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| 1 | 猪流行性腹泻病毒检测方法的研究进展显示文摘猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种高度接触性传染病。该疫病的爆发流行,给养猪业造成巨大的经济损失。因此,灵敏、快速检测诊断PEDV感染是实施病毒防控措施的关键环节。本文对于近年来检测PEDV的实验室方法进行了总结,包括病毒分离培养鉴定、病毒电镜形态检查、血清中和试验(SNT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学(IHC)、间接免疫荧光试验(IFA)、免疫层析法(IC)、核酸原位杂交技术(ISH)、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)、逆转录-环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP)、纳米颗粒辅助聚合酶链式反应(nanoPCR)等,并分别介绍了不同检测方法在应用中的优缺点,为有效诊断及防治猪流行性腹泻病毒感染提供技术指导。 | 李亚兰 袁晓民 湛洋 杨凌宸 胡意 谭磊 刘谭彬 郭时印 王爱兵 | 2019 | 中国兽医科学2019，49，3： | 14 |
| 2 | 猪流行性腹泻病毒S蛋白不同表位基因的原核表达及免疫原性分析显示文摘纤突蛋白S是猪流行性腹泻病毒(PEDV)表面的重要糖蛋白,S蛋白的S1和S2两个亚基能刺激宿主细胞产生中和抗体,对预防和控制PEDV的感染具有重要意义。本研究根据PEDV基因组S蛋白序列,分别构建pET32a-S1、pET32a-S2及S1和S2的串联重组质粒pET32a-2S,将3个重组质粒分别转染至BL21感受态细胞中进行蛋白表达,经Western blot鉴定,这3种蛋白能够成功表达。将3种蛋白纯化后,分别免疫小鼠制备多克隆抗体,同时应用ELISA方法进行免疫原性分析。结果表明,S1、S2及2S蛋白均具有一定的免疫原性,2S蛋白产生的抗体效价明显高于S1、S2,表明2S蛋白的免疫原性较好。猪流行性腹泻病毒S蛋白的成功表达及免疫原性分析,为PEDV亚单位疫苗的研究奠定了基础。 | 朱利塞 贾爱卿 王贵平 李菲 王娟 邓胜朝 钱雪桥 | 2020 | 中国动物传染病学报2020，28，6： | 7 |
| 3 | 猪流行性腹泻病毒全病毒灭活疫苗量效关系研究显示文摘本研究旨在探索猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)灭活疫苗不同抗原含量对仔猪感染的保护作用。测定不同浓缩倍数PEDV感染性病毒粒子数和病毒粒子总数,用不同浓缩倍数抗原分别制备灭活疫苗免疫小鼠,利用ELISA抗体检测方法、中和试验、ELISPOT方法测定体液免疫与细胞免疫产生情况,筛选合适抗原含量疫苗进行仔猪免疫并测定抗体,利用攻毒试验研究浓缩疫苗与保护之间的关系。结果显示,当抗原含量达8×10^(6) pfu·mL^(-1)以上时,灭活疫苗能有效刺激小鼠产生体液免疫及细胞免疫。以2 mL含8×10^(6) pfu·mL^(-1)抗原的灭活PEDV疫苗免疫仔猪可抵抗PEDV攻毒引起的腹泻及连续排毒,相较于总病毒粒子数,感染性病毒粒子数与抗体产生呈显著相关(r=0.9981),中和效价与仔猪保护呈显著相关性(|r|=0.9747)。PEDV灭活疫苗可以提供良好的免疫保护,其中感染性病毒数量是提升抗体水平的关键因子,抗体滴度作为一项体液免疫的指标是判断免疫保护的重要参考。 | 郝建伟 薛春宜 曹永长 | 2022 | 畜牧兽医学报2022，53，5： | 2 |
| 4 | Inactivated Pseudomonas PE(△Ⅲ)exotoxin fused to neutralizing epitopes of PEDV S proteins produces a specific immune response in mice显示文摘Porcine epidemic diarrhea(PED)caused by the porcine epidemic diarrhea virus(PEDV),is a severe infectious and devastating swine disease that leads to serious economic losses in the swine industry worldwide.An increased number of PED cases caused by variant PEDV have been reported in many countries since 2010.S protein is the main immunogenic protein containing some B-cell epitopes that can induce neutralizing antibodies of PEDV.In this study,the construction,expression and purification of Pseudomonas aeruginosa exotoxin A(PE)without domain Ⅲ(PE△Ⅲ)as a vector was performed for the delivery of PEDV S-A or S-B.PE(△Ⅲ)PEDV S-A and PE(△Ⅲ)PEDV S-B recombinant proteins were confirmed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and Western blot analysis.The immunogenicity of PEDV S-A and PEDV S-B subunit vaccines were evaluated in mice.The results showed that PEDV-S-B vaccine could not only induce specific humoral and Th1 type-dominant cellular immune responses,but also stimulate PEDV-specific mucosal immune responses in mice.PEDV-S-B subunit vaccine is a novel candidate mucosal vaccine against PEDV infection. | Leqiang Sun Yajie Tang Keji Yan Huanchun Chen Huawei Zhang | 2021 | Animal Diseases2021，1，3： | 1 |
| 5 | 应用杆状病毒表达系统有效表达PEDV纤突蛋白显示文摘为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒。采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(Western blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平。结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOFTOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.008 6μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异。替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生。 | 郝建伟 薛春宜 曹永长 | 2022 | 山西农业科学2022，50，5： | 1 |
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