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| 1 | 结核分枝杆菌FadD3结构与功能的生物信息学分析显示文摘目的应用生物信息学分析软件预测结核分枝杆菌脂酰辅酶A合成酶(FadD3)氨基酸序列的结构与功能。方法应用生物信息学在线工具NCBI(http://gffzz16a62c593b5540cehkoxbw0ovk9qw6vxf.ffgz.tsg.suse.edu.cn/)、Expasy(http://gffzz3af5319b25af4c54hkoxbw0ovk9qw6vxf.ffgz.tsg.suse.edu.cn/)、SWISSMODEL(http://gffzz69459e80a3da4c0ehkoxbw0ovk9qw6vxf.ffgz.tsg.suse.edu.cn/)、客户端软件clustalx等进行多重序列比较、同源性分析、同源模建及蛋白功能活性位点分析;应用ProtParam软件(http://gffzz40593ae2d60a41d0hkoxbw0ovk9qw6vxf.ffgz.tsg.suse.edu.cn/protparam)预测FadD3基因编码FadD3的蛋白理化性质;采用最小值进化法(the Minimum Evolution method)构建分子进化树。结果 FadD3(Mt-FACS)与其他物种的脂酰辅酶A合成酶(FACS)含相同的保守序列及催化活性位点,第174-185氨基酸残基是AMP结合部位,也是FadD3的保守区域;第422-497氨基酸残基是FACS与底物(脂酸)结合的部位,亦是结核分枝杆菌脂酰辅酶A合成酶的C末端。分子进化分析表明结核分枝杆菌脂酰辅酶A合成酶(Mt-FACS)与睾丸酮丛毛单胞菌脂酰辅酶A合成酶(CtFACS)的进化关系较近,与黑腹果蝇脂酰辅酶A合成酶(Dm-FACS)的进化关系较远。结论生物信息学预测提示FadD3是结核分枝杆菌脂类代谢及耐药性研究的潜在靶蛋白。 | 袁方 廖泽容 张璐 陈元晓 | 2015 | 中国病原生物学杂志2015，10，5： | 8 |
| 2 | 醛酮还原酶AKR7A3原核表达条件的优化及酶学活性检测显示文摘AKR7A3属醛酮还原酶是NADPH依赖型的氧化还原酶超家族的一员,参与人体内很多极为重要的生理活动。本文构建原核表达载体,优化表达条件,获得可溶性好、活性高的AKR7A3属醛酮还原酶。研究了温度、转速、诱导时间和IPTG浓度等不同条件对AKR7A3酶表达量的影响,并进行了酶活性动力学检测分析。在16℃、110rpm/min、20h、1.00mM/L诱导剂浓度时AKR7A3可溶性蛋白达到99.0%。酶活性动力学检测结果说明在37℃;PH=7.0;NADPH浓度2mmol/L;底物浓度在2.00mmol/L;加酶量100μL时酶活性最好,最佳反应底物为睾丸酮。成功在大肠杆菌中表达出高活性的可溶性酶蛋白,并获得了体外酶活性的最佳动力学条件,为后续AKR7A3基础研究和应用研究提供实验基础。 | 孙婷婷 孙基丰 周紫薇 褚春旭 张昊 | 2018 | 长春理工大学学报(自然科学版)2018，41，5： | 1 |
| 3 | 蓝藻Synechococcus elongatus PCC7 942荧光实时定量RT-PCR实验体系的优化显示文摘蓝藻(Synechococcu elongatus PCC 7942)是最简单的原核生物钟模式生物,研究其生物钟基因表达模式具有重要的科学意义.然而由于该蓝藻高质量RNA提取困难,目前应用荧光实时定量RT-PCR(qPCR)实验方案对其特定基因表达模式进行研究的报道较少.研究尝试通过对影响RNA提取质量的溶菌酶作用时间、起始细胞数量等因素,以及对影响qPCR反应特异性和重现性的c DNA模板浓度、引物浓度、引物退火温度等条件进行优化,初步建立了一套适用于S.elongatus PCC 7942的qPCR实验体系.结果表明震荡培养至OD750≈0.4时,取10 m L蓝藻细胞起始提取实验,使用3 mg/m L溶菌酶处理10 min后,再经试剂盒法提取总RNA的策略,RNA得率最高且质量最好.蓝藻的qPCR优化结果显示c DNA终质量浓度0.1μg/μL,引物终浓度4 pmol/L,并根据引物对Tm值调整退火温度是最佳反应条件. | 来盼 李鹏飞 蔡若淼 蔡静 卞乾笑 姜雅雯 常天亮 赵宇玮 许耀 | 2016 | 云南大学学报(自然科学版)2016，38，2： | 0 |
| 4 | 结核分枝杆菌新型亚单位疫苗的初步研究显示文摘为了研发结核新型亚单位疫苗,以纳米颗粒为载体展示结核分枝杆菌主要抗原ESAT6.将ESAT6基因片段克隆到位于pGEX-4T-1载体上的诺如病毒P结构域的Loop2中,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,用GST亲和柱纯化,并通过FPLC分析嵌合纳米颗粒的形成效率,最后免疫BALB/c小鼠进行免疫原性的评价.结果表明:研究成功地将ESAT6基因克隆至诺如病毒P结构域的Loop2中,且空间结构模拟提示ESAT6能展示在P纳米颗粒的表面.FPLC分析表明,表达的嵌合蛋白可以高效地自我组装成纳米颗粒.用该嵌合颗粒免疫小鼠后,能诱导产生针对ESAT6重组嵌合颗粒的特异性抗体.进一步分析发现,诱导的抗体主要针对ESAT6的51~70肽段,而不是1~20肽段.综上,研究通过诺如病毒P颗粒成功地展示了结核分枝杆菌主要抗原ESAT6,为进一步研发结核新型亚单位疫苗奠定了基础. | 时宇 陶玉芬 刘建生 刘红旗 | 2020 | 云南大学学报(自然科学版)2020，42，4： | 0 |
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