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| 1 | 高粱品种BTx623原生质体分离及瞬时表达体系的建立显示文摘高粱(Sorghum bicolor)是世界上仅次于小麦、水稻、玉米和大麦的重要粮食作物之一,虽然高粱基因组已经完成了测序,但是针对高粱测序品种BTx623,遗传转化方法的缺乏限制了高粱遗传育种和功能基因组研究的发展。而原生质体瞬时表达技术,则因为其高效、快速的特性,在功能基因组研究中具有重要的作用。为了在高粱品种BTx623中建立原生质体瞬时表达体系,本研究以BTx623幼苗为材料,对原生质体分离过程中的渗透压、酶液成分、酶解时间进行研究。结果表明:BTx623幼苗的原生质体分离过程中,最佳酶解液组成为1%纤维素酶、0.25%离析酶、0.6 mol/L甘露醇、10 mmol/L吗啉乙烷磺酸、1 mmol/L CaCl2、0.1%小牛血清蛋白和5 mmol/Lβ⁃巯基乙醇,并获得了每毫升1×10^(7)个的高质量原生质体,所获原生质体活性在90%以上。之后利用PEG介导的转化方法,将含有35S::egfp的质粒导入到原生质体中,并通过荧光显微观察统计,遗传转化率达到(61.31±3.91)%。本研究通过优化高粱品种BTx623原生质体制备及瞬时转化的条件,成功建立了其原生质体瞬时表达体系,为进一步开展高粱品种BTx623功能基因组的研究奠定了基础。 | 曾弓剑 程云伟 韩少鹏 吕阳 陆业磊 周超 张德春 沈祥陵 | 2021 | 生物资源2021，43，1： | 4 |
| 2 | 匍匐翦股颖叶肉细胞原生质体瞬时表达体系的建立显示文摘为了建立稳定、高效的匍匐翦股颖(Agrostis stolonifera L.)叶肉细胞原生质体瞬时表达体系,本研究以匍匐翦股颖‘Penn-A4’的叶片为材料,分析不同因素对其叶肉细胞原生质体分离的影响,确定其原生质体分离的最佳条件。结果表明:苗龄为4周的翦股颖无菌苗叶片在甘露醇为0.6 mol·L^(-1)的酶解液中,28℃酶解4 h后,可分离得到较高活力原生质体、提取量约为6.75×106个·g^(-1);为进一步检测该原生质体是否可有效的应用在蛋白功能研究中,构建了热激蛋白基因AsHSP26.8-GFP重组质粒,并在聚乙二醇(PEG-4000)介导下将其导入叶肉细胞原生质体中进行了亚细胞定位;通过激光共聚焦显微镜观察到AsHSP26.8定位于叶绿体。综上所述,本研究建立了一套较为完整的匍匐翦股颖叶肉细胞原生质体分离与瞬时表达体系,为探究匍匐翦股颖的功能基因组学研究奠定了基础。 | 李鑫 高佩然 边秀举 王丽宏 李会彬 刘畅 董康挺 孙鑫博 | 2021 | 草地学报2021，29，9： | 2 |
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