| 1 | miR-30a在同型半胱氨酸致足细胞凋亡中的作用显示文摘目的探讨miR-30a在同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)诱导足细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分为Control组(0μmol/L Hcy)与Hcy组(80μmol/L Hcy),干预细胞48 h后,流式细胞术检测足细胞凋亡水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-30a的表达水平;巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)检测miR-30a启动子区DNA甲基化水平;透射电镜观察感染miR-30a前体(miR-30a mimic)和抑制物(miR-30a inhibitor)后足细胞凋亡及超微结构的变化。结果与Control组相比,Hcy组足细胞凋亡水平增加(P<0.05),而miR-30a表达水平降低(P<0.01);同时,miR-30a启动子区DNA甲基化程度升高(P<0.05);感染miR-30a mimic后,足细胞损伤明显减轻,凋亡形态的细胞数量减少,而感染miR-30a inhibitor后足细胞损伤程度加剧,凋亡形态的细胞数量增加。结论 miR-30a可抑制足细胞凋亡,其机制可能是miR-30a启动子区DNA低甲基化发挥重要作用。 | 丁宁 郭凤英 谢琳 曹军 王青青 张玲 马胜超 卢冠军 张鸣号 姜怡邓 杨晓玲 | 2019 | 广东医学2019，40，6： | 5 |
| 2 | miR-30a-5p对CD133^+ Huh7人肝癌干细胞侵袭和迁移能力的影响显示文摘目的本研究采用磁珠法对肝癌干细胞进行分选,进而使用mi R-30a-5p模拟物和抑制物进行基因治疗,观察其对肝癌干细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其可能的分子生物学机制。方法采用免疫磁珠分选法分选CD133+Huh7肝癌干细胞,流式细胞术检测分选后CD133+细胞比例,分别采用mi R-30a-5p模拟物或抑制物转染肝癌干细胞设为模拟物转染组(30a M组)和抑制物转染组(30a I组),并设立空白对照组(NC组)。采用RT-PCR法检测细胞mi R-30a表达水平,Transwell法测细胞侵袭和迁移能力,western blot法检测功能蛋白表达量,荧光素酶报告基因实验测定Wnt/β-catenin信号通路荧光素酶活性,每组实验重复3次。肝癌干细胞分选效率、mi R-30a-5p表达水平实验数据的比较采用单因素方差分析和t检验。结果磁珠分选后的Huh7细胞中CD133阳性率为(84.6±0.56)﹪,明显高于未进行分选的Huh7肝癌细胞的CD133阳性率(1.38±0.12)﹪,差异具有统计学意义(t=-16.41,P=0.01)。30a M组CD133+Huh7肝癌干细胞中的相对表达水平(6.23±0.12)较NC组的(1.00±0.04)明显上调;mi R-30a-5p抑制物转染组(30a I组)的相对表达水平(0.07±0.01)较NC组明显下调,差异均具有统计学意义(t=15.98,-7.76,P=0.00,0.00)。Transwell侵袭实验显示,NC组、30a M组和30a I组的CD133+Huh7肝癌干细胞的穿膜细胞数量分别为(28.33±2.10)个/孔、(12.52±1.03)个/孔和(72.09±7.11)个/孔,差异具有统计学意义(t=15.00,-23.01,P=0.01,0.00)。Transwell迁移实验结果显示,NC组、30a M组和30a I组的CD133+Huh7肝癌干细胞的穿膜细胞数量分别为(21.76±1.21)个/孔、(8.74±1.96)个/孔和(145.51±11.23)个/孔,差异具有统计学意义(t=8.09,-33.10,P=0.02,0.00)。Western blot实验结果显示,30a M组的兔抗人波形蛋白(Vimentin)、wnt1、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP3蛋白的表达量较NC组低,上皮-钙粘素(E-cadherin)蛋白的表达量较NC组高,神经-钙粘素(N-cadherin)、锌指转录因子(Snail)、MMP9蛋白的表达量没有明显差异;30a I组的Vimentin、wnt1、MMP2、MMP3蛋白的表达量较NC组高,E-cadherin蛋白的表达量较NC组低,N-cadherin、Snail、MMP9蛋白的表达量没有明显差异。荧光素酶报告基因实验结果显示,30a M组Wnt/β-catenin信号通路的转录活性(3.23±0.51)明显低于NC组的(16.45±1.22)(t=-16.33,P=0.01)。30a I组Wnt/β-catenin信号通路的转录活性(27.16±0.96)与NC组相比,差异具有统计学意义(t=20.94,P=0.00)。30a M组Vimentin的转录活性(4.98±0.33)明显低于NC组的(7.80±0.64)(t=-13.01,P=0.02)。30a I组Vimentin的转录活性(9.31±1.50)与NC组相比,差异具有统计学意义(t=12.39,P=0.02)。结论 mi R-30a-5p对CD133+Huh7肝癌干细胞的侵袭和迁移具有明显的抑制效果,有望通过对肝癌干细胞的治疗提高肝癌基因治疗的效果。 | 刁竞芳 莫嘉强 赵祥 华赟鹏 郭宇 何军明 | 2016 | 中华细胞与干细胞杂志(电子版)2016，6，3： | 2 |
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