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1肌醇激酶1在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞发生自噬过程中的作用显示文摘目的研究维生素E琥珀酸酯(vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌细胞自噬过程中肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)发挥的作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞,设置溶剂对照组(0.1%无水乙醇)、不同剂量(5、10、15、20μg/mL)VES组、4μ8C组(4μ8C为IRE1抑制剂)和VES+4μ8C组。Western blot检测对照组、不同剂量VES组内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein1 light chain 3,LC3)、Beclin-1,未折叠蛋白反应分支通路肌醇激酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、X-盒结合蛋白1(X box-binding protein 1,XBP1)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、p-JNK的蛋白表达水平;用4μ8C抑制IRE1,Western blot检测IRE1、XBP1、JNK、p-JNK、GRP78和CHOP的表达变化,同时检测LC3和Beclin-1的变化情况。结果20μg/mL VES组GRP78的表达(1.16±0.06)、CHOP的表达(1.36±0.11)均较溶剂对照组GRP78(0.36±0.10)、CHOP(0.48±0.05)明显提高(P<0.001);20μg/mL VES组Beclin-1的表达(1.09±0.20)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的表达(1.29±0.03)较溶剂对照组Beclin-1(0.27±0.07)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.43±0.06)明显增加(P<0.001);20μg/mL VES组IRE1(1.07±0.20)、XBP1(1.33±0.07)、p-JNK/JNK(1.19±0.31)的表达水平与溶剂对照组相比明显上升(P<0.01);抑制IRE1后:VES+4μ8C组的IRE1(0.63±0.27)、XBP1(0.74±0.09)、p-JNK/JNK(0.35±0.04)、GRP78(0.66±0.02)、CHOP(0.51±0.02)、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ(0.72±0.01)、Beclin-1(0.70±0.15)的表达水平均较VES组显著降低(P<0.05)。结论VES可通过上调IRE1通路参与对人胃癌细胞自噬的调控。冯雪 李碧彤 赵海霞 段宵阳 王弈丹 侯丽颖 2023卫生研究2023,52,1:2
2蛋白激酶R样内质网激酶参与维生素E琥珀酸酯激活人胃癌细胞内质网应激和自噬的调控显示文摘目的:研究蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)在维生素E琥珀酸酯(VES)激活人胃癌细胞发生内质网应激(ERS)与自噬中的影响。方法:体外培养人胃癌细胞系MKN28和MKN45,通过CCK-8法绘制细胞生长曲线,根据生长曲线确定用药剂量。不同剂量的VES处理细胞24 h后,qRT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和beclin-1的mRNA表达,Western blot检测GRP78、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1及PERK的蛋白表达。用2μmol/L GSK2606414(GSK)抑制PERK,设置对照组、GSK组、VES组和VES+GSK组,Western blot检测PERK、GRP78、LC3和beclin-1的蛋白表达。结果:CCK-8实验结果显示,VES对两种人胃癌细胞系的活力均有显著抑制作用(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,两种细胞中beclin-1和GRP78的mRNA表达均随着VES剂量的增加而不断升高(均P<0.05)。Western blot结果显示,与对照组相比,VES均可以显著上调两种细胞中GRP78、PERK、LC3和be⁃clin-1的表达(均P<0.05);抑制PERK后,两种细胞中p-PERK/PERK的比值显著下降(P<0.01),相较VES组,VES+GSK组GPR78、LC3和beclin-1的蛋白表达均显著降低(均P<0.05)。结论:VES激活人胃癌细胞发生ERS和自噬的同时上调PERK的表达,而PERK参与了VES对ERS和自噬的调节。卓翠竹 闻新奕 赵海霞 段宵阳 侯丽颖 2023中国病理生理杂志2023,39,5:0
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