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| 1 | SLC22A3基因负性调控元件的定位显示文摘目的:拟寻找和确定人第6号染色体q26-q27区域的SLC22A3基因intron7序列中具有重要负性调控功能的核心调控元件的具体序列位置。方法:用基因重组的方法,分别构建intron7截短型野生重组质粒,分段查找该负性调控元件的具体序列位置。以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体为模板,PCR扩增所需截短型片段,分别插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Promoter,将重组质粒与内参质粒p RL-SV40以50∶1的比例共转染HEK293T细胞,24 h后检测荧光素酶活性(luciferase activity),通过对比重组质粒和pGL3-Promoter荧光素酶活性,判断插入片段是否具有调控作用,并对发现的元件进行转录因子结合位点预测。结果:截短型野生重组质粒pGL3-pro-SLCi7-NO6,pGL3-pro-SLCi7-NO10,pGL3-pro-SLCi7-NO6.2,pGL3-pro-SLCi7-NO6.3,p-GL3-pro-SLCi7-NO10.2,pGL3-pro-SLCi7-NO6.21,pGL3-pro-SLCi7-NO10.22各组荧光素酶活性较pGL3-Promoter组降低(P<0.05);而截短型野生重组质粒pGL3-pro-SLCi7-NO6.21-300 bp(P>0.05)和pGL3-pro-SLCi7-NO10.22-300 bp(P>0.05)组荧光素酶活性较pGL3-Promoter组无统计学差异。结论:人类第6号染色体q26-q27区域的SLC22A3基因intron7序列中存在2个负性调控元件,为今后进一步对SLC22A3基因蛋表达调控方面的研究提供了理论依据。 | 黄博 柳青 雷家俨 丁艳辉 封雪 雷寒 | 2015 | 重庆医科大学学报2015，40，9： | 1 |
| 2 | 冠心病相关SLC22A3基因中新发现负性调控序列的性质与功能鉴定显示文摘目的:拟对课题组前期发现的冠心病相关SLC22A3基因intron7区域中的2段DNA负性调控序列的性质及功能进行研究,以明确其为沉默子还是绝缘子。方法:利用生物信息学分析2段负性调控序列在所培养细胞系中的脱氧核糖核酸酶I(DNaseⅠ)的敏感性,并以包含人SLC22A3基因全长序列的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)为模板,PCR扩增2段负性调控序列,以pGL3-Control作为工具载体,将2段序列克隆入报告基因Luciferase(LUC)的启动子与增强子之间以及增强子的下游,构建4组重组质粒,并以pGL3-Control质粒作为空白对照,与内参质粒p RL-SV40共转染人胚肾细胞HEK293T,24 h后检测荧光素酶活性。结果:2段负性调控序列均位于DNaseⅠ超敏位点,明确了其为顺式调控元件的性质。4组重组质粒pGL3-con-SLCi7-447X、p GL3-con-SLCi7-447S、p GL3-con-SLCi7-460X及pGL3-con-SLCi7-460S荧光素酶活性分别为2.353±0.323、3.046±0.415、3.016±0.119、3.833±0.282,相较于空白对照pGL3-Control(7.423±0.230),荧光素酶活性均明显降低(P<0.05)。结论:SLC22A3基因的intron7区域中存在2个负性调控元件,其负性调控作用不受位置的影响发挥沉默子调控功能,为进一步对冠心病相关SLC22A3基因的表达调控研究提供了理论依据。 | 何佳静 夏云 丁艳辉 | 2020 | 重庆医科大学学报2020，45，4： | 0 |
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