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| 1 | 玉米规模化转基因技术体系构建及其应用显示文摘玉米是世界种植范围最广、产量最高的粮食作物,为保证世界粮食安全做出了重要贡献。但是病虫害、杂草、干旱、盐碱等生物或非生物胁迫严重影响了玉米生产。培育具有抗虫、抗除草剂、抗病等性状的转基因玉米品种并应用到实际生产中,能够减少玉米产量损失,减少农药化肥使用量。玉米规模化转基因技术体系研究发展迅速,获得的抗虫、抗除草剂转基因玉米已在国外商业化种植18年,带来巨大的经济、社会和生态效益。全球转基因作物种植面积从1996年的170万公顷增加到2013年的1.75亿公顷。转基因玉米新品种培育需要较成熟的玉米规模化转基因技术体系。目前,商业化种植的转基因玉米都是从大量转基因玉米中选择的,具有外源基因单拷贝插入、遗传稳定、无载体骨架插入、目的基因表达合适、对玉米自身性状无影响等特点。国外大公司及部分公立研究机构建立了相对成熟的玉米转基因技术体系。中国玉米转基因技术体系研究起步较晚,目前初步建立了玉米规模化转基因技术体系,有必要进一步提高玉米遗传转化效率及规模化程度。玉米规模化转基因技术体系采用的主要方法是基因枪法和农杆菌介导法。文章详细介绍了2种方法的原理、发展过程及其应用。农杆菌介导法是目前最主流的植物遗传转化方法,具有成本低、外源基因拷贝数低、外源基因能稳定遗传表达等特点,更适用于规模化转基因技术体系。中国在玉米转基因技术体系研究及应用方面有很好的进展,在转基因受体材料选择、农杆菌侵染方法优化等方面对农杆菌介导的玉米遗传转化方法进行了系统优化,以国际上常用的玉米杂交种HiII及中国玉米优良自交系综31等为转化受体,建立了基于幼胚的玉米规模化转基因技术体系,并很好地应用于转基因玉米新品种的创制,获得大量具有生产应用价值的抗虫、抗除草剂转基因玉米。文章展望了玉米转基因技术体系的发展趋势,认为商业自交系作为外植体的筛选、转化事件单拷贝率的提高、无载体骨架序列转基因的提升、多基因转化技术、基因打靶技术、基因编辑技术及安全转化技术等方面是玉米转基因技术发展的趋势。中国应紧跟玉米转基因技术发展趋势,大力发展多基因转化技术、基因打靶技术及安全转化技术,使转基因玉米技术体系更好地服务于基因功能研究、转基因玉米产品研发等。中国通过玉米规模化转基因技术体系获得的转基因玉米将来进入产业化应用,将带来巨大的经济效益、社会效益和环境效益,并将推动玉米转基因技术体系的进一步发展。文章为玉米转基因技术体系优化和转基因玉米新材料获得等方面的研究提供一定的参考。 | 刘允军 贾志伟 刘艳 张登峰 黎裕 | 2014 | 中国农业科学2014，47，21： | 27 |
| 2 | 玉米转基因技术研究及其应用显示文摘随着植物转基因技术的深入发展,大豆、玉米、油菜和棉花等转基因作物大面积商品化生产为全球的粮食安全做出了巨大贡献。玉米是全球第一大粮食作物,自1986年以来玉米的转基因技术发展较快,其主要的遗传转化方法包括农杆菌介导法、基因枪法和花粉管通道法等,农艺性状改良涉及抗除草剂、抗虫、抗病、抗旱、抗盐和品质改良等,其中抗除草剂和抗虫玉米已成为主要的商业化转基因作物。本文综述了玉米转基因技术的研究进展及应用,展望了玉米转基因研究的发展方向。 | 尹祥佳 翁建峰 谢传晓 郝转芳 王汉宁 张世煌 李新海 | 2010 | 作物杂志2010，，6： | 25 |
| 3 | 双抗虫基因对三倍体毛白杨的转化和抗虫性表达显示文摘建立三倍体毛白杨叶片再生体系,用部分改造BtCry1Ac基因与慈菇蛋白酶抑制剂(API)基因构建的双抗虫基因表达载体,通过农杆菌介导法转化三倍体毛白杨无性系,在含卡那霉素50 mg·L-1的分化培养基上诱导产生不定芽的叶片占18%,在生根培养基上对转基因植株做进一步筛选,获得50个转化再生株系.PCR检测表明:80%的植株呈现阳性反应,部分株系进行Southern Blot检测,证明外源基因已经插入杨树基因组中.用Bt毒蛋白抗血清进行ELSA检测,结果表明:7个转基因株系都有Bt杀虫蛋白表达,表达量最高的株系约占叶总可溶性蛋白的0.016 1%.用经分子生物学检测的28个转基因株系叶片进行舞毒蛾和杨扇舟蛾幼虫饲虫试验,结果表明:不同株系幼虫杀死率明显不同,有39.3%的株系对舞毒蛾和杨扇舟蛾幼虫的致死率在80%以上;25.0%的株系对两种害虫的幼虫死亡率均在60%~80%之间;另有35.7%的株系幼虫死亡率在50%以下,有些株系基本未表现出抗虫性.同时具高抗虫性的转基因株系能够明显抑制存活幼虫的生长和发育. | 杨敏生 李志兰 王颖 王进茂 梁海永 | 2006 | 林业科学2006，42，9： | 23 |
| 4 | 农杆菌介导的高效玉米遗传转化体系的建立显示文摘为了建立玉米高频再生及高效遗传转化体系,对影响玉米胚性愈伤组织诱导的11个因素及影响胚性愈伤分化的9个因素用正交实验方法进行研究。结果显示,基因型对胚性愈伤诱导有极显著影响。6-BA、培养基、AgNO3、2,4-D、ABA对胚性愈伤诱导的影响达到显著水平。多重比较分析显示ABA2mg/L每间隔1代添加对胚性愈伤诱导率有显著影响。在影响分化的因素中,基因型和6-BA浓度表现出极强的主效应,NAA、培养基、KT、2,4-D对分化产生显著影响。Southern blotting分析表明,25mg/L潮霉素选择压下抗性愈伤率作为转化体系优化指标是可靠的。在影响转化效率的因素中,acetosyringone(AS)使用浓度因基因型不同而表现出敏感度差异,共培养温度24~25℃、农杆菌浓度和浸泡时间0.7OD×15min,以及pH值5.5~6.2是最高转化率的优选组合。在整合后的玉米遗传转化体系中,黄早4和综31自交系以抗性愈伤率为指标的GUS基因稳定转化率分别达到48.6%和46.2%。 | 魏开发 | 2009 | 遗传2009，31，11： | 22 |
| 5 | 农杆菌介导单子叶植物遗传转化问题与对策显示文摘尽管十几年来农杆菌介导的单子叶植物遗传转化研究取得了较大的进步,但仍存在着基因型限制、转化率不高和外源基因表达活性低等问题。本文综述了近几年来此项研究在感受态细胞选择与调节、预培养及共培养体系优化、转化子的筛选及外源基因表达调控等方面的主要进展。 | 魏开发 刘逸萍 林子英 杨雅芳 张泽宏 贾文锁 | 2008 | 植物学通报2008，25，4： | 19 |
| 6 | 生物技术在玉米育种中的应用显示文摘近年来生物技术在玉米育种中的应用取得了一定成果。通过转基因技术和SSR、AFLP分子标记的应用,加快了玉米研究进程,育成了抗虫、抗病、抗除草剂的玉米,有利于研究玉米群体遗传多样性,建立玉米杂种优势群,提高玉米QPM育种效率,缩短育种进程。但由于研究费用过高,基因技术与SSR标记缺乏有用的玉米基因,基因沉默现象也成为开展玉米生物技术育种的限制因素。随着生物技术的飞速发展及其研究的日趋成熟,在拓宽玉米自交系种质材料,提高杂交种抗逆、抗病性和产量,完善玉米转基因技术体系,发掘玉米高产、优质、高抗、高油、高直链淀粉基因并进行相关标记的定位等方面将发挥更大的作用,应用前景广阔。 | 吴永升 莫伟健 谭华 黄开健 刘丕庆 | 2006 | 广西农业科学2006，37，2： | 17 |
| 7 | 转基因技术在玉米遗传育种中的应用显示文摘玉米转基因育种是通过基因转移方法创造玉米新种质或新品种。将转基因技术与玉米常规育种技术相结合,能尽快地培育出符合育种目标的新品种,带来了育种水平的提高、创新和突破,加快了玉米育种进程。论述了转基因技术在玉米育种中的主要应用方法、研究进展及应用现状。随着转基因技术的飞速发展及其研究的日趋成熟,转基因技术在拓宽玉米种质资源、提高杂交种的抗逆性、抗病虫性、提高产量和品质等方面将发挥更大的作用,应用前景广阔。 | 张英 穆楠 朴红梅 | 2009 | 生物技术通报2009，25，1： | 14 |
| 8 | 共培养环境对玉米遗传转化的影响显示文摘以携带pCAMBIA1301(含GUS基因)质粒的EHA105菌株侵染玉米优良自交系齐319幼胚诱导的胚性愈伤组织,共培养5 d(特殊试验除外)后,对GUS基因瞬时表达率影响玉米转化的共培养环境进行研究。结果表明,玉米转化效率随共培养基pH降低而升高,临界共培养pH为5.2;共培养基中添加200μmol/L乙酰丁香酮(AS)对提高玉米愈伤组织的转化率是必要的;共培养3和5 d的GUS表达率呈现先升高后降低的趋势,以25℃共培养3 d的GUS表达率最高,为33.74%。 | 王宏伟 梁业红 史振声 张世煌 | 2011 | 西北农业学报2011，20，9： | 11 |
| 9 | 农杆菌介导的花生遗传转化体系的优化显示文摘以花生胚小叶及其诱导形成的愈伤组织为转化受体,采用农杆菌介导法,通过评估外植体GUS基因瞬时表达率,优化花生遗传转化条件。结果表明,侵染液中添加表面活性剂2-氮吗啉乙烷磺酸(MES)150mg/L或烟草提取物0.5ml/30ml有利于提高胚小叶外植体GUS瞬时表达率;采用针刺法辅助农杆菌介导转化,其胚小叶外植体多点GUS瞬时表达率(29.1%)明显高于未针刺的对照(12.1%);利用愈伤组织作为转化受体,其多点GUS瞬时表达率高达70.1%。利用此优化体系进行花生遗传转化,获得的抗性苗2011年经嫁接、移栽于试验田,PCR检测获得了T0代转基因植株,2012年部分T1代植株也检测出目的条带。 | 乔利仙 于新玲 隋炯明 范乾程 孙世孟 王晶珊 | 2012 | 核农学报2012，26，9： | 11 |
| 10 | 农杆菌介导法获得优良玉米自交系转Bt基因植株显示文摘用根癌农杆菌介导法将携带有苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因(Bt)和PPT乙酰转移酶基因(bar)的质粒pGBIL04导入优良玉米自交系340和4112经预培养的幼胚初始愈伤组织,抗性植株平均发生频率为11.21%,经PCR、PCR-Southern和Southernblotting检测证明外源基因Bt已稳定整合到13株玉米基因组中,平均转化率为2.35%。降低共培养温度到22℃的转化率最高达4.44%,Basta抗性检测bar基因也同时转移进再生植株中,部分转化植株已经结实。 | 张艳贞 王罡 魏松红 季静 | 2004 | 上海交通大学学报(农业科学版)2004，22，1： | 11 |
| 11 | 采用花粉管通道法将蛋白激酶基因导入玉米自交系的研究显示文摘通过花粉管通道法将ZmPti1,ZmPti1-1,ZmCIPK2三种蛋白激酶基因植物表达载体分别导入玉米自交系吉444,经草丁膦筛选后得40株抗性植株,通过PCR检测其中28株为PCR阳性植株,平均转化率为1.33%,最后收获11株转基因植株。干旱条件下通过对转基因T1植株的单株籽粒产量、千粒重两个指标进行差异显著性和耐旱系数的分析,结果表明,转基因植株与非转基因植株对干旱的敏感性不同,初步认为转基因植株具有抗旱性,表明蛋白激酶能够提高玉米的耐旱性。 | 石薇 黄丛林 张秀海 吴忠义 杨德光 | 2011 | 华北农学报2011，26，4： | 10 |
| 12 | 基于花粉介导法转化的玉米自交系抗病植株的获得显示文摘【研究目的】将几丁质酶基因导入玉米自交系,获得抗玉米丝黑穗病的转基因植株。【方法】采用花粉介导法进行转化,获得的种子及后代植株检测方法包括:潮霉素抗性筛选、PCR扩增、Southern blot杂交分析以及田间抗病鉴定。【结果】通过转化获得种子43粒,对种子进行潮霉素抗性筛选得到9株抗潮霉素植株;经PCR检测,Southern blot杂交分析得到5株转基因植株。田间抗病鉴定结果显示,转基因植株或株系的丝黑穗病抗性提高1~2级。【结论】花粉介导法转化玉米自交系是获得抗病育种材料的一条快捷、有效的途径。 | 杜建中 孙毅 王景雪 谢莉琴 郝曜山 贺健 | 2008 | 中国农学通报2008，24，5： | 10 |
| 13 | 玉米自交系幼胚再生体系建立的研究显示文摘[目的]探索出玉米高频诱导具有胚性的愈伤组织和植株再生的条件。[方法]以玉米自交系幼胚为外植体,研究了不同2,4-D浓度对愈伤组织诱导、6-BA浓度对试管苗分化以及IBA浓度对试管苗生根的影响。[结果]2,4-D对玉米胚性率诱导有明显影响,其最佳诱导培养基为N6+2,4-D 2 mg/L+水解酪蛋白(CH)500 mg/L+脯氨酸(pro)500 mg/L+AgNO310 mg/L;试管苗分化适宜的培养基是N6+6-BA 0.5 mg/L+水解酪蛋白500 mg/L;试管苗生根的最佳培养基为1/2 MS+IBA 0.5 mg/L。[结论]该研究可为玉米抗病基因的遗传转化和优良抗病玉米品种的培育奠定基础。 | 秦新民 曾德龙 覃屏生 | 2010 | 安徽农业科学2010，38，35： | 9 |
| 14 | 转基因技术在玉米种质改良中的应用显示文摘简述了玉米转基因工程中遗传转化的受体系统、目的基因和转基因技术的研究进展,分析了转基因技术在改良玉米品质、抗虫、抗病、抗除草剂、耐盐、抗旱、抗寒性、雄性不育、抗真菌和抗病毒病基因等方面取得的成效。 | 荆绍凌 孙志超 李淑华 | 2009 | 中国种业2009，，8： | 9 |
| 15 | 影响玉米胚状体建成关键因素研究进展显示文摘利用胚状体对玉米进行离体繁殖具有数量多、速度快、成苗率高、染色体稳定等优点。影响胚状体发生和分化频率的因素较多 ,主要集中在基因型、外植体、激素和培养基成份等几个方面。该文对胚状体诱导、分化的影响因素及其机理的最近研究进展进行综述。 | 魏开发 高武军 孙富丛 卢龙斗 | 2004 | 生物技术2004，14，2： | 8 |
| 16 | 玉米不同外植体愈伤组织的诱导研究进展显示文摘随着植物基因工程的发展,玉米的遗传转化已由理论研究转向应用研究,玉米组织培养是遗传转化中的一个基础而重要的环节。组织培养技术在玉米转基因育种中日益受到重视。本文从不同基因型玉米的幼胚、茎尖、成熟胚出发,综述了近年来玉米组织培养及植株再生的研究进展、影响因素以及存在的问题和解决办法。 | 陈莉 程朝霞 原红娟 | 2009 | 山东农业科学2009，41，4： | 7 |
| 17 | 农杆菌介导的玉米遗传转化研究进展、问题与分析显示文摘综述了农杆菌介导的玉米遗传转化的研究历程和现状 ,并对技术问题和未来发展趋势进行了分析和讨论。 | 张艳贞 王罡 季静 | 2003 | 东北农业大学学报2003，34，1： | 7 |
| 18 | 温度对根癌农杆菌转化效率的影响显示文摘以油菜下胚轴和玉米的幼胚为材料,研究19,22,25,28和31℃5个培养温度对含有Bar基因和几丁质酶基因的根癌农杆菌菌株LBA4404的转化效率的影响。结果表明,温度对玉米、油菜的转化效率都有明显的影响,玉米和油菜转化的最佳温度为25℃;25℃条件下,玉米的转化效率与其余4个温度条件下的转化效率有显著的差异;22℃条件下的油菜转化效率和25℃下的差异不显著。 | 高武军 魏开发 孙富丛 卢龙斗 王景雪 | 2004 | 华北农学报2004，19，2： | 7 |
| 19 | 农杆菌介导的玉米转基因研究进展显示文摘从转基因技术、农杆菌介导的受体以及影响农杆菌转化的因素和玉米转基因的现状等方面,综述了在玉米中农杆菌介导转基因的进展。 | 王秀芹 刘希桂 曲建平 高建强 王洪刚 | 2006 | 安徽农业科学2006，34，18： | 6 |
| 20 | 农杆菌介导Cry1 Ab/Ac抗虫转基因玉米植株的获得显示文摘转基因技术的迅速发展有效地打破了物种间的遗传壁垒,从而加快了优良基因定向聚合的进程,然而遗传转化率低及转基因安全问题成为制约其进一步发展的限制因素。基于此,本研究以玉米自交系H99为材料,将Ac/Ds双元表达载体(包含抗虫Cry1 Ab/Ac基因和gfp报告基因等)通过农杆菌介导法转入由110粒玉米幼胚诱导出的愈伤组织中,获得28株抗性转基因植株。经PCR及RT-PCR的验证结果显示,其中8株为含有Cry1 Ab/Ac目的基因且该基因有效表达的阳性植株,转化效率达7%。通过农杆菌介导法所获得的玉米转基因植株为今后剔除抗生素筛选标记,从而获得安全的玉米抗虫新种质提供了遗传材料。 | 葛敏 张体付 王华 陶跃之 赵涵 | 2012 | 江苏农业学报2012，28，2： | 6 |
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