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| 1 | 狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法的建立显示文摘建立狂犬病病毒TaqMan qRT-PCR检测方法,并进行评价和初步应用。针对狂犬病病毒L基因保守区域设计特异性引物、探针,建立PCR反应体系并评价检测体系的扩增效率、灵敏度、特异性和准确性等指标,灵敏度评价结果与现有巢式RT-PCR和基于N基因qRT-PCR检测方法相比较。结果显示本研究建立的基于L基因qRTPCR检测体系扩增效率高于90%;最小检测病毒滴度为2.7×10-3FFU/mL,灵敏度高于基于N基因qRT-PCR和巢式RT-PCR 100倍;最小检测核酸拷贝数为100拷贝,建立了基于目的基因RNA标准品的标准曲线,可用于定量检测;对于我国的狂犬病病毒流行毒株检测范围较广,动物样本检测结果与金标准DFA检测结果相一致,准确性较高。本研究建立的狂犬病病毒qRT-PCR可用于狂犬病病毒实验室检测。 | 高鑫 刘佳佳 宋云 卢学新 朱武洋 | 2018 | 病毒学报2018，34，5： | 4 |
| 2 | 膜连蛋白A2基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用显示文摘为建立膜连蛋白A2(AnxA2)基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank中公布的AnxA2基因序列设计并合成引物,经过条件优化,建立了AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0.999;灵敏性好,比普通PCR灵敏100倍。应用建立的方法对随机选取的几种哺乳动物细胞进行检测。结果表明,建立的方法能成功检出不同细胞中AnxA2含量。表明本研究建立的AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法灵敏性高,重复性好,可用于AnxA2的检测及定量分析。 | 张海霞 马玉梅 包晓婧 徐雷 李向茸 谢晶莹 马忠仁 冯若飞 | 2015 | 动物医学进展2015，36，10： | 4 |
| 3 | 狂犬病病毒核酸诊断技术研究进展显示文摘狂犬病是由狂犬病病毒引起的人兽共患烈性传染病,发病后死亡率几乎为100%。近年来,我国狂犬病的发病率呈上升趋势,急需一种快速、简便、经济、准确、易于推广的实验室诊断方法。文中从基于PCR方法的核酸诊断技术、依赖核酸序列扩增技术、环介等温扩增技术、基因芯片技术等方面对目前国内外狂犬病病毒核酸诊断技术作一综述,并分析各种方法的优点和缺点,为狂犬病的临床快速诊断提供参考依据,以更好地预防和控制狂犬病。 | 路静 伊正君 付玉荣 | 2015 | 医学研究生学报2015，28，12： | 2 |
| 4 | 人源细胞间黏附分子-1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立、验证及应用显示文摘目的建立并验证细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,并用该方法检测不同细胞中ICAM-1的基因水平。方法根据GenBank中登录的ICAM-1基因序列设计并合成引物,建立ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR法,验证方法的适用性、线性范围、灵敏性、特异性及精密性。同时采用该方法对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)、人星形神经胶质瘤细胞(u251)、人原发性肝癌细胞(PLC/PRF/5)、人胚肾细胞(HEK293)及人脐静脉内皮细胞(HuvEc)进行检测。结果该方法的溶解曲线峰单一,无非特异性产物和引物二聚体;标准质粒在6.74×104~6.74×109 copies/μL浓度范围内与Ct值呈良好的线性关系,线性方程为y=-3.576 log x+42.982,R2=1.000;建立方法的灵敏性是普通PCR法的10倍;该方法检测不同物种细胞无交叉反应,仅能检出人源细胞ICAM-1;批内和批间CV均<1%。不同组织来源的细胞内ICAM-1基因含量不同,其中MRC-5细胞含量最高。结论成功建立了ICAM-1基因的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,且具有良好的特异性、灵敏性及精密性,可用于ICAM-1基因的定量检测。 | 张海霞 李生军 陈琳 韩玉梅 李倩 赵克学 李向茸 马忠仁 李琼毅 次仁扎西 冯若飞 | 2019 | 中国生物制品学杂志2019，32，10： | 1 |
| 5 | TMEM43基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用显示文摘根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR方法线性关系好,以标准品构建的标准曲线相关系数R2=1;灵敏性比普通PCR高10倍,能成功检出不同细胞中TMEM43表达量.表明建立的TMEM43SYBR Green Ⅰ real-time PCR检测方法可用于TMEM43基因表达的检测及定量分析,可为临床TMEM43相关疾病的检测及分析提供实验依据. | 张海霞 赵克学 邓盈盈 梁浩勤 李倩 韩玉梅 马忠仁 冯若飞 | 2018 | 西北民族大学学报(自然科学版)2018，39，4： | 0 |
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