容及Flp/FRT系统对回补质粒的置换效率,发现基于Flp/FRT系统可实现回补质粒高效置换。生长测试表明携带metK野生型或是PAM位点突变的metK编辑菌株与野生型菌株在LB培养基和M9培养基中生长无明显差异,而对L-甲硫氨酸亲和力下降MetK突变体则表现明显的生长延滞。 | 刘锦辉 黄建峰 尤晓颜 张燕飞 | 2023 | 食品与发酵工业2023，49，18： | 0 |
| 2 | 基于不同Cas9突变体的CRISPR/Cas9在医学检验新方法领域的发展与应用显示文摘CRISPR/Cas9核酸编辑系统具有组成简易、靶向性强、切割效率高等特点,其在医学检验新方法领域的研究与应用日益广泛。具有不同结构域Cas9核酸酶的CRISPR/Cas9的活性差异明显,并基于此研究出不同功能的Cas9突变体蛋白,包括同时切割双链DNA的野生型、只切割目标链的RuvC突变型、只切割非目标链的HNH突变型、只结合不切割的双突变型。近年来,基于上述CRISPR/Cas9体系发展出众多高特异度、高灵敏度、简便快捷检测靶标分子的新方法,且其在肿瘤、病原体早期诊断技术研发中具有巨大的应用潜力。但在未来医学检验新方法研究中,克服脱靶效应是CRISPR/Cas9需要解决的主要问题。 | 陈卓颖 戴枫 段晓雷 | 2022 | 医学综述2022，28，24： | 0 |
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