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| 1 | 耐热β-甘露聚糖酶的异源表达及低聚寡糖制备研究显示文摘研究从魔芋基地筛选产甘露聚糖酶菌株,并克隆甘露聚糖酶基因。设计兼并引物获得目的基因,通过电转化法至毕赤酵母GS115中实现异源表达,研究该重组酶的酶学特性。结果显示,重组甘露聚糖酶DL4man基因为1 104 bp,蛋白分子量为41.5 kDa,糖苷水解酶26家族。最适反应pH值为5.5,最适反应温度为55℃,70℃下半衰期为70 min,80℃下耐受100 min后剩余46%的酶活,属于耐高温甘露聚糖酶,具有良好的胃-胰蛋白酶耐受性。酶解角豆胶的产物主要是聚合度为2、3、4、5的甘露寡糖。酶解魔芋粉的主要产物是聚合度为2、3的甘露寡糖。研究实现耐高温甘露聚糖酶在毕赤酵母GS115中的异源表达。研究表明,该酶酶解魔芋粉、角豆胶均能够生成甘露低聚糖,可为甘露低糖的制备提供参考。 | 者园园 苗华彪 吴倩 慕跃林 黄遵锡 | 2021 | 饲料研究2021，44，23： | 3 |
| 2 | 转录因子Prm1和Mit1对毕赤酵母产外源蛋白的影响显示文摘【目的】研究转录因子Prm1和Mit1在毕赤酵母表达外源蛋白中的作用,为提高毕赤酵母中的外源蛋白产量提供参考。【方法】以毕赤酵母GS115为出发菌构建8种菌株,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,过表达Prm1、Mit1或敲除Prm1、Mit1和Mxr1,以GFP的表达量为指标,分析其对毕赤酵母产外源蛋白的影响。在甲醇和甘油2种碳源下,利用实时定量PCR分析Prm1和Mit1在转录水平的表达情况,探究Prm1和Mit1的关系。【结果】成功构建了表达GFP的菌株、单因子过表达Prm1和Mit1的菌株及敲除Prm1、Mit1、Mxr1的菌株等8种菌株。利用P AOX1诱导型过表达Prm1,毕赤酵母细胞内的GFP表达量极显著提高(P<0.01),而用P_(GAP)组成型过表达Prm1,GFP的表达量无明显变化;利用P_(AOX1)诱导型和P_(GAP)组成型过表达Mit1,GFP表达量均极显著提高(P<0.01),较对照分别提高3.2和2.5倍;敲除Prm1后,GFP的表达量显著下降(P<0.05);敲除Mit1后,GFP几乎不能发出荧光。实时荧光定量PCR结果显示,在甲醇和甘油2种碳源下,敲除Prm1后Mit1少量表达,敲除Mit1后Prm1大量表达。【结论】利用P_(AOX1)诱导型过表达Prm1、Mit1和利用P_(GAP)组成型过表达Mit1,均能提高GFP在毕赤酵母细胞内的表达量。Prm1和Mit1可作为正调控因子在毕赤酵母产外源蛋白中发挥作用,且Prm1能激活Mit1,Mit1可反馈抑制Prm1。 | 邓云涛 方浩 史鹏 | 2024 | 西北农林科技大学学报(自然科学版)2024，52，1： | 0 |
| 3 | 毕赤酵母高效表达外源蛋白的分子水平策略显示文摘毕赤酵母表达系统具有许多优异特性,并且是目前最成功的外源蛋白表达系统之一。通过近几十年的快速发展,该系统已引起各界的广泛关注,并产生了巨大的经济和社会价值。与其他现有表达系统相比,毕赤酵母在目的蛋白翻译后修饰上有着极大优势,已被广泛应用于表达外源蛋白。但是另一方面,由于该系统受包括外源基因的特性、菌种、表达环境和发酵技术等多种因素的影响,,其在不同外源蛋白的表达上也表现出很大差异。该文着眼于分子水平上的基因转录、蛋白质加工、蛋白质降解以及转运分泌4个模块,介绍了利用毕赤酵母表达系统通过优化密码子、高拷贝数外源基因、引导肽筛选、敲除蛋白酶基因、共表达促折叠因子等途径提高外源蛋白表达效率的相关策略,并简要展望了该系统的发展前景,以期为构建高效毕赤酵母细胞工厂提供指导。 | 张欣然 凌焱 杨英 | 2022 | 食品与发酵工业2022，48，17： | 0 |
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