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| 1 | 建立载脂蛋白E基因敲除小鼠骨髓髓源性生长因子缺失模型及鉴定显示文摘背景:目前关于髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,MYDGF)与动脉粥样硬化及代谢性疾病的研究较少,因此建立一种载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)敲除骨髓MYDGF缺失的小鼠模型对于研究MYDGF与动脉粥样硬化疾病的关系尤为重要。目的:建立ApoE敲除骨髓MYDGF特异性缺失小鼠模型并进行鉴定。方法:ApoE敲除小鼠和骨髓特异性MYDGF敲除小鼠,均购于上海南方模式生物科技股份有限公司。选取5只ApoE敲除小鼠与10只骨髓特异性MYDGF敲除小鼠进行交配,得到基因型为MYDGF^(flox)/+ApoE^(flox)/+F1子代小鼠30只,MYDGF^(flox)/+ApoE^(flox)/+互相进行交配,一共得到基因型为MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox双敲除小鼠30只和ApoE^(flox)/flox小鼠子代小鼠34只。采用PCR法进行MYDGF^(flox)及ApoE^(flox)基因型鉴定,记录MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox双敲除小鼠与ApoE^(flox)/flox小鼠2月龄的体长及体质量,采用Western blotting和免疫荧光检测2组小鼠骨髓组织MYDGF蛋白相对表达量,油红O染色检测2组小鼠胸主动脉斑块面积。实验方案经中国人民解放军中部战区总医院动物实验伦理委员会批准。结果与结论:①得到基因型为ApoE^(flox)/flox小鼠共34只、MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠共30只,2组小鼠体长、体质量比较差异均无显著性意义(均P>0.05);②MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠骨髓组织MYDGF蛋白相对表达量显著低于ApoE^(flox)/flox小鼠(P<0.05);③MYDGF^(flox)/floxApoE^(flox)/flox小鼠胸主动脉的斑块面积百分比显著大于ApoE^(flox)/flox小鼠(P<0.05);④结果证实成功敲除了ApoE小鼠的MYDGF基因,说明成功构建ApoE敲除骨髓特异性MYDGF缺失小鼠模型,并经基因型及蛋白组织水平鉴定;MYDGF基因缺乏可以加重ApoE基因敲除小鼠的动脉粥样硬化。 | 丁燕 向光大 孟碧莹 徐晓丽 陈月富 | 2022 | 中国组织工程研究2022，26，14： | 0 |
| 2 | 血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除鼠构建及其表型功能鉴定显示文摘背景:PDHA1基因是有氧呼吸链中不可或缺的基因,血管内皮细胞的能量代谢与很多疾病有关。构建血管内皮细胞PDHA1基因敲除鼠,有助于研究能量代谢在血管内皮细胞相关疾病中的作用。目的:繁育血管内皮细胞PDHA1基因特异性敲除小鼠并进行表型鉴定。方法:将PDHA1^((iΔEC/iΔEC))小鼠与PDHA1^((iΔEC/-))小鼠进行合笼繁育,获得更多的PDHA1^((iΔEC/iΔEC))小鼠进行后续实验。利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用RT-PCR和Western blot检测敲除PDHA1后与能量代谢相关基因的mRNA及蛋白表达,利用VE-Cadherin与PDHA1双重免疫荧光判断PDHA1基因条件性敲除后PDHA1蛋白表达变化。结果与结论:利用琼脂糖凝胶电泳实验成功检测出子代小鼠基因型,包括PDHA1^((iΔEC/iΔEC))15只和PDHA1^((iΔEC/-))2只小鼠;RT-PCR和Western Blot检测发现PDHA1在转录水平和翻译水平都发生了下降,参与糖酵解途径的HK2蛋白及mRNA表达上升,参与有氧磷酸化途径方向IDH蛋白及mRNA表达下降;VE-cadherin和PDHA1双重免疫荧光共染色检测到PDHA1的表达下降。 | 郝玮 孙岳 杨安宁 刘太阳 宝瑞 刘耀阳 王秋实 王梦 畅思容 李媛媛 刘志宏 | 2022 | 中国组织工程研究2022，26，20： | 0 |
| 3 | 利用Cre-loxP系统构建AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠显示文摘目的应用Cre-loxP重组酶系统构建AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠HDAC3^(flox/flox)Sftpc-Cre(+/-)模型。方法首先将Sftpc-Cre(+/-)小鼠自交以获得更多的Sftpc-Cre(+/-)小鼠,将HDAC3^(flox/-)小鼠自交以获得HDAC3^(flox/flox)小鼠和HDAC3^(flox/-)小鼠;然后,将Sftpc-Cre(+/-)小鼠与HDAC3^(flox/flox)小鼠或HDAC3^(flox/-)小鼠杂交,得到双杂合HDAC3^(flox/-)Sftpc-Cre(+/-)小鼠;最后将HDAC3^(flox/-)Sftpc-Cre(+/-)小鼠与HDAC3^(flox/flox)小鼠或HDAC3^(flox/-)小鼠杂交,获得目的小鼠HDAC3^(flox/flox)Sftpc-Cre(+/-);对产生的子代剪取鼠尾提取基因组DNA,选取相对应的引物对目的基因进行扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳实验以鉴定基因型。选取6~8周龄的目的小鼠及对照组小鼠(HDAC3^(flox/flox))各3只,取肺组织进行免疫荧光双标实验以验证HDAC3敲除效果,取心脏、肝脏、肺、肾脏组织进行HE染色以观察两种小鼠各脏器的组织形态。结果琼脂糖凝胶电泳实验正确鉴定出了子代小鼠,筛选出了目的小鼠HDAC3^(flox/flox)Sftpc-Cre(+/-)。HDAC3在小鼠肺AT2细胞中被成功敲除。两种小鼠的心脏、肝脏、肺和肾脏组织形态无明显改变。结论本研究利用Cre-loxP技术成功构建了AT2细胞特异性敲除HDAC3基因小鼠,为后续进一步研究HDAC3基因在肺部疾病发生、发展中的作用提供了优良的工具。 | 熊锐 李国瑞 邹诗施 李宁 耿庆 | 2023 | 医学研究杂志2023，52，2： | 0 |
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