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| 1 | 细胞色素P450 2C9*8与CYP2C9*27慢病毒表达载体的构建及在HEK239T细胞中的稳定表达显示文摘目的构建人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)及突变体CYP2C9*8与CYP2C9*27的慢病毒表达质粒,并于HEK293T细胞中稳定表达。方法反转录人肝总RNA获得c DNA,PCR扩增获得CYP2C9编码序列,并克隆至载体MigR1上,获得慢病毒表达重组质粒MigR1-CYP2C9。以该质粒为模板,重叠PCR方法分别引入449G>A与449G>T点突变,并分别克隆至MigR1,获得MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9*27慢病毒表达质粒。在HEK 293T细胞中进行病毒包装,并采用获得的慢病毒感染HEK293细胞,经流式分选和单克隆挑取获得稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9*27的细胞,命名为293T-2C9、293T-2C9*8与293T-2C9*27。实时定量PCR(qRT-PCR)与Western blot检测胞内CYP2C9表达。采用CYP2C9的特异性底物双氯芬酸对CYP2C9的活性进行评价。结果成功构建MigR1-CYP2C9、MigR1-CYP2C9*8与MigR1-CYP2C9*27表达载体。采用构建病毒感染获得的单克隆细胞293T-2C9、293T-2C9*8与293T-2C9*27在30代后荧光显微镜下观察可见绿色荧光表达率在100%,qRT-PCR与Western blot均表明有目标分子表达。提取自这三株细胞的微粒体均可催化双氯芬酸代谢为4-羟基双氯芬酸。结论成功构建稳定表达CYP2C9、CYP2C9*8与CYP2C9*27人源化细胞模型,该方法构建的细胞可用于CYP2C9*8与*27两个突变体的功能研究。 | 廖凯 刘勇 万子衿 李巍 | 2018 | 实用临床医药杂志2018，22，7： | 1 |
| 2 | 八宝丹治疗肝脏疾病的临床与基础研究显示文摘厦门中药厂生产的八宝丹胶囊起源于明代,目前公开的组方成分中以牛黄为君,以蛇胆、羚羊角为臣,以珍珠、三七为佐,以人工麝香为使[1]。临床上主要应用于肿瘤、肝胆疾病、炎症疾病、免疫系统疾病等方面[2]。近年来,八宝丹在肝病领域的临床及基础研究较热。其治疗肝病的主要功效是清利湿热、活血解毒、祛黄止痛。其组成药物多入心肝两经。君药牛黄清热解毒、保肝利胆,可显著降低肝炎患者的谷丙转氨酶;臣药蛇胆及羚羊角清热解毒,可起到抗病毒、免疫调节、增强免疫之效;佐药珍珠及三七散瘀止血定痛,具有免疫促进、抗肿瘤、促进胆红素代谢、抗肝纤维化等作用;使药人工麝香通经活血,具有抗炎、提高肝酶活性、改善肝脏微循环之效[2]。鉴于八宝丹胶囊在肝病的临床及基础研究成果,现综述如下。 | 胡玮晔 高司成 朱小涵 祝峻峰 | 2023 | 中西医结合肝病杂志2023，33，3： | 0 |
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