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| 1 | 碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响显示文摘目的 :探讨碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)和表皮生长因子 (EGF)对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法 :用体外细胞培养技术和噻唑蓝 (MTT)比色法 ,观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果 :0 .1~ 10 0ng/mLbFGF、0 .1~ 10ng/mLEGF对细胞有促增殖作用 ,并呈浓度依赖性 ,两种生长因子均在 10ng/mL浓度时作用最强 ,并于培养第 5d达到促增殖高峰。结论 | 邓蔓菁 金岩 史俊南 吕红兵 刘源 赵宇 | 2002 | 牙体牙髓牙周病学杂志2002，12，9： | 25 |
| 2 | 颅神经嵴干细胞的体外培养及其多向分化潜能研究显示文摘目的 分离培养颅神经嵴干细胞 ,探讨其体外生物学特征 ,为进一步研究其牙、颌向分化提供细胞来源。方法 取小鼠胚胎颅段神经管 ,组织块法无血清条件培养获颅神经嵴干细胞 ,形态学、BurdU掺入及免疫细胞化学法鉴定其生物学性状。结果 原代培养的颅神经嵴干细胞为梭形成纤维样细胞 ,表现为克隆样生长、自我更新能力和多向分化能力等干细胞性状 ,且特异性标记物HNK_1呈阳性表达。结论 本研究成功地获取保持有多潜能干细胞性状的颅神经嵴细胞 ,为深入研究其牙、颌向分化奠定基础。 | 田卫东 江宏兵 刘磊 汤炜 李晓东 | 2004 | 华西口腔医学杂志2004，22，3： | 7 |
| 3 | 颅神经嵴细胞向成骨细胞表型分化的诱导实验显示文摘目的 :观察颅神经嵴细胞 (CNCC)在体外是否可以向成骨细胞表型进行诱导分化。方法 :用标准的无血清培养液和含 10 -8mol/L地塞米松、5 0mg/L左旋抗坏血酸和 10mmol/Lβ -磷酸甘油钠的矿化诱导培养液对CNCC进行培养。 15d后取两组细胞用于实验 ,观察两组间细胞形态 ,群体倍增时间、活力细胞数、碱性磷酸酶的活性和OC的含量等方面的变化。结果 :诱导后的CNCC形态由成纤维样转变为多角形 ,细胞群体倍增时间延长 ,细胞活力数减少 ,碱性磷酸酶的活性和OC的含量升高。结论 :CNCC在特定的矿化诱导培养液中 ,可以向成骨细胞表型分化。 | 吕红兵 金岩 Tipoe GL Thomas Lau 王容 李媛 周峻 | 2002 | 牙体牙髓牙周病学杂志2002，12，8： | 2 |
| 4 | 人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞向永生化细胞的转变显示文摘背景:颅神经嵴干细胞可以作为颌面部各种组织和器官分化研究的重要细胞来源,如何使其获得永生化具有重要意义。人类细胞自发永生化的频率非常低,而一些永生化的基因可以显著增加这种频率。目的:观察人端粒酶催化亚基基因在大鼠颅神经嵴干细胞永生化过程中的作用。设计、时间及地点:观察性实验,于2007—09/2008-06在解放军第四军医大学完成。材料:选择清洁级孕8.5dSD大鼠3只,6周,体质量180g;先天性细胞免疫缺陷动物雄性Balb/c裸小鼠,体质量18~21g,均由解放军第四军医大学实验动物中心提供。质粒PCIneo-hTERT由解放军第四军医大学口腔医院牙体牙髓科提供。方法:原代培养大鼠颅神经嵴干细胞后,将含有人端粒酶催化亚基基因的质粒PCIneo-hTERT转入大鼠颅神经嵴干细胞。经G418筛选后扩增,并连续培养。采用免疫细胞化学法观察转染细胞内人端粒酶催化亚基基因和颅神经嵴干细胞的特异标志物P75的表达,检测细胞的端粒酶活性,绘制细胞生长曲线观察其增殖能力,并通过裸鼠移植实验了解转染细胞的特性。主要观察指标:细胞克隆、特异性蛋白P75表达、端粒酶活性、增殖能力及致瘤性实验结果。结果:①质粒PCIneo—hTERT转染细胞后24h,有少量细胞死亡。加G418后48h,细胞逐步开始大量死亡。12d后出现抗性细胞克隆,共有3个细胞克隆生长良好。分别命名为克隆1、2、3。克隆1和克隆2经过20~25代的传代后,细胞发生衰老、死亡:而克隆3在体外长期培养条件下生长状态良好,稳定表达人端粒酶催化亚基和P75。经转染后颅神经嵴干细胞的端粒酶活性明显升高,且能持续表达。②人端粒酶催化亚基基因转染后,3个细胞克隆在初期的增殖能力较强,随后克隆1、2的增殖速度逐渐变慢,出现死亡,克隆3越过衰老期,且无致瘤性。结论:人端粒酶催化亚基基因转染大鼠颅神经嵴干细胞后,细胞得以永生化,其表型稳定,可作为颅颌面部细胞分化和组织工程研究的种子细胞。 | 吕红兵 王捍国 吴甘茶 闫福华 | 2009 | 中国组织工程研究与临床康复2009，13，23： | 1 |
| 5 | 大鼠颌突外胚间充质细胞向骨骼肌细胞诱导分化和三维培养观察显示文摘目的:探讨体外诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化的潜能,利用分化细胞构建组织工程骨骼肌模型。方法:取妊娠10.5 d胎鼠颌突外胚间充质细胞,纯化后分别在含1、5、10 mL/L体积浓度二甲基亚砜的DMEM/F12培养基中培养。相差显微镜下观察细胞的形态变化,成肌相关因子免疫组化鉴定细胞性质,将诱导后的细胞种植于胶原膜,并于培养3、6 d后用光镜、扫描电镜观察细胞的生长情况。结果:培养3 d后,外胚间充质细胞形态出现成肌样细胞变化,细胞变得大而扁平,培养5 d后细胞出现管样结构。免疫组化鉴定显示:添加二甲基亚砜后,大部分细胞出现成肌相关因子的表达,其中5 mL/L实验组效果最好,约75%的细胞转化为骨骼肌细胞。对照细胞形态未见明显改变,免疫组化鉴定未能诱导分化出骨骼肌细胞。种植于BAM膜后,细胞生长良好,并可形成复层结构。结论:二甲基亚砜可诱导外胚间充质细胞向骨骼肌细胞分化,最佳浓度为5 mL/L;在BAM膜上分化细胞生长状态良好,说明该生物可降解膜是构建组织工程骨骼肌的适合材料。 | 姚远 聂鑫 金岩 | 2006 | 牙体牙髓牙周病学杂志2006，16，6： | 1 |
| 6 | rhBMP-2诱导颅神经嵴细胞向神经元分化的体外研究显示文摘目的 :观察重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP - 2 )对颅神经嵴细胞的诱导分化作用。方法 :分别用不含rhBMP - 2的无血清培养液和含有不同浓度rhBMP - 2的培养液对颅神经嵴细胞进行培养。 10d后 ,观察两组细胞的形态学差别 ,用胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经纤维细丝蛋白 (NF)、颅神经嵴细胞的特异性抗体P75等抗体进行免疫组化染色 ,鉴定细胞的分化状态 ,并计算NF阳性细胞数的百分比及进行统计分析。结果 :在含有rhBMP - 2的培养液中 ,颅神经嵴细胞的形态由成纤维细胞样向神经元样的表型进行转变 ,可见较长的细胞突起出现。NF染色结果阳性 ,而GFAP、P75染色结果阴性。 5 0ng/mL组中 ,NF的阳性细胞数比其它浓度组明显增多 ,并有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :rhBMP - 2可以诱导颅神经嵴细胞向神经元进行分化 ,5 | 吕红兵 金岩 Tipoe GL Thomas Lau 刘源 周峻 李媛 | 2002 | 牙体牙髓牙周病学杂志2002，12，9： | 0 |
| 7 | 重组人骨形成蛋白2诱导颅神经嵴细胞向肾上腺能神经元分化的研究显示文摘目的 :研究重组人骨形成蛋白 2 (rhBMP2 )诱导小鼠颅神经嵴细胞 (CNCC)分化后所产生的神经元类型是否为肾上腺能神经元。方法 :用 5 0ng/mlrhBMP2 诱导CNCC分化为神经元。提取诱导前后细胞内的总RNA ,用反转录聚合酶链反应 (RT -PCR)分别检测细胞中酪氨酸羟化酶 (TH )和γ -氨基丁酸受体 (GABAAR )亚单位的表达情况。结果 :诱导前的CNCC中 ,TH和GABAAR亚单位均无mRNA水平的表达 ,诱导后二者均有表达 ,但表达的量均低于脑组织中的表达。结论 :rhBMP2 诱导CNCC后所分化的神经元为肾上腺能神经元 ,但在功能上可能弱于正常的肾上腺能神经元。 | 吕红兵 金岩 李媛 Tipoe GL | 2003 | 临床口腔医学杂志2003，19，10： | 0 |
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