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| 1 | 藏猪β-防御素2基因克隆及原核表达载体的构建显示文摘为了构建藏猪β-防御素2(pBD-2)成熟肽原核表达载体,从藏猪肝组织中提取总RNA,通过RT-PCR获取pBD-2目的基因,并与pMD19-T载体连接构建重组质粒,命名为pMD19T-pBD-2;以pMD19T-pBD-2质粒为模板,克隆pBD-2成熟肽c DNA序列并构建成熟肽p ET-32a-pBD-2表达质粒。结果显示,藏猪pBD-2基因全长为298bp,与野猪和家猪的pBD-2基因同源性分别达100.0%和98.9%;藏猪pBD-2基因具有1个完整的开放阅读框,编码69个氨基酸组成的多肽,包含21个氨基酸残基的信号肽、11个氨基酸残基的前导肽和37个氨基酸残基的成熟肽;编码的pBD-2成熟肽稳定性较好,分子量4 085.78,等电点8.89,具有6个半胱氨酸(Cys)残基,7个带正电荷和2个带负电荷的氨基酸残基,为亲脂性和亲水性多肽;从pMD19T-pBD-2质粒中亚克隆得到长度为114 bp藏猪pBD-2成熟肽c DNA序列,菌落PCR、酶切和测序鉴定证明成功构建了成熟肽pET-32a-pBD-2原核表达质粒。 | 谷笑笑 王振华 潘康成 张立平 周尧 | 2017 | 江苏农业学报2017，33，4： | 2 |
| 2 | 鸡β防御素13基因的克隆、表达及其对猪源致病菌的抑制作用研究显示文摘为了探究鸡β防御素13(Gal-13)基因的克隆表达及对常见猪源致病菌的抑制活性,试验采用原核表达的方法,利用RT-PCR法,使用试剂盒从鸡肝脏组织中进行Gal-13基因的克隆,利用原核表达载体pGEX-4T-1构建重组表达质粒,再将重组质粒转化大肠杆菌TOP10诱导表达获得目的蛋白,并对诱导条件进行优化,然后采用牛津杯法对目的蛋白进行体外抑菌试验,检测目的蛋白对猪源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌及链球菌的抑制活性。结果表明:克隆表达得到Gal-13基因,构建得到pGEX-4T-1-Gal-13表达质粒,转化大肠杆菌TOP10诱导表达,目的蛋白以包涵体形式存在,最佳诱导表达温度为37℃,最佳诱导表达时间为5 h,IPTG最佳诱导浓度为0.3 mmol/L,该蛋白对猪源大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌及链球菌均有一定抑制作用,平均抑菌圈直径分别为1.25,1.09,1.03,1.45 cm。说明Gal-13能够利用原核表达系统在大肠杆菌TOP10中诱导表达,且对4种猪源致病菌有一定的抑制作用。 | 赵洪 向乾春 彭中美 鄢宴 补小枘 高云洁 王逢秋节 刘清清 吴倩 陈希文 | 2021 | 黑龙江畜牧兽医2021，，8： | 1 |
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