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| 1 | 分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞显示文摘目的:建立稳定的同时分离原代大鼠肝细胞(HC)、肝星状细胞(HSC)和Kupffer细胞(KC)的方法,并初步评估其在体外培养的特征。方法:通过胶原酶原位灌注获得肝脏单细胞悬液,随后行等密度离心结合选择性贴壁纯化肝脏原代细胞,细胞的产量和活力经自动细胞计数仪计算出,纯度经免疫荧光、特殊染色及吞噬等实验进行鉴定。结果:大鼠原代HC产量为(21.0±8.2)×10~6/g肝组织,活力为92.1%±2.1%,纯度为96.5%±2.2%;原代HSC产量为(2.5±0.8)×10~6/g肝组织,活力为90.1%±3.8%,纯度为93.1%±1.5%;原代KC产量为(4.1±1.2)×10~6/g肝组织,活力为96.2%±2.7%,纯度为95.1%±1.4%。分离的HC、HSC和KC适合体外长期培养。HSC在体外培养过程中失去维生素A,逐渐向成纤维细胞表型转变。KC在体外可增殖,至14 d时仍表达CD68,具有较强的吞噬能力。结论:成功建立同时分离和培养大鼠HC、HSC和KC的方法,为进一步研究肝脏病理生理提供细胞基础。 | 蔡伟祥 方建凤 庄伟 李玉梅 | 2016 | 温州医科大学学报2016，46，9： | 6 |
| 2 | 转化生长因子β1刺激改良培养小鼠原代肝星状细胞的活化显示文摘背景:肝星状细胞是肝内分泌细胞外基质的关键细胞类型,因此在肝纤维化研究中很重要。目的:实验改良了肝星状细胞原代培养方法,获得充足的细胞量,用转化生长因子β1刺激活化,研究致纤维化的相关因子表达情况。方法:氯胺酮麻醉小鼠后采用门静脉穿刺原位灌注肝脏的方法分离肝脏,采用密度梯度离心获得肝星状细胞,利用形态学、免疫荧光染色等方法对原代肝星状细胞进行鉴定;将培养24 h肝星状细胞用质量浓度10μg/L转化生长因子β1刺激48 h,同时设PBS组进行对比。结果与结论:通过原位灌注肝脏并且酶消化的方法可以成功获得小鼠原代肝星状细胞,并且锥虫蓝染色活率为(97.2±0.8)%,免疫荧光染色纯度为(90.4±1.2)%,细胞计数总量约2.5×106/只。实时荧光定量聚合酶链式反应检测显示,与PBS组比较,转化生长因子β1刺激组的肝星状细胞平滑肌肌动蛋白α、Ⅰ型胶原蛋白、转化生长因子β受体1、转化生长因子β受体2 mR NA表达水平明显升高(P<0.05)。结果证实,实验采用的改良的培养方法可更高效高质量的获得原代肝星状细胞,转化生长因子β1刺激可导致肝星状细胞活化,分泌致纤维化因子。 | 毕晓娟 张传山 李亮 吕国栋 林仁勇 | 2015 | 中国组织工程研究2015，19，51： | 6 |
| 3 | 小鼠肝脏细胞分离和原代培养技术研究进展显示文摘肝脏是机体主要的消化、代谢器官,同时也是重要的免疫器官;获得肝脏细胞[肝细胞(hepatocytes,HCs)、肝血窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSECs)、肝星形细胞(hepatic stellate cells,HSCs)和枯否细胞(kupffer cells,KCs)等]并进行成功的原代培养,将有助于为研究肝脏的生物学特性(药物代谢、免疫及生理功能等)和“人工肝”工程等提供实验工具和材料;故探索和研究肝脏细胞的分离和原代培养技术具有重要意义。 | 杨东 刘鑫 郑新川 郑江 | 2015 | 重庆医学2015，44，34： | 3 |
| 4 | 原代肝星状细胞分离方法新进展显示文摘肝星状细胞(HSCs)又称储脂细胞、Ito细胞,是肝脏固有非实质细胞类型之一,在肝脏细胞中所占比例不到8%。它存在于肝窦内皮细胞与肝细胞之间的Disse间隙内,并以脂滴的形式储存人体维生素A。HSCs是细胞外基质的主要来源,它的活化是肝纤维化发生发展过程中的关键环节。原代HSCs分离方法的研究是进行肝纤维化发生机制研究的基础,是肝纤维化研究的热点之一。目前关于HSCs的分离方法有经典的肝脏二步酶灌注法、流式细胞术分选法、磁珠分选法等,本文就近年来原代HSCs分离方法新进展进行综述。 | 孔洋洋 刘立新 | 2017 | 中华消化病与影像杂志(电子版)2017，7，3： | 0 |
| 5 | 不同二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞的比较研究显示文摘目的:在现有二步酶灌注法分离大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)的基础上,探索更加高效的分离HSC方法。方法:分别采用链酶蛋白酶+胶原酶循环灌注、链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注以及胶原酶单独循环灌注法分离大鼠HSC,比较三种方法的细胞获得率、活性和纯度差异。应用0.4%台盼蓝染色判断活性,结蛋白(desmin)、波形蛋白(vimentin)细胞免疫荧光方法鉴定纯度。结果:链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注法细胞获得率高于另两种方法,细胞活力高于链酶蛋白酶循环灌注+胶原酶循环灌注法,三组得到的细胞纯度均高于90%且无显著差异。结论:在三种二步酶灌注方法中,链酶蛋白酶非循环灌注+胶原酶循环灌注法能显著提高HSC获得率,且对细胞活力影响小,不降低细胞纯度,是一种高效的分离方法,有利于HSC相关肝脏疾病的生物学研究。 | 张佳玲 张峰 边康麒 王晖晖 诸葛宇征 | 2014 | 现代生物医学进展2014，14，25： | 0 |
| 6 | 大鼠肝脏细胞同步分离与培养方法的建立显示文摘目的建立一种同时分离大鼠肝细胞(parenchyma cell,PC)、肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell,SEC)与库普弗细胞(Kupffer cell,KC)的操作方案。方法采用EDTA/胶原酶两步灌注法获取肝细胞悬液,通过低速离心首先分离出PC组分,然后通过链蛋白酶E去除非实质细胞(nonparenchymal cell,NPC)中的PC,最后通Nycodenz和Percoll溶液进行梯度离心分离并纯化HSC、SEC和KC,体外培养并观察各细胞表型和功能的变化。结果 PC、HSC、SEC和KC平均每克组织产量分别为(26±9.2)×10~6、(1.5±0.2)×10~6、(7.4±1.5)×10~6和(3.1±0.9)×10~6,活力分别为(93.1±2.3)%、(90.1±3.4)%、(96.2±2.1)%和(98.2±1.7)%,纯度分别为(98.5±1.2)%、(95.1±2.5)%、(93.6±3.6)%和(98.1±1.4)%;HSC在体外培养过程中逐渐丧失维生素A,转化为肌成纤维样(myofibroblast,MF)细胞;SEC在体外培养第3天出现凋亡,至7天凋亡达到顶峰,随后少量存活的细胞在体外增殖,至培养14天时形成典型的'铺路石'形态;培养14天的SEC保留清道夫功能,但丧失窗孔结构;KC可在体外增殖,培养至14天仍具有吞噬功能,表达特征性标志CD68。结论本方法可同时分离大鼠肝脏细胞,细胞数量、纯度和活力可满足下游实验。 | 潘艳 王万鹏 张启迪 华香 房凤梅 傅承宏 王维 | 2018 | 中国肝脏病杂志(电子版)2018，10，1： | 0 |
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