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| 1 | 牛去透明带卵体细胞核移植技术的应用研究显示文摘本研究通过进一步完善和简化'去透明带双半卵体细胞克隆牛技术',探讨了生产应用的可能性。结果表明:(1)在卵母细胞体外成熟发育的特定阶段(17~20h间)采用分期分批显微盲吸法去核,去核率可高达95%以上;(2)一次同时将2枚去核后的半卵和1枚供核体细胞粘合在一起,可大大提高电击融合效率;(3)克隆重构胚在DMAP中激活时间从4h延长至16h仍有较高的卵裂率和囊胚率;(4)利用OPS法玻璃化冷冻保存牛体细胞克隆胚胎,解冻后胚胎可用率极显著地高于常规慢速冷冻法;(5)利用改进后的体细胞核移植程序工厂化批量生产牛体细胞克隆胚胎,获得88.2%(2575/2920)卵裂率、41.6%(1215/2920)囊胚率、75.4%(916/1215)冻胚率,冷冻胚胎移植后30d妊娠率为28.1%(48/171)。结果说明,本研究的牛去透明带双半卵体细胞核移植技术已可达到克隆胚胎批量生产应用的水平。 | 谭世俭 QIAN Ling-mei 石德顺 | 2003 | 广西农业生物科学2003，22，3： | 14 |
| 2 | 牛体细胞核移植胚胎的批量化生产显示文摘利用2枚显微去核后的半卵与1枚供体细胞同步融合,并结合微穴法(WOWs)培养体系批量化生产成年牛克隆胚胎(日产40~80枚).结果,重构胚电融合率95.7%(3059/3197)、卵裂率87.1%(2637/3027)、囊胚率41.1%(1244/3027)和可冻胚率(72.5%,933/1244)均达到较高水平.克隆胚胎采用玻璃微管玻璃化冷冻保存数月后移植,30日龄时妊娠率为28.1%(48/171),已经产下5头足月克隆牛续.结果表明,该方法具有产业开发潜力. | 谭世俭 QIAN Ling-mei 石德顺 | 2007 | 中国兽医学报2007，27，2： | 7 |
| 3 | 牛IVF性控切割胚胎和整胚的冷冻保存研究显示文摘本研究分 3个实验对比了采用不同处理的常规冷冻和玻璃化冷冻保存 3 5 8枚体外受精 (IVF)性控切割囊胚和 3 2 6枚整胚的保存效果。结果表明 :(1 )用于冷冻整胚的常规方法对冷冻性控切割胚胎同样有效 ;(2 )利用含 1 0 % EG +1 0 % FBS的 DPBS冷冻牛 IVF性控切割胚胎或整胚的效果明显优于用含1 0 %甘油 +0 .4% BSA或 1 .4mol/ LEG+0 .1 % PVOH的 DMPBS;(3 )采用微玻管玻璃化冷冻保存牛 IVF性控切割胚胎的效果显著优于常规冷冻法。 | 谭世俭 | 2004 | 广西农业生物科学2004，23，1： | 6 |
| 4 | 绵羊卵母细胞OPS玻璃化冷冻效果初报显示文摘比较了绵羊卵母细胞不同发育阶段对OPS玻璃化冷冻效果的影响,同时比较了程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻的效果。结果显示:成熟培养0h(GV期)、16h、24h、26h的卵母细胞玻璃化冷冻、解冻后形态正常数差异不显著()P<0.05),培养24h卵母细胞冷冻保存后,分裂卵数、囊胚发育数与培养0h、16h、26h试验组差异显著(38.3%VS13.3%、26.7%、28.3%;11.7%VS0%、5.0%、8.3%,P<0.05),而培养16h、26h两个试验组之间差异不显著(P<0.05);程序化冷冻方法(参考胚胎程序化冷冻)、OPS玻璃化冷冻与不冷冻三组试验在形态正常数、分裂卵数和囊胚发育数上差异都极显著(20.0%VS54.1%、100%;6.7%VS37.5%、78.3%;0%VS11.4%、23.3%,P<0.01)。 | 张晓建 陈静波 张涌 | 2005 | 中国农学通报2005，21，5： | 4 |
| 5 | 哺乳动物卵母细胞冷冻保存研究进展显示文摘阐述了卵母细胞冷冻保存在核移植、体外受精、转基因生产及人类医疗等方面的意义,介绍了卵母细胞冷冻保存的方法、机理及冷冻保护剂的种类,论述了冷冻保存对卵母细胞发育的影响等问题。 | 梁素丽 李向臣 白修云 王有柱 关伟军 | 2007 | 安徽农业科学2007，35，20： | 4 |
| 6 | 比较四种冷冻载体在水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中的效果显示文摘目的探讨不同冷冻载体对水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存效果的影响。方法以体外成熟培养18h的水牛卵母细胞为实验材料,分别以0.25ml冻精塑料细管(A)、自制拣卵针尖端部分制成的极细玻璃微管(D)和两种制作核移植工具针的玻璃细管(B、C)为冷冻载体卵母细胞,解冻后统计成熟率及早期胚胎发育率等冷冻保存效果指标。结果A组卵母细胞冷冻保存效果最差(成熟率:AVSB、C、D为43.9%VS51.7%、51.9%、55.9%,2~4细胞率:AVSB、C、D为34.1%VS40.0%、40.7%、41.2%),D组卵母细胞冷冻效果最好,但解冻时卵母细胞的回收率显著低于其他组(DVSA、B、C为69.2%VS87.0%、94.1%、91.9%)。B、C两组在解冻后的成熟率及早期发育率上显著高于A组,低于D组,但差异不明显,且其解冻后卵母细胞回收率显著高于D组(P〈0.05)。结论综合回收率和解冻后早期胚胎发育率,B、C两种玻璃细管是一种水牛卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体。 | 唐业刚 陈玉峰 | 2008 | 生殖医学杂志2008，17，3： | 2 |
| 7 | 家畜胚胎冷冻保存研究现状显示文摘本文对家畜胚胎冷冻保存的原理、冷冻方法、冷冻保护液的成分、胚胎解冻方法与冷冻保护剂的脱除等研究现状进行了综述。 | 王长宏 王恒 王军 李喜春 | 2006 | 中国牛业科学2006，33，2： | 2 |
| 8 | 冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究显示文摘目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片(A)组、冷冻小钩(B)组、电镜铜环(C)组、自制冷冻叶片(D)组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义(P<0.01);D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。 | 金锐 白刚 包俊华 王莹 刘芳 | 2011 | 宁夏医学杂志2011，33，9： | 2 |
| 9 | 早期胚胎玻璃化冷冻保存技术研究进展显示文摘胚胎冷冻技术是胚胎移植真正走向商业化应用的关键环节,并受到广泛的关注,而玻璃化冷冻不仅具有操作时缩短、而且方法简易、不需要昂贵的设备,容易在生产中推广使用,因而日益受到人们的重视。本综述阐明了胚胎玻璃化冷冻原理,讨论了抗冻保护剂及其选择原则,比较了玻璃化冷冻技术各种方法及其优缺点,分析胚胎玻璃化冷冻的影响因素,展望了玻璃化冷冻技术的应用前景。 | 许伍霞 薛立群 | 2006 | 北京教育学院学报(自然科学版)2006，1，2： | 1 |
| 10 | 牛胚胎玻璃化冷冻技术的发展和应用概况显示文摘胚胎冷冻保存是动物胚胎工程的重要组成部分,它是胚胎移植技术在生产中推广应用的重要基础。和现在通用的常规冷冻法相比,玻璃化冷冻具有用时短,所需设备少和操作简单等优点,成为目前国内外胚胎冷冻保存领域发展新方向。本文就牛胚胎玻璃化冷冻的概念、方法和国内外发展状况做一简要综述。 | 幸宇云 黄路生 陈从英 | 2003 | 黄牛杂志2003，29，6： | 1 |
| 11 | 徒手切割法体细胞克隆研究进展显示文摘体细胞核移植技术目前主要局限性是需要显微操作仪以及相关设备,并且对技术人员也有较高要求。徒手切割法体细胞克隆(HM C)技术不需要显微操作,且对技术人员要求也不高,是一项手工化的核移植技术,对今后核移植技术的研究以及产业化的发展具有一定的推动作用。 | 田国富 谭世俭 李希 | 2006 | 广西农业生物科学2006，25，B09： | 1 |
| 12 | 血清添加时间及胚胎培养模式对产业化生产牛胚胎的影响显示文摘在利用体外受精技术产业化生产牛胚胎的体系中,体外受精卵一开始就培养在已加入犊牛血清(FBS)的改良SOF液的实验组,其卵裂率(80.6%,253/314)和可冷冻胚胎率(20.8%,129/620)与在体外受精(IVF)3 d后才往胚胎培养体系中加入FBS的结果差异不显著(相应为83.4%,262/314和24.4%,151/620,P>0.05);而囊胚率差异显著(分别为41.8%,259/620和48.5%,301/620,P<0.05)。在IVF后第3天将培养体系中的未受精卵及发育迟缓的2-细胞阶段胚胎剔除与否的不同胚胎培养模式对其后囊胚的产量和质量均无显著影响。 | 谭世俭 | 2005 | 广西农业生物科学2005，24，4： | 0 |
| 13 | 哺乳动物胚胎低温保存研究进展显示文摘胚胎冷冻是一项新的细胞冷冻保存技术,胚胎低温保存对于提高哺乳动物繁殖效率有很重要的意义,本文对家畜胚胎低温保存的特点,原理和方法进行了综述,并介绍了下班化冷冻保存的新方法。 | 邓双义 李海龙 袁江玲 | 2006 | 中国牛业科学2006，32，6： | 0 |
| 14 | 牛胚胎玻璃化冷冻保存研究进展显示文摘所谓的玻璃化冷冻就是在完全的玻璃化状态下冷冻保存细胞、组织或器官。为了在一定冷冻速度下形成玻璃化,需要使用高浓度的可渗透性低温保护剂。 | 史福艳 李建栋 董雅娟 柏学进 | 2007 | 黑龙江动物繁殖2007，15，1： | 0 |
| 15 | 影响山羊卵母细胞OPS法冷冻效果因素的研究显示文摘研究了不同玻璃化液、冷冻基础液以及卵母细胞的成熟阶段等因素对山羊卵母细胞OPS法玻璃化冷冻后发育效果的影响。结果表明,玻璃化液20%EG+20%DMSO和EDFS40对卵母细胞的冷冻保护效果间差异不显著。与成熟卵母细胞相比,未成熟卵母细胞对低温更敏感,使用现有的冷冻方法和冷冻保护液冷冻保存未成熟的山羊卵母细胞尚无法得到满意的结果。DPBS和M199均可作为配制冷冻保护液的基础液。 | 李雪松 桑润滋 李俊杰 孙树春 张国磊 | 2006 | 河北农业大学学报2006，29，3： | 0 |
| 16 | 小鼠胚胎的玻璃化冷冻研究显示文摘用不同冷冻载体(玻璃管、塑料管和0.25 mL细管)及不同冷冻方法(程序化冷冻和玻璃化冷冻)对小鼠3.5 d^4 d桑椹胚和囊胚进行冷冻保存,并与不做任何冷冻保存处理直接培养进行对比。结果表明,使用玻璃管、塑料管和0.25 mL细管作为胚胎的承载材料进行玻璃化冷冻,效果差异不显著;采用程序化冷冻与OPS玻璃化冷冻法,对小鼠胚胎进行冷冻保存可以取得较好的结果。从而得出,用不同材质的冷冻载体进行玻璃化冷冻,可以获得与程序化冷冻相同的良好效果。 | 李海龙 邓双义 袁江玲 陈静波 | 2006 | 动物医学进展2006，27，11： | 0 |
| 17 | 牛卵母细胞的玻璃化冷冻研究显示文摘本试验通过牛卵母细胞玻璃化冷冻过程中采用载体、冷冻时卵母细胞所带颗粒细胞层数和其成熟培养时间这3个方面对牛卵母细胞的玻璃化冷冻进行了探讨。(1)不同载体的对比:玻璃OPS管和塑料OPS管冷冻效果较好。玻璃OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为91.2%、41.3%和14.52%。塑料OPS管冷冻卵母细胞,解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为89.09%、40.90%和14.54%。(2)保留2￣3层颗粒细胞的卵母细胞玻璃化冷冻的冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为90.79%、40.13%和15.13%。(3)体外成熟培养22h的卵母细胞冷冻效果较好,其冷冻解冻后形态正常率、体外受精后卵裂率和囊胚率分别为94.14%、41.80%和15.23%。 | 霍飞 海丽且木 陈静波 杨焰 肖海霞 王玉红 | 2006 | 中国奶牛2006，，11： | 0 |
| 18 | 家畜卵母细胞冷冻保存技术研究进展显示文摘卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种实验材料,随着动物胚胎工程技术的迅速发展,卵母细胞的需求量急剧增加。卵母细胞冷冻保存技术可充分利用各种卵母细胞资源,为细胞核移植、体外受精、转基因生产等提供丰富而方便的材料来源,使这些技术不受时间、地域限制,可以随时随地进行,从而为其走向实用化、商业化发展开辟道路。本文就卵母细胞的冷冻保存技术做一简要的论述。 | 梁素丽 李向臣 白修云 王有柱 关伟军 | 2008 | 生殖医学杂志2008，17，1： | 0 |
| 19 | 去透明带体细胞核移植的牛囊胚质量检测显示文摘对来自6批次147枚采用去透明带-双半卵融合法(简称去透明带法)克隆的牛体细胞囊胚进行质量分级,然后除了20枚优质胚胎用来移植外,其余的127枚克隆囊胚均采用低渗分离细胞核法进行细胞计数。结果表明:127枚采用去透明带法克隆的7d囊胚细胞数平均为129.8个,其中优质大囊胚细胞数平均为218.9士45.0个(117~281),中等大小的优质囊胚细胞数为134.9±43.7个(85~233),不同体积大小的囊胚细胞数差异极显著(P〈0.01)。结果表明,从优质囊胚比例以及其细胞数来衡量,采用去透明带克隆方法可以获得质量较高的牛囊胚。 | 谭世俭 | 2007 | 广西农业生物科学2007，26，4： | 0 |
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