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| 1 | 黄鳝nanos3基因克隆鉴定及其组织表达分析显示文摘【目的】明确nanos3基因在黄鳝卵巢发育和维持过程中的重要作用,为黄鳝PGCs可视化分子标记、生殖细胞移植及性腺发育分化机制研究打下基础。【方法】通过RACE克隆黄鳝nanos3基因cDNA序列,运用ProtParam、SOMPA、SWISS-MODEL、SignalP、TMHMM及NetPhos等在线软件进行Nanos3蛋白生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR检测nanos3基因在黄鳝不同组织中的表达情况,并以冰冻切片荧光原位杂交进行性腺组织定位。【结果】黄鳝nanos3基因cDNA序列全长1289 bp,包括147 bp的5’非编码区(5’-UTR)、531 bp的开放阅读框(ORF)及611 bp的3’非编码区(3’-UTR),共编码176个氨基酸残基。黄鳝Nanos3蛋白分子量为19.61 kD,理论等电点(pI)为9.07,为碱性蛋白;在黄鳝Nanos3氨基酸序列第108~162位处存在2个锌指基序“CCHC”结构域,无信号肽和跨膜结构域;蛋白二级结构以无规则卷曲的占比最高(64.20%),其次是α-螺旋(占24.43%),延伸链、β-转角的占比分别为6.82%和4.55%。黄鳝与大刺鳅、射水鱼、斑马鱼等鱼类的Nanos3氨基酸序列相似性分别为67.5%、57.2%和50.3%,与中国林蛙、粗皮蛙等两栖类动物的相似性分别为39.3%和30.3%,与人类、小鼠等哺乳类动物的相似性分别为33.3%和30.9%。nanos3基因在黄鳝肌肉中不表达,在精巢、肾脏、脾脏、脑、肝脏、肠道、心脏和血液中的相对表达量较低,在卵巢中的相对表达量最高,极显著高于在其他组织中的相对表达量(P<0.01),呈明显的组织特异性表达模式;冰冻切片荧光原位杂交分析结果显示,黄鳝nanos3基因仅在生殖细胞中表达,支持细胞中未见表达。【结论】黄鳝nanos3基因进化相对保守,主要在卵巢的生殖细胞中表达,且以细胞质中的表达为主,与核遗传信息的传递相关,是黄鳝性腺发育及分化相关的功能基因。 | 何坤 吴华东 张士林 刘铮铮 阮记明 孙艺文 李福贵 | 2022 | 南方农业学报2022，53，8： | 2 |
| 2 | 斑鳢生长激素基因的克隆及表达分析显示文摘生长激素(growth hormone, GH)是垂体分泌的多肽,在硬骨鱼类的发育和体细胞的生长过程中具有重要的调节作用。为探究生长激素在斑鳢(Channa maculata)雌、雄生长差异中的作用及其与性激素的相互作用机制,本研究克隆了斑鳢GH基因(GenBank No. MW574005)序列,分析了其表达模式及对外源性类固醇激素的响应。结果表明,斑鳢GH基因cDNA序列全长882 bp,开放阅读框(ORF)为639 bp,共编码212个氨基酸。斑鳢GH基因序列长1 604 bp,含有5个外显子和4个内含子。在5’端上游鉴定到一段长1 199 bp的侧翼序列,该序列含有前B细胞白血病转录因子3 (pre-B-cell leukemia transcription factor3, PBX3)、信号转导和转录激活因子1 (signal transducers and activators of transcription 1, STA1)和叉头转录因子O3 (forkhead box O3, FOXO3)等多种转录因子结合位点。组织表达分析显示,GH在斑鳢垂体中高表达,且在雄性中的表达极显著高于雌性(P<0.01);不同发育时期表达分析显示,GH基因在365 d的雄性斑鳢垂体中表达量最高,且极显著高于同时期雌性斑鳢(P<0.01)。经ELISA检测验证,各发育时期内,雄性个体血清中的GH含量均高于同时期雌性个体。激素诱导实验显示,17α-乙炔基雌二醇(17α-ethynylestradiol, EE2)抑制雌、雄斑鳢垂体中GH基因的表达;17α-甲基睾丸酮(17α-methyltestosterone, MT)促进雄鱼垂体中GH基因的表达,但降低雌鱼垂体中GH基因的表达。该研究为进一步探究斑鳢雌雄生长二态性机制和生长调控的分子机理研究提供参考。 | 高丹丹 欧密 吴燕铎 陈昆慈 刘海洋 罗青 赵建 | 2021 | 农业生物技术学报2021，29，12： | 2 |
| 3 | 大刺鳅生长分化因子2(GDF2)基因克隆及表达分析显示文摘研究大刺鳅生长分化因子2(growth differentiation factor 2,GDF2)基因与大刺鳅生长发育之间的关系。利用RT-PCR对大刺鳅生长发育相关基因GDF2进行了克隆并对其进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR研究大刺鳅GDF2基因在肝、性腺、脑等9种组织中的表达情况;通过注射促黄体素释放激素(LHRH-A2)、绒毛膜促性腺激素(HCG)以及地欧酮(DOM)三种激素,研究大刺鳅GDF2基因在肝组织中表达量的变化。结果表明:大刺鳅GDF2基因cDNA长2053 bp,其中5’非编码区序列长145 bp,3’非编码区序列长645 bp,编码区(ORF)序列长1263 bp,编码420个氨基酸的多肽序列,通过生物信息学分析得出GDF2蛋白属于膜外蛋白,蛋白预测理论等电点(p I)为5.38,分子量(Mw)为47.97 kDa,存在潜在N-糖基化位点5个,在线分析软件预测GDF2氨基酸序列N端为信号肽序列。系统进化树分析表明,大刺鳅GDF2与黄鳝GDF2聚为一支,亲缘关系最为接近。实时荧光定量PCR结果显示GDF2基因在肝组织中表达量最高,其次为心、鳃、肠、脾,在脑组织中的表达量最低。LHRH-A2、DOM、HCG三种外源激素注射后,对大刺鳅GDF2 mRNA在肝组织中表达均具有一定的促进作用。研究结果表明GDF2基因主要参与大刺鳅的肝脏组织生长发育调控,基因表达量还受不同类型催产激素的诱导的影响。 | 华宝玉 林月华 张晓婷 郭昌 傅明骏 | 2023 | 龙岩学院学报2023，41，2： | 0 |
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