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| 1 | 碱基编辑器介导的猪IGF2基因高效定点突变显示文摘本研究旨在利用碱基编辑器在巴马猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast cells,PFFs)中对生长性状相关基因胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)进行高效、精确的定点编辑。通过PCR扩增和测序对巴马猪和大白猪的IGF2基因序列进行鉴定,构建靶向巴马猪的sgRNA-IGF2表达载体,进而通过细胞转染、混合细胞编辑效率检测、单克隆细胞筛选及基因型鉴定等技术手段研究不同碱基编辑器对猪IGF2基因靶点的编辑效率及突变类型。结果显示,巴马猪和大白猪IGF2基因第3内含子存在第3072 bp处的单核苷酸多态性(SNP)位点,设计靶向巴马猪IGF2基因的单链寡核苷酸序列。单链寡核苷酸经退火后与BsaⅠ线性化的pGL3-U6-sgRNA质粒进行重组连接,构建sgRNA-IGF2表达质粒,重组质粒测序结果表明,sgRNA序列已经精确连入U6启动子和sgRNA骨架之间。将rA1-BE3、hA3A-BE3、hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F 4种胞嘧啶碱基编辑器分别与sgRNA-IGF2表达质粒共转染至猪胎儿成纤维细胞中,对混合细胞编辑效率进行检测结果表明,对于IGF2基因靶点,hA3A-BE3系列碱基编辑器C到T的编辑效率显著高于rA1-BE3(P<0.05)。流式分选、单克隆细胞培养及鉴定结果表明,虽然有71.43%的hA3A-BE3单克隆细胞已被编辑,但有42.86%的细胞存在插入和缺失(indels);hA3A-BE3-Y130F和hA3A-eBE-Y130F的编辑效率(56.86%和40.38%)虽低于hA3A-BE3(71.43%),但是indels的效率也较低(31.37%和21.15%)。测序结果分析表明,利用碱基编辑器高效筛选到IGF2基因靶点纯合点突变的单克隆细胞。碱基编辑器作为新的基因编辑工具,可以对猪基因组中与经济性状关联的SNP位点进行高效、精确的基因修饰,为加速猪经济性状的遗传改良提供理论与实践基础。 | 王煜 宋瑞高 赵建国 王彦芳 | 2020 | 中国畜牧兽医2020，47，11： | 5 |
| 2 | 单碱基编辑技术的应用研究进展显示文摘单碱基编辑(base editor,BE)技术是一种基于CRISPR/Cas9技术发展而来的新一代基因编辑技术。与传统的基因编辑技术相比,单碱基编辑具有高效、安全、副产物少等优势,其正逐渐取代传统的锌指蛋白核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)技术、转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effector nuclease,TALEN)技术、成簇的规律间隔短回文重复序列及相关蛋白Cas(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/Cas,CRISPR/Cas)技术,成为主流的基因编辑技术。单碱基编辑技术极大地促进了家畜基因编辑育种、人类遗传疾病基因治疗等领域的发展。随着脱氨酶和Cas核酸酶的不断优化,单碱基编辑的准确率不断提高,靶向范围不断扩大,使该技术在生命科学领域获得更广泛的应用。作者比较了历代基因编辑技术的优点与缺点,回顾了单碱基编辑技术的主要功能结构、编辑原理和优化历程,分析了单碱基编辑技术的优势与不足,重点阐述了单碱基编辑技术在家畜抗病力、产肉率、产毛量和繁殖力等重要经济性状的改良及人类基因疾病治疗等方面的应用,并对单碱基编辑技术在单次改良家畜多个经济性状、攻克猪配子冷冻保存难题等方面的深入应用提出了设想。 | 徐茜 杨莎 郝海生 杜卫华 庞云渭 赵善江 邹惠影 朱化彬 李树静 余文莉 赵学明 | 2021 | 中国畜牧兽医2021，48，12： | 2 |
| 3 | 单碱基编辑技术在动物中的应用显示文摘近年发展起来的人工核酸酶技术可引起特定位点的DNA双链断裂,断裂后通过同源重组修复机制使精准单碱基编辑成为可能。基于CRISPR/Cas9将Cas9n与胞嘧啶脱氨酶或腺苷脱氨酶融合而开发出的单碱基编辑系统可进一步提高单碱基编辑的效率和精确度,在不造成DNA双链断裂的情况下实现精准单碱基编辑。对动物进行单碱基编辑不仅有望提高其生产性能,而且能为人类疾病研究作出重要贡献。文章回顾了单碱基编辑系统的发展历程,重点介绍了单碱基编辑系统在动物中的应用,并对单碱基编辑系统在动物中的应用前景进行了展望,以期为动物基因编辑技术的研发和应用提供理论依据和应用案例。 | 陈力 王静 吴平先 张廷焕 郭宗义 王金勇 | 2023 | 黑龙江畜牧兽医2023，，23： | 0 |
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