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| 1 | 经典饲养层细胞Wnt表达的差异及其对人胚胎干细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响显示文摘目的:研究比较三种经典饲养层体系使用的成纤维细胞中Wnt基因的表达,及其对共培养的人胚胎干细胞的影响。方法:PCR验证19种Wnt基因在三种不同来源饲养层细胞中的表达情况,q PCR验证各组共培养人胚胎干细胞的Wnt/β-Catenin信号通路相关基因表达水平,流式检测其在不同密度饲养层条件下的增殖分化情况。结果:在全部19种Wnt基因(Wnt1,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16)的表达检测中,昆明白小鼠来源饲养层细胞表达其中的16种,ICR小鼠来源饲养层细胞表达其中的10种,人成纤维细胞来源饲养层细胞表达其中的10种;增加饲养层细胞密度能够不同程度活化Wnt/β-Catenin信号通路下游基因的表达,并激活人胚胎干细胞中的负反馈机制;高密度小鼠饲养层条件促进人胚胎干细胞的分化,高密度人饲养层条件促进人胚胎干细胞的增殖和分化。结论:不同经典饲养层体系提供的Wnt环境不同,其培养的人胚胎干细胞状态也有差异。 | 邓磊玉 林戈 卢光琇 | 2016 | 激光生物学报2016，25，5： | 1 |
| 2 | 两种体系下诱导多潜能干细胞定向分化为运动神经元前体细胞的差异显示文摘目的将人诱导多潜能干细胞(i PSCs)定向分化为脊髓运动神经元前体细胞(MNP),并比较在有无饲养层两种体系下的分化效率。方法分别在鼠胚胎成纤维细胞饲养层和无饲养层体系中培养人i PSCs。诱导6 d获得神经上皮前体细胞(NEP),诱导12 d获得MNP细胞。倒置显微镜下观察细胞形态变化,免疫荧光染色鉴定i PSCs、NEP、MNP标记物,实时定量聚合酶链反应检测NEP相关基因SOX1、HOXA3,MNP相关基因OLIG2、PAX6,及多能性基因SOX2、OCT4的转录水平。结果两种体系中i PSCs均表达多能性标记物,NEP及MNP均高表达神经相关标记物,低表达多能性标记物,有饲养层体系中NEP细胞SOX1、HOXA3,MNP细胞OLIG2、OCT4基因表达明显高于无饲养层,PAX6和SOX2表达无显著性差异。结论 i PSCs在两种培养体系均可有效分化为MNP细胞,在有饲养层体系中分化效率较高。 | 李哲 方明珠 陈红 郭钢花 范家宏 毛志娟 | 2018 | 中国康复理论与实践2018，24，3： | 1 |
| 3 | 大鼠星形胶质细胞无血清培养方法的研究显示文摘目的 探索应用无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代培养及传代培养的方法.方法 取出生24 h内Wistar大鼠大脑皮质组织,机械吹打分散为单细胞后在无血清培养基中进行原代培养.细胞传代时分别使用乙二胺四乙酸(EDTA)-胰酶或胰酶作为消化液,浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)终止消化作用,按照1∶2或1∶3的比例传代.显微镜下观察细胞生长状态,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)细胞免疫荧光染色方法鉴定细胞表型,MTF法检测传代细胞增殖情况.结果 细胞悬液静置15 min后更换新的无血清培养基培养,7d后显微镜下可见细胞生长良好,折光性强,胞体小而突起长;细胞免疫荧光染色鉴定显示>95%的细胞为GFAP阳性细胞.与应用SBTI终止胰酶反应时未进行离心比较,低温、低速离心(4℃、3 000 ×g)3 min后,传代细胞可在无血清培养基中生长正常并增殖.MTT检测结果显示,EDTA-胰酶消化效果优于胰酶(A值分别为0.290±0.007、0.270±0.006,P<0.010);使用浓度为0.2 mg/ml或1 mg/ml的SBTI终止消化(A值分别为0.290 ±0.013、0.290±0.017,P=0.820)及以1∶2或1∶3比例传代(A值分别为0.340±0.070、0.320 ±0.030,P =0.770),传代星形胶质细胞数量的差异均无统计学意义.结论 本研究建立无血清培养基进行大鼠星形胶质细胞原代及传代培养的方法,为避免血清干扰更好地开展体外星形胶质细胞功能的研究提供了新的细胞模型. | 徐立新 贾梅 师忠芳 董丽萍 闫旭 王玉娇 陈烨 袁芳 | 2018 | 中华神经外科杂志2018，34，6： | 1 |
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