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1单纯疱疹病毒1型US11蛋白结合DNA甲基转移酶的作用研究3A显示文摘目的通过免疫共沉淀联合质谱分析筛查与单纯疱疹病毒1型(HSV-1)中US11蛋白存在潜在相互作用的宿主蛋白。方法使用荧光标记的HSV-1病毒感染人成纤维细胞(HFF),通过免疫共沉淀(IP)方法对US11及其相互作用蛋白进行提取和纯化,并与质谱(MS)联用来鉴定相关蛋白。结果利用IP-MS分析技术成功筛选出7个与US11存在潜在相互作用宿主蛋白,其中DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)被定性为一种新的US11结合蛋白。结论 HSV-1病毒US11蛋白与哺乳动物DNA甲基转移酶机制的功能关联,DNMT3A是HSV-1感染所需的有效宿主因子。钟霞 潘建华 童坚 2019实用医学杂志2019,35,1:2
2HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表达分析显示文摘目的:原核表达并纯化单纯疱疹病毒1型(HSV-1)UL7蛋白,免疫小鼠制备多克隆抗体,初步分析UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的表达特点。方法 PCR方法扩增UL7基因,构建原核表达质粒pGEX-5X-1-UL7,转化到E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得并纯化GST-UL7重组蛋白,将其作为抗原免疫ICR小鼠制备抗UL7多克隆抗体。间接法ELISA检测抗体效价,Western blot检测抗体的特异性,使用该多克隆抗体对HSV-1病毒感染Vero细胞后不同时间点的UL7蛋白表达量进行检测。结果 GST-UL7重组蛋白在E. coli BL21( DE3)中高效表达,间接法ELISA检测抗UL7抗体效价可达1∶105以上。 Western blot试验证明抗UL7多克隆抗体可以特异性识别UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero细胞后的不同时间点均检测到了UL7蛋白的表达。结论成功获得GST-UL7融合蛋白,且制备了抗UL7蛋白的多克隆抗体,利用该抗体初步确定了UL7蛋白在HSV-1增殖过程中的不同时间点均有表达。周洁楠 徐兴丽 高有 张莹 王晶晶 刘龙丁 李琦涵 2016中华微生物学和免疫学杂志2016,36,4:1
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