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| 1 | 牛支原体P48蛋白诱导EBL细胞增殖和凋亡的研究显示文摘试验旨在研究牛支原体P48蛋白对胎牛肺(embryonic bovine lung,EBL)细胞增殖和凋亡的影响。收集不同时间段、不同浓度P48蛋白与EBL细胞共孵育的样品,通过MTT法检测细胞增殖率;DAPI染核法观察EBL细胞核形态变化;流式细胞技术检测该蛋白诱导EBL细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测凋亡标志物的mRNA相对表达变化;Western blotting方法检测Bax和Beclin-1蛋白表达水平。结果显示:当作用时间为72 h,P48蛋白浓度在10μg/mL时,对EBL细胞增殖有极显著的抑制作用(P<0.01),在0.1和0.5μg/mL时对EBL细胞的增殖的抑制作用不显著(P>0.05);经蛋白诱导12 h细胞核形态未有明显变化,24 h细胞核形态发生皱缩和凝聚,48和72 h细胞核发生碎裂;凋亡标志基因mRNA表达在2和12 h没有明显提高,在24、48、72 h有显著提高,与作用时间呈正相关,同时凋亡相关蛋白Bax和Beclin-1的表达随之显著提高。流式细胞技术结果显示P48蛋白诱导EBL细胞凋亡率为48.44%。综上表明,牛支原体P48重组蛋白能够抑制EBL细胞的增殖,促进细胞凋亡,为进一步揭示牛支原体的致病机制提供参考依据。 | 张生英 武小椿 邢小勇 刘佳 岳亚辉 张阳阳 贺健 温峰琴 包世俊 | 2020 | 中国畜牧兽医2020，47，10： | 2 |
| 2 | 预知子籽提取物对HepG2细胞自噬的影响显示文摘目的:从自噬的角度探讨预知子籽提取物(AFSE)抑制HepG2肝癌细胞增殖的分子机制。方法:(1)体外培养人肝癌HepG2细胞,分别给予不同浓度AFSE干预(0、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 mg/ml),细胞培养24、48 h后,MTT法检测细胞增殖情况。(2)将HepG2细胞分为空白对照组和AFSE组(0.625 mg/ml)。药物干预24、48 h后,PCR检测自噬相关分子Beclin-1、LC3和P62的mRNA表达;Western blot检测Beclin-1、LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、P62的蛋白表达,并计算LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ的比值;透射电镜观察细胞自噬体、自噬溶酶体等结构。结果:(1)AFSE能够有效抑制HepG2细胞的增殖,≥0.8 mg/ml AFSE作用48 h后,细胞存活率显著降低(P<0.05)。(2)0.625 mg/ml AFSE作用24 h后,P62 mRNA表达显著升高(P<0.01),且LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ、P62蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。AFSE作用48 h后,P62和LC3的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01),LC3B-Ⅱ、P62蛋白表达水平显著升高(P<0.05),LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ蛋白表达比值亦升高。电镜观察显示AFSE干预24、48 h后,细胞内自噬溶酶体明显增多,48 h亦观察到未与溶酶体融合的自噬体。结论:AFSE能够抑制HepG2细胞增殖,其作用可能与诱导细胞自噬有关。 | 范晓燕 李铭哲 刘小美 | 2021 | 上海中医药大学学报2021，35，3： | 2 |
| 3 | Beclin-1基因shRNA慢病毒载体的构建及其对B16F10细胞自噬及活力的影响显示文摘利用RNA干扰技术构建稳定沉默Beclin-l基因的B16F10小鼠黑色素瘤细胞系,分析稳转细胞系的自噬水平和活力,为探讨Beclin-1基因、自噬与肿瘤三者关系奠定基础。构建小鼠Beclin-l基因干扰载体,转染至293T细胞,获得慢病毒颗粒,将病毒颗粒感染B16F10细胞,通过加压筛选、有限稀释、细胞驯化得到稳定转染m-Beclin-1-shRNA1的B16F10细胞系。采用RT-PCR和免疫荧光技术检测对Beclin-l的干扰效果,Western blot和透射电镜分析稳转细胞系中自噬标志物LC3蛋白表达及自噬小体形成情况,CCK-8法检测稳转细胞系的活力。结果表明,成功构建了靶向抑制Beclin-l基因表达的shRNA,纯化的慢病毒滴度为1×10^(8) TU·mL^(-1),建立的细胞系中Beclin-1 mRNA和蛋白表达都受到不同程度的抑制,mRNA的沉默效率约为75%(P<0.01),发现干预Beclin-1表达能够抑制LC3-Ⅱ蛋白的表达及自噬小体的形成数量,降低B16F10细胞活力。以上结果表明,干扰Beclin-1表达能够有效降低B16F10细胞自噬活性,促进B16F10细胞死亡,这为探讨Beclin-1基因功能及自噬在抗肿瘤中的作用奠定重要基础。 | 贾艳艳 赵莹莹 余祖华 何雷 廖成水 李静 郁川 张春杰 李银聚 | 2021 | 畜牧兽医学报2021，52，9： | 1 |
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