| 1 | 癌相关成纤维细胞来源的外泌体在促骨肉瘤侵袭转移中作用的实验研究显示文摘目的探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体对骨肉瘤侵袭及转移的影响。方法利用人源骨肉瘤细胞株Saos-2采用差速贴壁法分离、培养CAFs,显微镜下观察CAFs的形态,免疫组织化学观察α-SMA蛋白表达对CAFs进行鉴定。培养CAFs,采用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒分离外泌体。通过透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体特异性标记蛋白β-actin、CD63表达情况对外泌体进行鉴定。培养人源骨肉瘤细胞株Saos-2,分为外泌体组和对照组,采用细胞划痕及Transwell小室实验观察外泌体对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响。选取一级5周龄BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按编号随机分为外泌体组和对照组,每组6只。两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右侧背部皮下接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,建立裸鼠骨肉瘤肿瘤模型。造模结束后即刻进行尾静脉注射:外泌体组每只裸鼠通过尾静脉注射浓度为0.1μg/μL的外泌体悬液30μL,对照组裸鼠尾静脉注射等量生理盐水,两组均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日观察裸鼠成瘤情况,从裸鼠右侧背部皮下可触及肿块开始,测量两组裸鼠肿块的最长径和最长径的最大垂直短径,计算肿瘤体积,此后每周测量1次,共测量6次。完成最后一次测量后腹腔麻醉断椎法处死裸鼠,完整取出肿块并称重。取裸鼠肺组织进行切片HE染色观察两组裸鼠肺转移情况。结果显微镜下观察CAFs呈长梭形,排列杂乱,无方向性;细胞免疫组织化学染色结果显示:CAFs的α-SMA蛋白表达阳性,提示CAFs提取成功。电镜观察外泌体呈70~100 nm圆形或椭圆形膜性囊泡状结构;Western blot结果显示外泌体中CD63蛋白呈高表达,β-actin蛋白表达较弱,提示成功分离CAFs来源外泌体。细胞划痕实验、侵袭实验结果显示:外泌体组细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数目分别为(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%、(53.67±5.69)个,均高于对照组的(0.81±0.11)mm、0.32%±0.11%、(31.67±8.08)个,差异均有统计学意义(t=6.209、6.209、3.856,P值均<0.01)。外泌体组和对照组12只裸鼠采用皮下移植成瘤法接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,均造模成功,实验过程中无一例动物死亡。两组裸鼠均于第1次注射肿瘤细胞后1周触及肿块,肿瘤体积均随着时间的延长明显增大,差异均有统计学意义(F=49.428、8.477,P值均<0.05)。两组间比较,第1、2次测量肿瘤体积,差异均无统计学意义(P值均>0.05);而第3~6次测量肿瘤体积,外泌体组均大于对照组,差异均有统计学意义(t=4.697、4.825、3.516、2.706,P值均<0.05)。测量6次后处死裸鼠,剥除肿瘤,外泌体组肿瘤质量(1.62±0.29)g大于对照组(1.00±0.43)g,差异有统计学意义(t=2.929,P<0.05)。肺组织切片HE染色结果显示,两组裸鼠均发生肺转移,外泌体组肺组织转移灶数量为6.63(3,17)个,多于对照组的1.17(0,3)个,差异有统计学意义(W=36.000,P<0.01)。结论CAFs来源的外泌体可增加骨肉瘤细胞株Saos-2的迁移及侵袭能力,同时促进骨肉瘤的生长和肺转移的形成。 | 陈成龙 孙雪娇 李志慧 孙晓娟 韩鹏飞 张龙 吕智 | 2019 | 中华解剖与临床杂志2019，24，4： | 1 |
| 2 | 毛囊培养液促进毛乳头再生——毛乳头体内再生诱导模型的建立与应用显示文摘目的建立毛乳头体内再生诱导模型,利用大鼠触须毛囊培养液作为促进毛乳头再生的诱导信号来源,观察毛囊培养液对毛乳头再生率的影响以及再生过程毛囊干细胞的迁移模式。方法分离大鼠触须毛囊,切除毛球部并拔除毛干后,将毛囊上段用毛囊移植笔种植至裸鼠皮下,注射毛囊培养液,定期观察毛球部再生情况。免疫荧光染色观察无干预情况下毛球部再生过程Wnt信号通路关键因子β-catenin、毛囊干细胞标记物K15和K17、毛乳头细胞标记物α-SMA的表达。结果移植术后第29天,实验组裸鼠的移植部位长出触须样的毛发,毛囊上段向下生长形成完整的毛球部并可见毛干生长,毛乳头再生率为88%;对照组未见毛发长出,毛乳头再生率为75%。再生过程中,β-catenin全程持续表达,毛囊干细胞标记物在新生毛母质区呈强阳性表达,毛乳头细胞标记物呈先散在、后聚集的表达模式。结论本研究成功建立了单个大鼠触须毛囊上段裸鼠移植诱导毛乳头再生的模型,可以作为研究毛乳头体内再生的良好平台;使用毛囊培养液在移植部位皮内注射可促进毛乳头再生。毛球部再生过程中Wnt信号通路被激活,毛囊干细胞向下生长形成新生毛母质区域。 | 蔡博治 倪娜 袁燕平 陈先才 傅从从 陈乐 黄铿 林常敏 | 2020 | 中国组织化学与细胞化学杂志2020，29，4： | 0 |
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