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| 1 | 重组酶聚合酶扩增技术在植物病毒检测中的应用显示文摘随着分子生物学技术的发展,多种核酸等温扩增技术逐渐被开发出来。其中,重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)作为一种快速、灵敏的检测技术具有很大的优势。目前,RPA已应用于转基因生物、各类病原物及食品安全检测等多个领域,并作为新兴技术在植物病毒检测领域中快速发展。RPA技术只需一对引物,在恒温条件下(37-42℃)只需30 min左右即可完成反应,具有较高的灵敏度与特异性。因此,该技术正迅速成为一种能够用于条件有限的实验室或现场植物病毒检测的手段。本文介绍了RPA技术的检测原理、引物设计和应用方式,综述了其在植物病毒检测中的最新研究进展及存在的问题,为RPA技术在植物病毒检测中的应用提供参考。 | 罗雪琮 安梦楠 吴元华 夏子豪 | 2022 | 生物技术通报2022，38，2： | 11 |
| 2 | 危害我国番茄的重要病毒病及防控措施显示文摘我国鲜食番茄产量稳居世界第一,而番茄病毒病是限制番茄产业发展的重要因素之一,尤其是新型流行性番茄病毒病日益增多,常造成严重危害,已经成为番茄高产稳产的一大障碍。尽管危害番茄的病毒种类比较多,但是目前对番茄产业危害潜力最大的分别来自于菜豆金黄花叶病毒属、毛形病毒属、番茄斑萎病毒属和烟草花叶病毒属。从危害我国番茄的病毒种类、危害番茄生产的4种重要病毒及番茄病毒病综合防控措施等方面进行综述,以期为番茄重要病毒病绿色防控提供参考。 | 米国全 唐艳领 牛莉莉 马凯 杨凡 史宣杰 赵秀山 王晋华 | 2021 | 中国瓜菜2021，34，10： | 8 |
| 3 | 基于PCR的植物病毒检测技术研究进展显示文摘植物病毒是引起植物重大病害的病原之一。植物病毒病危害大、防治难度高,一旦感染病毒终生携带,而早期的检测成为病毒预防及治理的先决条件。基于基因扩增技术的病毒检测方法,由于检测迅速、敏感性高、成本低等优点而被广泛应用于各种病毒的检测。本文对常用的基于PCR的病毒检测方法进行了综述,并对其优缺点进行了比较,以期为选择合适的植物病毒检测方法提供参考。 | 王森 陈东亮 黄丛林 潘晓飞 李彦慧 | 2021 | 植物检疫2021，35，3： | 5 |
| 4 | 重组酶介导的等温扩增技术及其在植物病原检测中的应用显示文摘重组酶介导的等温扩增技术(Recombinase polymerase amplification, RPA)是一种新型的恒温核酸体外扩增技术,与传统PCR和其他等温扩增技术相比较,具有对仪器依赖性低、核酸扩增效率高的优势,适合于现场快速检测,已在微生物检测领域有了较广泛的应用。本文介绍了RPA的技术原理、产物检测方法以及技术条件的摸索优化,并概述了近年来此技术在植物病原检测领域的应用情况,展望了今后RPA技术的发展方向,以期为新兴技术在植物病原检测中的进一步应用与改进研究提供参考。 | 周莹 岳瑾 李云龙 刘梅 乔广行 | 2020 | 中国植保导刊2020，40，6： | 4 |
| 5 | 添加扩增内标的逆转录重组酶聚合酶扩增技术检测三种大豆病毒显示文摘假阴性结果是影响核酸检测结果的主要因素之一。扩增内标(internal amplification control,IAC)在监控PCR过程中假阴性结果发挥着重要作用。为探索扩增内标在逆转录重组酶聚合酶常温扩增(reverse transcription-recombinase polymerase amplification,RT-RPA)检测过程中的应用,解决RT-RPA检测过程中的假阴性问题,本研究通过复合引物法人工构建了扩增内标,并应用于大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)、菜豆荚斑驳病毒(Bean pod mottle virus,BPMV)及南方菜豆花叶病毒(Southern bean mo⁃saic virus,SBMV)三种大豆病毒RT-RPA检测过程。实验结果显示,所建立的方法能够实现目的基因特异性扩增的同时指示假阴性结果。灵敏度试验结果表明,当50μL反应体系中扩增内标添加量为1.83×104 copies时,该体系对SMV及BPMV的检测灵敏度为0.05 ng;扩增内标添加量为1.83×103 copies时,该体系对SBMV的检测灵敏度为0.05 ng。利用该方法对10批实际大豆(Glycine max)样品进行检测,与对应反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)结果一致,表明其具有良好的适用性。研究结果表明本方法可有效指示3种病毒RT-RPA检测过程中的假阴性,提高检测结果的可信度,为相关产品的监管提供技术支持和参考依据。 | 袁俊杰 龙阳 渭婷玉 刘二龙 冯黎霞 刘思思 陈文 魏霜 | 2020 | 农业生物技术学报2020，28，12： | 4 |
| 6 | 我国6个省份番茄褪绿病毒和番茄黄化曲叶病毒复合侵染率及序列系统发育分析显示文摘于2017~2019年在我国6个省份的番茄主产区,采集疑似番茄褪绿病毒(tomato chlorosis virus,ToCV)和(或)番茄黄化曲叶病毒(tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)侵染的番茄样本,利用特异性引物进行RT-PCR或PCR扩增,将符合预期条带大小的PCR产物测序后进行系统发育分析。结果表明,我国6个省份番茄ToCV和TYLCV的复合侵染率为25.29%,其中山东省两种病毒复合侵染率最高,为46.43%。序列分析结果表明,测定的ToCV CP基因序列与已报道的对应序列同源性在98.30%以上,ToCV CP基因序列没有发生明显的遗传分化;TYLCV基因组部分序列与已报道的对应序列同源性在96.00%以上,没有发生明显的遗传分化。 | 胡荣 冯丽肖 张宇 张松柏 张德咏 刘勇 | 2020 | 中国蔬菜2020，，9： | 3 |
| 7 | 木尔坦棉花曲叶病毒RPA快速检测方法的建立显示文摘木尔坦棉花曲叶病毒Cotton leaf curl Multan virus(CLCuMuV)引起的病害是世界棉花生产上的毁灭性灾害,也是我国进境植物检疫性有害生物之一。因此,建立快速检测技术对CLCuMuV的检疫和防控具有重要意义。本研究根据CLCuMuV外壳蛋白(CP)基因序列设计引物,建立了该病毒的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法,并评价了该方法的灵敏度和特异性,进一步测定了对田间疑似病样的检测准确性。结果表明,建立的RPA检测方法仅能从感染CLCuMuV的样品中扩增出目的条带,而感染同属的其他5种病毒的样品中未扩增出目的条带。该方法检测灵敏度是常规PCR的10倍,且对田间疑似病样的检出结果与PCR试验结果一致。因此,本研究所建立的CLCuMuV RPA快速检测方法具有特异、灵敏、准确、操作简便、无需特殊设备等优点,这些为CLCuMuV的快速检测提供了一种新技术。 | 汤亚飞 李正刚 佘小漫 于琳 蓝国兵 何自福 | 2022 | 植物保护2022，48，1： | 0 |
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