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| 1 | 常氏肝癌细胞cDNA文库的构建及质量分析(英文)显示文摘目的 利用 RNA转录 5′末端转换机制 (SMART)构建适合免疫筛选的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞 c DNA文库。方法 通过反转录 PCR和长距离 PCR获得常氏肝癌细胞的全长 c DNA,然后利用 SMART c DNA文库构建试剂盒建立经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞c DNA文库。结果 通过测定 ,高质量的包含常氏肝癌细胞全长 c DNA的 c DNA文库得到建立 ,扩增 c DNA文库的滴度高达 4.5× 10 10 pfu· ml- 1,重组子内平均插入外源基因片段长度在 2 0 0 bp到 40 0 0 bp之间 ,约 150 0 bp左右 ,并且此文库适合免疫筛选。结论 结果显示所构建的经去分化培养基处理的常氏肝癌细胞 c DNA文库具有很高的质量 ,为进一步研究常氏肝癌细胞和筛选相关基因获得 c | 林俊堂 王聪睿 张会勇 李玉昌 徐存拴 | 2004 | 新乡医学院学报2004,21,1: | 3 |
| 2 | 簇毛麦端体6VS的显微切割及其专化DNA序列的克隆和分析(英文)显示文摘从簇毛麦 (Haynaldiavillosa (L .)Schur.)组合CA92 11/RW15 (6D/ 6V异代换系 )幼胚培养SC2 后代中 ,用原位杂交方法鉴定出T2 40_6为 6VS端体异代换系。以此为材料 ,采用微细玻璃针切割法及“单管反应”技术体系 ,对 6VS进行切割分离及LA (Linkeradaptor)_PCR扩增。扩增带在 10 0~ 30 0 0bp之间 ,大部分集中在 6 0 0~ 15 0 0bp。利用3 2P标记的簇毛麦基因组为探针进行Southern杂交 ,证实扩增产物来源于簇毛麦。扩增产物纯化后 ,连接到pGEM_T载体上 ,构建了 6VSDNA质粒文库。对文库的分析表明 ,文库大约有 170 0 0个白色克隆 ;插入片段分布在 10 0~15 0 0bp ,平均 6 0 0bp。点杂交结果表明 ,37%克隆有中度到强烈的杂交信号 ,证明含有中度或高度重复序列 ;6 3%克隆有较弱的信号或没有信号 ,证明为单 /低拷贝序列克隆。从文库中获得 8个簇毛麦特异克隆 ,对其中两个克隆pHVMK2 2和pHVMK134进行了RFLP分析和序列分析 ,并利用该探针对小麦抗白粉病基因Pm2 1进行了检测。RFLP结果表明 ,两个克隆一个为低拷贝序列克隆 (pHVMK2 2 ) ,另一个为高度重复序列克隆 ,均为簇毛麦专化DNA序列。以pHVMK2 2为探针对抗、感病小麦 (TriticumaestivumL .)品系的Southern杂交发现抗病品系有一条 2kb的特征带 ,该探针可能作? | 孔凡晶 陈孝 马有志 辛志勇 李连成 张增艳 林志姗 | 2002 | Acta Botanica Sinica2002,44,3: | 3 |
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