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| 1 | 中华蜜蜂GABARAP基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体的构建显示文摘【目的】对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)中自噬相关蛋白Atg8家族成员γ-氨基丁酸相关受体蛋白(gamma-aminobutyric acid receptor type associated protein,GABARAP)基因进行克隆鉴定和生物信息学分析,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,以期为后续探究该基因的功能奠定基础。【方法】根据GenBank中西方蜜蜂(Apis mellifera)GABARAP基因序列(登录号:XM_001120069.5)设计引物,采用巢式PCR对中华蜜蜂GABARAP基因进行扩增、克隆;运用生物信息学软件对其氨基酸序列相似性、二级结构、三级结构进行比对和预测分析;构建GABARAP基因原核表达载体,利用Western blotting对GABARAP蛋白进行鉴定后并用IPTG诱导纯化。【结果】经巢式PCR扩增得到中华蜜蜂GABARAP基因序列;使用在线BLAST工具对氨基酸相似性进行分析显示,中华蜜蜂GABARAP与西方蜜蜂、大蜜蜂、小蜜蜂、欧洲熊蜂、东方熊蜂的氨基酸序列相似性为100%;氨基酸序列系统进化树显示,中华蜜蜂与西方蜜蜂亲缘关系最近,与秀丽隐杆线虫亲缘关系最远。生物信息学分析结果显示,GABARAP基因编码区全长354 bp,编码117个氨基酸,蛋白分子质量为13.99 ku,理论等电点为9.48;GABARAP蛋白二级结构主要由3个α-螺旋、4个β-折叠和6个多肽结合位点构成,二、三级结构预测结果一致;SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导的GABARAP蛋白分子质量为35 ku;Western blotting鉴定结果证明了His单克隆抗体可以特异性识别GABARAP蛋白。【结论】本研究成功克隆了中华蜜蜂GABARAP基因,获得了GABARAP蛋白并进行了生物信息学分析,为进一步研究GABARAP基因及其蛋白在自噬发生中的作用提供了参考。 | 于慧敏 吴鹏杰 李南南 谭静 徐书法 武江利 | 2022 | 中国畜牧兽医2022，49，1： | 1 |
| 2 | 兰州大尾羊脂联素及其受体基因全长cDNA克隆与表达模式分析显示文摘为探究脂联素及其受体基因在绵羊中的序列结构及组织表达特异性,以兰州大尾羊为研究对象,利用RACE技术克隆兰州大尾羊脂联素及其受体基因的全长cDNA序列,运用实时荧光定量PCR技术分析脂联素及其受体基因在兰州大尾羊15种组织中的表达规律。结果表明:兰州大尾羊APN、AdipoR1和AdipoR2基因的cDNA全长分别为2101 bp、2035 bp和1089 bp,APN基因在肌肉、心脏及皱胃中的表达量显著高于其他组织,AdipoR1和AdipoR2基因在内脏脂肪与皮下脂肪中的表达量显著高于其他组织。APN和AdipoR1基因在大肠、小肠、瘤胃及皱胃中均有一定程度的表达,而AdipoR2基因在其余组织中几乎不表达。 | 张德荣 孙渭博 曹忻 李羽翡 柏家林 | 2022 | 西北农业学报2022，31，11： | 0 |
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