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| 1 | 杆状病毒LEF-11蛋白自身相互作用关键区域的鉴定显示文摘【目的】家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm NPV)是蚕业上最常见且危害最为严重的病原微生物之一,其晚期表达因子(late expression factor,lef)LEF-11对病毒的增殖具有重要作用,相关研究证明LEF-11蛋白能够发生自身相互作用形成寡聚体,本研究通过逐步截短探究LEF-11蛋白自身相互作用的关键区域。【方法】利用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation)技术和荧光定位(fluorescent co-location)技术,首先根据Bm NVP lef-11及各个截短片段序列和荧光蛋白序列设计引物,通过PCR技术扩增回收得到所有片段以及荧光标签片段,并且通过限制性内切酶处理回收后,将荧光标签片段分别连接到昆虫细胞表达载体p IZ/V5-His上,构建p IZ-Ds Red和p IZ-EGFP质粒,然后用相同方法构建LEF-11全长和逐步截短的LEF-11红色荧光融合蛋白载体,分别与p IZ-LEF11-GFP共同转染到家蚕Bm N-SWU1细胞中,更换普通培养基48 h后固定细胞并制片,最后在荧光共聚焦显微镜下观察荧光融合蛋白表达及定位情况,鉴定LEF-11蛋白自身相互作用的关键区域;荧光双分子互补试验相关载体的构建步骤与荧光融合表达载体构建方法一致,转染处理及荧光观察方法也相同。【结果】杆状病毒LEF-11蛋白2—61和62—112端均能与LEF-11蛋白全长发生相互作用,分别共定位于细胞质和细胞核;逐步截短过程中,LEF-11蛋白N-端2—61、12—61、22—61、32—61、42—61和2—51均能与LEF-11蛋白全长共同定位于细胞质中,但其52—61、2—41未发生共定位;C-端截短片段能够与LEF-11蛋白全长发生共定位的有62—112、72—112、82—112、72—101和72—91,但92—112和72—81区域未发现共定位现象;双分子荧光互补试验结果验证LEF-11蛋白N-端片段与LEF-11蛋白全长相互作用的有2—61、12—61、22—61、32—61、42—61、2—51,而2—41、52—61截短突变体则不能,与N-端片段荧光共定位结果保持一致。【结论】鉴定到了杆状病毒LEF-11蛋白的42-51和82-91区域为其自身相互作用关键区域,可用于LEF-11相关功能研究。 | 蒋亚明 董战旗 陈婷婷 胡楠 董非凡 黄亮 唐良彤 潘敏慧 | 2017 | 中国农业科学2017，50，20： | 3 |
| 2 | 影响DpCPV杀虫剂高产条件的研究显示文摘DpCPV杀虫剂的产量不仅受到气候、环境等因素的影响,而且严重受到生产工艺技术水平的制约.针对DpCPV杀虫剂生产过程中工艺技术问题,我们对马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株在室内、室外和林间大量增殖中的集虫虫质、接种浓度、频率、收获时间等及其相互间的关系进行了详细研究,得出在DpCPV杀虫剂生产过程中接种1×107CPB/mL病毒浓度为宜,接种虫龄以4~5龄虫为宜,收获病毒时间13~14d为宜.其室外单虫病毒产量平均可达到7.5×108CPB,比国内报道要高.研究结果对DpCPV杀虫剂的高产增殖有很强的指导意义. | 徐红革 高嵩 白志强 洪靖君 丁强 肖宇宙 陈四 彭辉银 | 2003 | 中国病毒学2003，18，4： | 1 |
| 3 | 柞蚕核型多角体病毒泛素类似基因的克隆与序列分析显示文摘从感病的柞蚕Antheraeapernyi蛹中分离纯化柞蚕核型多角体病毒(ApNPV),提取基因组DNA,分别构建ApNPVDNA的HindⅢ和SalⅠ酶切片段文库。对基因文库中1个克隆进行序列分析,得到1个长度为321bp的序列,其中包含一个编码76个氨基酸的开放阅读框,预测的分子量为8.46kD,系泛素类似基因。在读码框的上游调控序列中,具有典型的晚期基因启动子序列ataag。氨基酸序列同源性分析结果表明,ApNPV与黄杉毒蛾Orgyiapseudotsugata核型多角体病毒(OpNPV)的同源性最高(96.1%),与苜蓿尺蠖Autographacalifornica核型多角体病毒(AcNPV)的同源性为86.8%,与棉褐带卷蛾Adoxophyesorana颗粒体病毒(AoGV)的同源性最低(71.1%),但与人类、线虫和酵母的泛素同源性分别为77.6%、76.3%和76.3%。一些氨基酸残基在真核生物中保守,在杆状病毒中不保守,个别氨基酸残基是杆状病毒所特有的,这些氨基酸序列的改变对杆状病毒泛素基因的作用有待进一步研究。 | 王利群 王文兵 沈卫德 乌慧玲 于峰 | 2005 | 昆虫学报2005，48，5： | 1 |
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